阮柯凡

(越州中學(xué)，浙江 紹興 312000)

芹菜提取液的GC/MS分析及致敏性試驗(yàn)研究

阮柯凡

(越州中學(xué)，浙江 紹興 312000)

采用超聲波提取方法提取芹菜的有效活性成分，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)提取樣品進(jìn)行化學(xué)成分分析；以豚鼠作為試驗(yàn)對(duì)象，用芹菜提取液對(duì)其皮膚進(jìn)行致敏性試驗(yàn)，根據(jù)GB15670—1995得出芹菜提取液對(duì)豚鼠的皮膚變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)度屬弱致敏物的結(jié)果.

超聲波提?。磺鄄?；豚鼠；皮膚；致敏

芹菜營(yíng)養(yǎng)十分豐富，芹菜的鮮、干品和種子均可入藥，有健神經(jīng)、促食欲、健胃、驅(qū)風(fēng)、排毒和通經(jīng)之功效.歷代醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)都有論述，認(rèn)為芹菜有“甘涼清胃、利口齒、利咽喉、明目、養(yǎng)精益氣、補(bǔ)血健脾、止咳利尿、降壓鎮(zhèn)靜”等功效[1-2].我們發(fā)現(xiàn)，芹菜在生長(zhǎng)過(guò)程中，幾乎不受病與蟲(chóng)的侵害，一般不需要噴灑農(nóng)藥.于是，便有了從芹菜中提取有效活性成分研制綠色農(nóng)藥的設(shè)想.為此，我們對(duì)芹菜提取液作了生物活性和皮膚致敏性試驗(yàn)，以及經(jīng)皮毒性試驗(yàn)和刺激試驗(yàn)等毒理學(xué)研究.本文用豚鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物，以芹菜提取液對(duì)其皮膚進(jìn)行致敏性試驗(yàn)，并對(duì)芹菜提取液的成份用GC/MS進(jìn)行分析，旨在為“芹菜源綠色農(nóng)藥”的進(jìn)一步研究及推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1芹菜提取液的提取與檢測(cè)

采用超聲波提取技術(shù)從芹菜中提取有效成分，超聲波提取條件如下：室溫(在提取過(guò)程中，水溫上升10℃左右，該溫度不會(huì)對(duì)超聲波提取有機(jī)物的結(jié)果造成影響)；溶劑為丙酮和乙醇，體積比1∶1；時(shí)間為5 h/次[3-4].得“芹源素”原液

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 (6890N Network GC Systerm )檢測(cè)“芹源素”的化學(xué)成分.氣質(zhì)聯(lián)譜工作條件如下：色譜柱HP-5 ms,0.25 mm×30 m×0.25 μm；載氣He；載氣流量1 ml/min；進(jìn)樣溫度220℃；分流進(jìn)樣，分流比為80∶1；柱溫50℃(2 min)15℃/min,200℃(5 min)；進(jìn)樣量1 μL.EI離子源；離子源溫度280℃[5].

1.2試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件

健康豚鼠30只，雄性，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(醫(yī)動(dòng)字第22-2001001號(hào)).豚鼠著地圈養(yǎng)，底層覆蓋木屑及稻草，每天更換一次，以保持清潔和干燥.豚鼠以全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料喂養(yǎng)，每天給予一定量的干凈蔬菜.豚鼠飼養(yǎng)室保持通風(fēng)、干燥，室溫控制在20℃左右.

1.3檢驗(yàn)方法

將豚鼠分為受試組、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組3個(gè)組別，每組10只.采用經(jīng)皮膚染毒的方法進(jìn)行檢驗(yàn).

1.3.1 致敏接觸

實(shí)驗(yàn)前24 h，將受試組背部左側(cè)去毛2 cm×2 cm，將配制濃度為400 mg/ml“芹源素”藥液0.1 ml涂在2 cm×2 cm濾紙上，貼敷在剪毛區(qū)，用兩層紗布，一層塑料膜覆蓋，再以膠布固定，持續(xù)6 h.第7d和第14d以同樣方法重復(fù)1次.

