程劉柯+貝盞臨+張欣
摘要:以水和95%乙醇為提取劑,采用超聲提取法提取寧夏枸杞 (Lycium barbarum L.) 花中的多酚類化合物。結(jié)果表明,水提取物和95%乙醇提取物中多酚類化合物分別含有60.75 mg和13.55 mg,總量為74.30 mg,約占干枸杞花的1.49%。
關(guān)鍵詞:枸杞 (Lycium barbarum L.);沒食子酸;總多酚
中圖分類號(hào):O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2014)17-4164-03
Determing the Total Polyphenol Content in Lycium barbarum Flowers
CHENG Liu-ke, BEI Zhan-lin, ZHANG Xin
(College of Biological Science and Engineering,Beifang University of Nationalities,Yinchuan 750021, China)
Abstract: Using H2O and 95% ethanol solution as extractant, polyphenol compounds were extracted from the dry flowers power of flowers of Lycium barbarum L. in Ningxia with ultrasonic-wave method. The results showed that 60.75 mg and 13.55 mg of polyphenol compounds were obtained from the extractive by H2O and 95% ethanol, solution respectively, accounting for 1.49% of dry flower.
Key words: Lycium barbarum L. flower; gallic acid; total polyphenol
枸杞(Lycium barbarum L.)全身是寶,《本草綱目》記載,“春采枸杞葉,名天精草;夏采花,名長生草;秋采子,名枸杞子;冬采根,名地骨皮”。枸杞花通常單生或二至數(shù)朵簇生于葉腋或短枝上紫色或淡紫色,花梗細(xì),花期4~10月。對(duì)枸杞的藥用成分及藥用機(jī)理等相關(guān)研究已相當(dāng)深入。
多酚是一大類廣泛存在于植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物,其含量僅次于纖維素、半纖維素和木質(zhì)素。狹義上認(rèn)為植物多酚是單寧或鞣質(zhì);廣義上還包括小分子酚類化合物,如花青素、兒茶素、櫟精、沒食子酸等[1,2]。目前植物多酚在很多方面都有深入研究[3-5],例如,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)(用于制螯合肥料),生態(tài)環(huán)境保護(hù)(用來降低廢水中重金屬毒害),食品工業(yè)(用作天然抗氧化劑),醫(yī)藥(具有抑菌、抗病毒、抗癌等作用)等方多面都有深入的研究,多酚類化合物具有很大的應(yīng)用價(jià)值。對(duì)枸杞花方面,沈劍明等[6]研究了寧夏枸杞的花聯(lián)合現(xiàn)象,劉蘭英等[7]對(duì)枸杞花色素提取工藝進(jìn)行了研究,貝盞臨等[8,9]研究了枸杞花的抗氧化活性、作用以及其總黃酮的含量,其他有關(guān)枸杞花有效成分方面的研究尚未見報(bào)道。本研究對(duì)枸杞花的總多酚含量進(jìn)行了相關(guān)研究,旨在為今后探索枸杞花的活性功能因子,為枸杞花的食用和開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
1.1.1 試驗(yàn)材料 新鮮的枸杞花于2012年8月采自寧夏中寧縣康灘枸杞園,標(biāo)本保存于北方民族大學(xué)生物科學(xué)系植物標(biāo)本室。將新鮮枸杞花(寧杞1號(hào))放置于陰涼處陰干,然后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,粉碎后的粉末放入干凈的密封塑料袋中保藏備用。
1.1.2 藥品 沒食子酸、Folin-Ciocalteu(1 mol/L)、碳酸鈉、無水乙醇(99.5%),以上試劑均為分析純,均購自北京化學(xué)試劑公司。
1.1.3 試驗(yàn)器材 FW100型高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)、FA2104B型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)、KQ-500B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)、減壓蒸餾裝置、ALPHA型冷凍干燥機(jī)(德國Marin Christ 公司)、4K15型離心機(jī)(Sigma公司)、UV765型紫外-可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 樣品的制備
1)水提取物的制備。稱取粉碎后的枸杞花5.0 g,置于250 mL錐形瓶,加入去離子水100 mL,用超聲儀(40 kHz,50 ℃)超聲提取50 min,得到的提取液經(jīng)真空抽濾,得到澄清的提取液。殘?jiān)萌ルx子水洗滌,并在相同的條件下提取2~3次,收集提取液,合并,減壓蒸餾得到濃縮液。
