師夢(mèng)凡，何文君，謝日青，劉艷麗，許瓊明，楊世林

(蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室，江蘇蘇州 215123)

枸骨Ilex Cornuta Lindl為冬青科常綠植物，主產(chǎn)于河南、湖北、湖南、安徽、江蘇等地，其根、枝、葉和果均可入藥，其葉既為常用中藥，也為苦丁茶的主要來(lái)源之一［1］。枸骨具有散風(fēng)熱、清頭目、解煩悶、活血脈的功能，亦用于冠心病心絞痛和高血壓癥［2］。枸骨根味苦，性涼，無(wú)毒，有補(bǔ)肝腎、健腰膝、除風(fēng)濕、涼血清熱作用。民間用于肝腎不足，關(guān)節(jié)疼痛，牙痛。

枸骨葉的主要化學(xué)成分包括黃酮及其多酚類(lèi)化合物、三萜及其皂苷類(lèi)等［3-5］。近年藥理學(xué)研究表明，枸骨葉具有抗心肌缺血、降血脂、抗氧化、免疫抑制、抗生育等廣泛的藥理作用［6-8］。研究發(fā)現(xiàn)枸骨根含有多種三萜和皂苷類(lèi)化學(xué)成分［9］，與枸骨葉的化學(xué)成分相似［10］，因此我們推測(cè)其可能具有心血管方面的活性。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)血瘀證大鼠模型，考察枸骨根對(duì)其血液流變性的影響，為枸骨根在治療血瘀證方面的研究和開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SD大鼠，180～220 g，雄性，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供 (許可證號(hào)SCXK(滬)2007-0005)。飼料和墊料由蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由采食和飲水。

1.2 試劑與藥品 鹽酸腎上腺素 (sigma公司，Lot:070M2015V);戊巴比妥鈉 (Germany，批號(hào)6900183);地奧心血康膠囊 (成都地奧制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)1010033);丹參片 (上海雷允上藥業(yè)有限公司，批號(hào)100916)。

1.3 枸骨根醇提物 由蘇州大學(xué)藥物化學(xué)教研室提供。枸骨根200 kg，用50%乙醇回流提取2次，提取液減壓濃縮得不含乙醇濃縮液。濃縮液 (100 L)過(guò)D101離子交換柱，用純水、30%、60%、90%乙醇洗脫，合并30%與60%乙醇洗脫部分作藥理研究。

1.4 儀器 LG-R-80B電腦血液黏度測(cè)試儀 (北京世帝科學(xué)儀器公司);H1850R離心機(jī) (長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 模型制備 大鼠隨機(jī)分6組，即正常對(duì)照組、模型組、枸骨根提取物 (30，60 mg/kg)組、丹參片組 (300 mg/kg)和地奧心血康 (300 mg/kg)組。連續(xù)灌胃給藥14 d，末次給藥1 h后，除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠皮下給予鹽酸腎上腺素注射液0.8 mg/kg，共2次，間隔時(shí)間為4 h。第1次皮下給予鹽酸腎上腺素0.8 mg/kg后2 h，將大鼠置于0～2℃冰水中游泳4 min，造成大鼠急性血瘀模型。最后一次皮下注射鹽酸腎上腺素后大鼠禁食不禁水飼養(yǎng)。次日以戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，腹主動(dòng)脈取血 (肝素抗凝)，檢測(cè)［11］。

2.2 血液流變學(xué)測(cè)定 取上述各組大鼠肝素抗凝后的血液每只5 mL，用LG-R-80 B型血液黏度儀進(jìn)行全血黏度、全血還原黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞壓積等指標(biāo)的測(cè)定，并計(jì)算紅細(xì)胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)與血沉方程K值［12］。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)急性血瘀大鼠全血黏度的影響 與空白組相比，模型組全血黏度和全血還原黏度明顯升高，表明血瘀模型成立。而給藥組均能降低全血黏度和全血還原黏度，其中枸骨根醇提物 (60 mg/kg)可以顯著降低全血黏度 (P＜0.05，P＜0.01)，枸骨根醇提物 (30 mg/kg)可以顯著降低全血高切黏度 (P＜0.05)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 枸骨根醇提物對(duì)血瘀大鼠模型全血黏度的影響 (ˉ，n=10)

表1 枸骨根醇提物對(duì)血瘀大鼠模型全血黏度的影響 (ˉ，n=10)

注:模型組與正常組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;給藥組與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