陽(yáng)性對(duì)照組用2，4-二硝基氯代苯10 mg/ml的濃度0.1 ml以同樣方法致敏接觸3次.

陰性對(duì)照組不做致敏接觸.

1.3.2 激發(fā)試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前24 h，將受試組背部右側(cè)去毛2 cm×2 cm，于末次致敏接觸后14 d，將配制濃度為200 mg/ml“芹源素”藥液0.1 ml先涂在2 cm×2 cm濾紙上，然后貼敷在動(dòng)物剪毛區(qū)，覆蓋方法同致敏接觸，接觸持續(xù)6 h，最后去掉斑貼及受檢樣品，每日觀察染毒皮膚，記錄觀察結(jié)果至12 d.

陽(yáng)性對(duì)照組以2，4-二硝基氯代苯5 mg/ml的濃度0.1 ml以同樣方法做激發(fā)接觸，并觀察染毒皮膚，記錄觀察結(jié)果至第12 d.

陰性對(duì)照組以吐溫80和蒸餾水0.1 ml ，采用同樣方法做激發(fā)接觸，觀察染毒皮膚結(jié)果至第12 d.

1.4觀察時(shí)間與觀察指標(biāo)

觀察時(shí)間為接觸致敏的整個(gè)發(fā)病過(guò)程，即包括致敏和激發(fā)兩個(gè)過(guò)程.觀察染毒皮膚是否出現(xiàn)紅斑與水腫(不討論程度輕重).

2 結(jié)果與討論

2．1化學(xué)成分分析

在6890Network GC systerm中檢測(cè)樣品提取液，結(jié)果見(jiàn)圖1，并利用NIST 2002 MS數(shù)據(jù)檢索系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行分析，可得芹菜的化學(xué)成分(匹配度均在60%以上)，見(jiàn)表1.

圖1 芹菜超聲波提取液的總離子流圖

表1 芹菜的化學(xué)成分

續(xù)表1

2.2致敏性試驗(yàn)結(jié)果

“芹源素”對(duì)豚鼠皮膚致敏試驗(yàn)的數(shù)據(jù)見(jiàn)表2.

表2 “芹源素”對(duì)豚鼠皮膚致敏試驗(yàn)結(jié)果

按照GB15670—1995《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》中的皮膚變態(tài)反應(yīng)(致敏)試驗(yàn)結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，從表2的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出，陽(yáng)性對(duì)照組在激發(fā)接觸后，染毒皮膚出現(xiàn)程度不一的紅斑、水腫，致敏率為100%.陰性對(duì)照組在激發(fā)接觸后，染毒皮膚均未出現(xiàn)紅斑、水腫，致敏率為0.“芹源素”試驗(yàn)組在激發(fā)接觸后，染毒皮膚均未出現(xiàn)紅斑、水腫，致敏率為0.

[1]孫斌,瞿偉菁,張曉玲.芹菜素的藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥材，2004,27(7)：531-534.

[2]金陽(yáng).“芹源素”對(duì)小菜蛾和小白菜蚜蟲(chóng)的藥效試驗(yàn)[J].中國(guó)蔬菜，2008(4)：89-91

[3]何書美,劉敬蘭.芹菜中黃酮類物質(zhì)的提取和測(cè)定[J].分析試驗(yàn)室，2006,25(8)：84-87.

[4]許琦.芹菜總黃酮的提取及含量測(cè)定[J].食品科技，2006,31(7)：241-243.

Analysis of Celery Extract with GC-MS and Its Allergic Test

Ruan Kefan

(Yuezhou High School, Shaoxing, Zhejiang 312000)

Ultrasonic extraction was adopted to extract celery, whose chemical composition was analyzed by GC-MS. Skin sensitivity test of the celery extract was then carried out on the guinea pig. According to GB15670—1995 standard, it is concluded that celery extract is a weak skin allergic sensitizer on guinea pigs.

ultrasonic extraction; GC-MS; celery; guinea pig; skin; allergy

2014-08-10

阮柯凡(1996-)，男，浙江紹興人.

TQ450.2+6;O657.63

A

1008-293X(2014)09-0041-03

(責(zé)任編輯鄧穎)