2)乙醇提取物的制備:向去離子水提取后的枸杞花殘?jiān)屑尤?0%的乙醇溶液,提取方法及步驟與去離子水提取方法相同。然后,再依次用85%和95%的乙醇對(duì)經(jīng)60%乙醇提取后的殘?jiān)俅芜M(jìn)行提取。合并以上60%、85%和95%乙醇提取液,對(duì)所得提取液進(jìn)行減壓蒸餾,得到乙醇提取液。將以上所得的乙醇提取液在-70 ℃下冷凍過夜。最后,用真空干燥機(jī)進(jìn)行真空干燥,真空干燥時(shí)間為27 h,干燥結(jié)束后收集粉末狀物質(zhì)。向粉末狀物體中加入95%乙醇溶液,得到可溶于95%乙醇溶液與不溶于95%乙醇溶液的沉淀。經(jīng)10 000 r/min離心15 min后,得到上清液,上清液即為溶于95%乙醇溶液,記錄最終體積,標(biāo)記為樣品95%乙醇提取物,4 ℃下保藏備用。離心得到的沉淀加入適量的去離子水,大部分溶于去離子水,再經(jīng)10 000 r/min離心15 min,得到溶于去離子水的上清液,此上清液與去離子水提取物溶液合并到一起,并記錄最終的總體積,標(biāo)記為樣品水提取物,在4 ℃下保藏備用。endprint
1.2.2多酚類化合物的測定 多酚類化合物的測定方法參照[10-12],略有改動(dòng)。
1)最大吸收波長的確定:精確稱取干燥至恒重的沒食子酸5.0 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,用去離子水溶解,定容至刻度,搖勻,即得到0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL,加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL;充分混勻后,在50 ℃水浴下保持10 min;迅速冷卻。同時(shí),以未加入沒食子酸的溶液作為空白溶液,于紫外-可見分光光度計(jì)在400~900 nm下進(jìn)行掃描。檢測最大吸收峰,最大吸收峰為753 nm。
2)多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精確吸取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL,于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6、7號(hào)的25 mL棕色容量瓶中;再依次加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL;最后用去離子水定容到25 mL;充分混勻,在50 ℃水浴下保持10 min;迅速冷卻。以0號(hào)作對(duì)照,于753 nm處測定不同濃度的沒食子酸對(duì)應(yīng)的吸光值。其中,0-7號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣最終得到的濃度為0.000、0.001、0.002、0.003、0.005、0.006、0.007 mg/mL。做3組重復(fù),取平均值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得出回歸方程。
3)樣品水提取物中多酚類化合物的測定:將樣品水提取物稀釋10倍;精確吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL液體于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6號(hào)的25 mL棕色容量瓶中。其余步驟同上。做3組重復(fù),以0號(hào)作對(duì)照,于753 nm處測定吸光度。取平均值,記錄各組數(shù)據(jù),繪制出吸光度隨樣品水提取物體積變化的曲線。在曲線上找到樣品水提取物稀釋10倍,取1 mL樣品所得到的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對(duì)應(yīng)的沒食子酸的濃度,進(jìn)而得出樣品水提取物的多酚類化合物的含量。
4)樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物的測定:精確吸取樣品95%乙醇提取物溶液0.0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0 mL于已標(biāo)記0、1、2、3、4、5、6號(hào)的25 mL棕色容量瓶中,其他步驟同樣品水提取物的測定步驟。記錄各組數(shù)據(jù),繪制出吸光度隨樣品95%乙醇提取物體積的變化曲線。在曲線上找到1 mL 95%乙醇提取物溶液所對(duì)應(yīng)的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對(duì)應(yīng)的沒食子酸的濃度,進(jìn)而得到95%乙醇提取物的多酚類化合物的含量。
由水提取物與95%乙醇提取物分別測定的多酚類化合物的含量可得出5 g枸杞干花粉末中含有的多酚類化合物的含量。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同溶劑提取所得體積
樣品水提取物的總體積為81 mL,樣品95%乙醇提取物的總體積為126 mL。根據(jù)樣品的總體積計(jì)算多酚類化合物和黃酮類化合物的總量。
2.2 多酚類化合物結(jié)果分析