全血黏度全血還原黏度組別 劑量/(mg·kg－1低切 中切 高切 低切 中切 高切正常組 － 7.88±1.00 4.61±0.47 3.91±0.27 17.38±2.16 9).10±0.98 7.31±0.50模型組 － 17.75±4.91＊＊ 7.53±0.97＊＊ 6.37±0.58＊＊ 34.69±11.35* 13.02±2.49* 10.47±1.30＊＊枸骨根提 30 13.14±3.25 6.28±0.98 5.35±0.59# 27.72±6.77 11.70±1.88 9.54±1.02取物 60 11.04±1.47# 5.85±0.56# 5.08±0.40# 23.30±3.00 10.83±1.08 8.98±0.76丹參組 300 10.33±0.49# 5.50±0.23## 4.77±0.27## 22.58±1.53 10.49±0.47 8.64±0.47#心血康組 300 12.71±0.74 6.61±0.59 5.63±0.70 26.67±1.11 12.29±0.38 9.96±0.78

3.2 對(duì)急性血瘀大鼠血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)的影響 與空白組相比，模型組大鼠血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)均增高，給藥組均能降低這些指數(shù)，其中枸骨根醇提物 (60 mg/kg)可以顯著降低紅細(xì)胞壓積、血沉和血沉方程 (P＜0.05，P＜0.01);枸骨根醇提物 (30 mg/kg)可以顯著降低血沉和血沉方程 (P＜0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 枸骨根醇提物對(duì)血瘀大鼠血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)的影響(ˉx ± s，n=10)

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用血液流變學(xué)的指標(biāo)觀察枸骨根醇提物不同劑量對(duì)血瘀大鼠的影響。血液流變學(xué)是研究循環(huán)血液的流動(dòng)性、變形性、凝固性、黏彈性以及心血管黏滯性的科學(xué)。血液黏度是衡量血液流變性的指標(biāo)，而血漿黏度、紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞聚集性等是決定血液黏度的內(nèi)在因素［13-15］?？梢砸罁?jù)這一指標(biāo)衡量是否“血瘀”。

由血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)變化可知，枸骨根醇提物不同劑量組均能改善血瘀大鼠異常的血液流變性，降低其全血黏度、全血還原黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)，使其血液循環(huán)狀態(tài)得到明顯改善，這在一定程度上證實(shí)了枸骨根的活血化瘀作用。

本實(shí)驗(yàn)研究了枸骨根對(duì)改善急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的作用，證實(shí)了其活血化瘀的藥效，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成預(yù)防和治療血瘀疾病的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］中藥辭海編審組.中藥辭海:第2卷［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1996.

［2］邱豐艷，王小精.冬青屬苦丁茶的藥理研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35(32):10350-10352.

［3］楊雁芳，閻玉凝.中藥枸骨葉的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2002，9(4):33-34.

［4］羅源生，吳 忠，梁松慶.苦丁茶中總黃酮及微量元素研究［J］.廣東微量元素科學(xué)，1995，2(5):65-67.

［5］周永紅，王立升，韋藤幼.苦丁茶化學(xué)成分研究［J］.廣西大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，1999，24(3):203-204.

［6］李國(guó)文，吳 弢，謝 燕，等.中藥枸骨葉研究進(jìn)展［J］.國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2011，38(5):356-361.

［7］朱莉芬，李美珠，鐘偉新，等.苦丁茶的心血管藥理作用研究［J］.中藥材，1994，17(3):37-40.

［8］張 晶，林 晨，岑穎洲，等.枸骨葉抗真菌作用初探［J］.中國(guó)病理生理雜志，2003，19(11):1562.

［9］范琳琳，陳 重，許瓊明，等.枸骨根的化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2011，42(2):234-236.

［10］李維林，吳菊蘭，任冰如，等.枸骨的化學(xué)成分［J］.植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2003，12(2):1-5.

［11］李偉霞，黃美艷，唐于平，等.大鼠急性血瘀模型造模方法的研究與評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2011，27(12):1761-1765.

［12］秦任甲，馬國(guó)忠，溫彥生，等.臨床血液流變學(xué) ［M］.北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2003:91.

［13］秦任甲.臨床血液流變學(xué)［M］.北京:北京大學(xué)出版社，2003:83-96.

［14］馬 民.血瘀證形成的微觀機(jī)理研究［D］.濟(jì)南:山東中醫(yī)藥大學(xué)，2003:42.

［15］陳可冀，李連達(dá)，翁維良，等.血瘀證與活血化瘀研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2005，3(1):1-2.