在400~900 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,檢測出最大吸收峰波長為753 nm。由以上數(shù)據(jù)及曲線(表1-表3;圖1-圖3)表明,多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為:y= 100.500 0x+0.013 5(R2=0.999 3)。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測定的多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。
樣品水提取物稀釋10倍后,測定多酚類化合物得到的線性回歸方程為:y=0.325 2x-0.006 0 (R2=0.998 3)。則樣品水提取物稀釋10倍后,取1 mL測定的吸光度為0.319 2,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的沒食子酸濃度為0.003 0 mg/L,則樣品水提取物的多酚類化合物總量為60.75 mg。樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物測定得到的線性回歸方程為:y= 0.399 3x+0.045 5 (R2=0.993 4)。同樣的可以計(jì)算出樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物總量為13.55 mg??芍喾宇惢衔锎蠖嗫扇苡谒苄缘亩喾宇惢衔餅榇既苄缘?.48倍。5 g枸杞干花中含有的多酚類化合物為74.30 mg,即枸杞花中多酚類化合物含量約占1.49%。
3 小結(jié)與討論
采摘的寧夏本地的枸杞花陰干后,對(duì)干枸杞花依次采用水、60%、85%、95%乙醇反復(fù)提取,并借用超聲波(40 kHz)在50 ℃下提取50 min。得到的提取物經(jīng)減壓濃縮,真空抽濾等步驟,最終得到水相(樣品水提取物為81 mL)和醇相(樣品95%乙醇提取物為126 mL)兩種提取物。采用Folin-Ciocalteu法,以沒食子酸為參照品,在753 nm處測定樣品水提取物、95%乙醇提取物中多酚類化合物,得到兩者含量分別為60.75 mg和13.55 mg,很顯然水相中的多酚類化合物比醇相中的多,是其4.48倍,其中總多酚類化合物含量為74.30 mg,約占干枸杞花的1.49%。
參考文獻(xiàn):
[1] 尹志娜.植物多酚分離提取方法和生物功能研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)儀器,2010,8(6):43-49.
[2] 李群梅,楊昌鵬,等.植物多酚提取與分離方法的研究進(jìn)展[J].保鮮與加工, 2010,10(1):16-19.
[3] 李 健,楊昌鵬.植物多酚的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].廣西輕工業(yè), 2008(12):1-3.
[4] 陳 曌,曾健青,左雄軍,等.迷迭香脂溶性抗氧化劑總酚測定及其穩(wěn)定性研究[J].中國食品添加劑,2011(2):83-86.
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[8] 貝盞臨,張 欣,曹君邁,等.枸杞花總黃酮的測定[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,51(6):1240-1241.
[9] 張 欣,曹君邁,貝盞臨,等.枸杞花抗氧化作用的研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(3):301-303.
[10] 韓 菊,魏福祥.Folin-Ciocalteu比色法測定蘋果渣中的多酚[J]. 食品科學(xué),2010,31(4):179-182.
[11] 李巨秀,王柏玉.福林-酚比色法測定桑葚中的總多酚[J].食品科學(xué),2009,30(18):292-295.
[12] 丁 明,鐘冬蓮.茶油中總酚的測定方法[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010,30(6):1369-1371.endprint
1.2.2多酚類化合物的測定 多酚類化合物的測定方法參照[10-12],略有改動(dòng)。
1)最大吸收波長的確定:精確稱取干燥至恒重的沒食子酸5.0 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,用去離子水溶解,定容至刻度,搖勻,即得到0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL,加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL;充分混勻后,在50 ℃水浴下保持10 min;迅速冷卻。同時(shí),以未加入沒食子酸的溶液作為空白溶液,于紫外-可見分光光度計(jì)在400~900 nm下進(jìn)行掃描。檢測最大吸收峰,最大吸收峰為753 nm。
2)多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精確吸取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL,于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6、7號(hào)的25 mL棕色容量瓶中;再依次加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL;最后用去離子水定容到25 mL;充分混勻,在50 ℃水浴下保持10 min;迅速冷卻。以0號(hào)作對(duì)照,于753 nm處測定不同濃度的沒食子酸對(duì)應(yīng)的吸光值。其中,0-7號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣最終得到的濃度為0.000、0.001、0.002、0.003、0.005、0.006、0.007 mg/mL。做3組重復(fù),取平均值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得出回歸方程。
3)樣品水提取物中多酚類化合物的測定:將樣品水提取物稀釋10倍;精確吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL液體于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6號(hào)的25 mL棕色容量瓶中。其余步驟同上。做3組重復(fù),以0號(hào)作對(duì)照,于753 nm處測定吸光度。取平均值,記錄各組數(shù)據(jù),繪制出吸光度隨樣品水提取物體積變化的曲線。在曲線上找到樣品水提取物稀釋10倍,取1 mL樣品所得到的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對(duì)應(yīng)的沒食子酸的濃度,進(jìn)而得出樣品水提取物的多酚類化合物的含量。
4)樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物的測定:精確吸取樣品95%乙醇提取物溶液0.0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0 mL于已標(biāo)記0、1、2、3、4、5、6號(hào)的25 mL棕色容量瓶中,其他步驟同樣品水提取物的測定步驟。記錄各組數(shù)據(jù),繪制出吸光度隨樣品95%乙醇提取物體積的變化曲線。在曲線上找到1 mL 95%乙醇提取物溶液所對(duì)應(yīng)的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對(duì)應(yīng)的沒食子酸的濃度,進(jìn)而得到95%乙醇提取物的多酚類化合物的含量。
由水提取物與95%乙醇提取物分別測定的多酚類化合物的含量可得出5 g枸杞干花粉末中含有的多酚類化合物的含量。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同溶劑提取所得體積
樣品水提取物的總體積為81 mL,樣品95%乙醇提取物的總體積為126 mL。根據(jù)樣品的總體積計(jì)算多酚類化合物和黃酮類化合物的總量。
2.2 多酚類化合物結(jié)果分析
在400~900 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,檢測出最大吸收峰波長為753 nm。由以上數(shù)據(jù)及曲線(表1-表3;圖1-圖3)表明,多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為:y= 100.500 0x+0.013 5(R2=0.999 3)。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測定的多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。
樣品水提取物稀釋10倍后,測定多酚類化合物得到的線性回歸方程為:y=0.325 2x-0.006 0 (R2=0.998 3)。則樣品水提取物稀釋10倍后,取1 mL測定的吸光度為0.319 2,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的沒食子酸濃度為0.003 0 mg/L,則樣品水提取物的多酚類化合物總量為60.75 mg。樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物測定得到的線性回歸方程為:y= 0.399 3x+0.045 5 (R2=0.993 4)。同樣的可以計(jì)算出樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物總量為13.55 mg??芍喾宇惢衔锎蠖嗫扇苡谒苄缘亩喾宇惢衔餅榇既苄缘?.48倍。5 g枸杞干花中含有的多酚類化合物為74.30 mg,即枸杞花中多酚類化合物含量約占1.49%。
3 小結(jié)與討論
采摘的寧夏本地的枸杞花陰干后,對(duì)干枸杞花依次采用水、60%、85%、95%乙醇反復(fù)提取,并借用超聲波(40 kHz)在50 ℃下提取50 min。得到的提取物經(jīng)減壓濃縮,真空抽濾等步驟,最終得到水相(樣品水提取物為81 mL)和醇相(樣品95%乙醇提取物為126 mL)兩種提取物。采用Folin-Ciocalteu法,以沒食子酸為參照品,在753 nm處測定樣品水提取物、95%乙醇提取物中多酚類化合物,得到兩者含量分別為60.75 mg和13.55 mg,很顯然水相中的多酚類化合物比醇相中的多,是其4.48倍,其中總多酚類化合物含量為74.30 mg,約占干枸杞花的1.49%。
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[9] 張 欣,曹君邁,貝盞臨,等.枸杞花抗氧化作用的研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(3):301-303.
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[11] 李巨秀,王柏玉.福林-酚比色法測定桑葚中的總多酚[J].食品科學(xué),2009,30(18):292-295.
[12] 丁 明,鐘冬蓮.茶油中總酚的測定方法[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010,30(6):1369-1371.endprint
1.2.2多酚類化合物的測定 多酚類化合物的測定方法參照[10-12],略有改動(dòng)。
1)最大吸收波長的確定:精確稱取干燥至恒重的沒食子酸5.0 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,用去離子水溶解,定容至刻度,搖勻,即得到0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取0.05 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL,加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL;充分混勻后,在50 ℃水浴下保持10 min;迅速冷卻。同時(shí),以未加入沒食子酸的溶液作為空白溶液,于紫外-可見分光光度計(jì)在400~900 nm下進(jìn)行掃描。檢測最大吸收峰,最大吸收峰為753 nm。
2)多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精確吸取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL,于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6、7號(hào)的25 mL棕色容量瓶中;再依次加入Folin-Ciocalteu試劑1 mL和7.5%碳酸鈉溶液8 mL;最后用去離子水定容到25 mL;充分混勻,在50 ℃水浴下保持10 min;迅速冷卻。以0號(hào)作對(duì)照,于753 nm處測定不同濃度的沒食子酸對(duì)應(yīng)的吸光值。其中,0-7號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣最終得到的濃度為0.000、0.001、0.002、0.003、0.005、0.006、0.007 mg/mL。做3組重復(fù),取平均值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得出回歸方程。
3)樣品水提取物中多酚類化合物的測定:將樣品水提取物稀釋10倍;精確吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL液體于已標(biāo)記好0、1、2、3、4、5、6號(hào)的25 mL棕色容量瓶中。其余步驟同上。做3組重復(fù),以0號(hào)作對(duì)照,于753 nm處測定吸光度。取平均值,記錄各組數(shù)據(jù),繪制出吸光度隨樣品水提取物體積變化的曲線。在曲線上找到樣品水提取物稀釋10倍,取1 mL樣品所得到的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對(duì)應(yīng)的沒食子酸的濃度,進(jìn)而得出樣品水提取物的多酚類化合物的含量。
4)樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物的測定:精確吸取樣品95%乙醇提取物溶液0.0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0 mL于已標(biāo)記0、1、2、3、4、5、6號(hào)的25 mL棕色容量瓶中,其他步驟同樣品水提取物的測定步驟。記錄各組數(shù)據(jù),繪制出吸光度隨樣品95%乙醇提取物體積的變化曲線。在曲線上找到1 mL 95%乙醇提取物溶液所對(duì)應(yīng)的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相對(duì)應(yīng)的沒食子酸的濃度,進(jìn)而得到95%乙醇提取物的多酚類化合物的含量。
由水提取物與95%乙醇提取物分別測定的多酚類化合物的含量可得出5 g枸杞干花粉末中含有的多酚類化合物的含量。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同溶劑提取所得體積
樣品水提取物的總體積為81 mL,樣品95%乙醇提取物的總體積為126 mL。根據(jù)樣品的總體積計(jì)算多酚類化合物和黃酮類化合物的總量。
2.2 多酚類化合物結(jié)果分析
在400~900 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,檢測出最大吸收峰波長為753 nm。由以上數(shù)據(jù)及曲線(表1-表3;圖1-圖3)表明,多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為:y= 100.500 0x+0.013 5(R2=0.999 3)。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測定的多酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。
樣品水提取物稀釋10倍后,測定多酚類化合物得到的線性回歸方程為:y=0.325 2x-0.006 0 (R2=0.998 3)。則樣品水提取物稀釋10倍后,取1 mL測定的吸光度為0.319 2,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的沒食子酸濃度為0.003 0 mg/L,則樣品水提取物的多酚類化合物總量為60.75 mg。樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物測定得到的線性回歸方程為:y= 0.399 3x+0.045 5 (R2=0.993 4)。同樣的可以計(jì)算出樣品95%乙醇提取物中多酚類化合物總量為13.55 mg。可知多酚類化合物大多可溶于水,水溶性的多酚類化合物為醇溶性的4.48倍。5 g枸杞干花中含有的多酚類化合物為74.30 mg,即枸杞花中多酚類化合物含量約占1.49%。
3 小結(jié)與討論
采摘的寧夏本地的枸杞花陰干后,對(duì)干枸杞花依次采用水、60%、85%、95%乙醇反復(fù)提取,并借用超聲波(40 kHz)在50 ℃下提取50 min。得到的提取物經(jīng)減壓濃縮,真空抽濾等步驟,最終得到水相(樣品水提取物為81 mL)和醇相(樣品95%乙醇提取物為126 mL)兩種提取物。采用Folin-Ciocalteu法,以沒食子酸為參照品,在753 nm處測定樣品水提取物、95%乙醇提取物中多酚類化合物,得到兩者含量分別為60.75 mg和13.55 mg,很顯然水相中的多酚類化合物比醇相中的多,是其4.48倍,其中總多酚類化合物含量為74.30 mg,約占干枸杞花的1.49%。
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