王曉菁 吳燕 牛艷 趙子丹

摘要 [目的]建立蘋果及土壤中二氰蒽醌殘留量的高效液相色譜分析方法。[方法]蘋果、土壤樣品在酸性條件下用乙腈提取，經(jīng)C18凈化后，以水-乙腈為流動相（3∶7，V/V），在檢測波長254 nm 條件下采用HPLCUV測定了其中二氰蒽醌殘留量。[結果]方法的檢出限為9.5 μg/kg，平均添加回收率為82.8%～92.4%，相對標準偏差為0.8%～7.2%。[結論]方法快速、準確度高，適用于蘋果及土壤中二氰蒽醌殘留量的測定。

關鍵詞 高效液相色譜； 二氰蒽醌； 蘋果； 土壤； 殘留

中圖分類號 S482.2 文獻標識碼

A 文章編號 0517-6611（2014）31-10936-02

Deter mination of Dithianon Residue in Apple and Soil by HPLC

WANG Xiaojing，WU Yan*，NIU Yan et al （Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Yinchuan，Ningxia 750002）

Abstract [Objective] To establish HPLC method for deter mining dithianon residue in apple and soil.[Method] Soil and apple samples were extracted with acetonitrile，after purification by C18，with wateracetonitrile as mobile phase（3∶7，V/V），under the detection wavelength of 254 nm，dithianon residue was deter mined by HPLC.[Result] The method detectable limit is 9.5 μg/kg，the average recovery rate is 82.8%-92.4%，the relative standard deviation is 0.8%-7.2%.[Conclusion] The method is fast，simple and sensitive with good accuracy.

Key words HPLC； Dithianon； Apple； Soil； Residue

二氰蒽醌（Dithianon）是一種保護性殺菌劑，主要通過干擾細胞呼吸而抑制各種真菌酶，最后導致病害的死亡，同時具有保護活性和治療活性。它可防治蘋果、梨黑星病，蘋果輪紋病，柑橘瘡痂病、銹病，草莓葉斑病，攫桃銹病、炭疽病等^[1-3]。隨著二氰蒽醌的廣泛使用，其在農作物、環(huán)境中的殘留及對人類健康和環(huán)境的危害也越來越引起關注，為了全面評價二氰蒽醌的環(huán)境效應，指導其科學使用，建立二氰蒽醌的殘留分析方法顯得十分重要。目前，關于二氰蒽醌殘留的分析方法有QuEchERS前處理、高效液相色譜測定水果中殘留量^[4-7]。筆者建立了在酸性條件下以乙腈為提取溶劑，經(jīng)C18凈化，采用HPLCUV測定蘋果和土壤中二氰蒽醌殘留的分析方法，旨在為二氰蒽醌的殘留測定及安全使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑。乙腈（色譜純）、硫酸（96%，優(yōu)級純）、氯化鈉（分析純）、無水硫酸鎂（分析純）、去離子水、C18（DIKMA公司）和二氰蒽醌原藥（純度為96%，山東青島海利爾藥品有限公司提供）。

1.1.2 儀器。

勻漿機（T18basic 型，德國IKA 公司）、旋轉蒸發(fā)器（R215 型，瑞士步琪公司）、離心機（TD40L，上海安亭科學儀器廠）、電子天平（精度0.01 g， PL202L型，瑞士梅特勒-托利多儀器公司）和高效液相色譜儀（UV檢測器，20A型，日本島津公司）。

1.2 樣品分析 從試驗小區(qū)取回土壤樣品除去雜草、碎石，過篩。蘋果打成漿狀，備用。

1.2.1 蘋果樣品分析。稱取蘋果樣品10.0 g于50 ml離心管中，加入1.0 mol/L硫酸2 ml搖勻10 min后，再加入20 ml乙腈，高速勻漿2 min，加入3.0 g氯化鈉，蓋上蓋子，振搖約1 min，于4 000 r/min下離心5 min。取上清液2 ml于盛150 mg無水硫酸鎂及150 mg C18的15 ml離心管中，渦旋1 min，上清液過0.22 μm濾膜，待測。

1.2.2 土壤樣品分析。稱取土壤樣品10.0 g于50 ml離心管中，加入1.0 mol/L硫酸5 ml放置10 min，再加入20 ml乙腈，振蕩30 min，加入3.0 g氯化鈉，蓋上蓋子，振搖約1 min，于4 000 r/min離心5 min，上清液過0.22 μm濾膜，待測。

1.3 液相色譜條件 采用Agilent ZORBAX SBC18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長：254 nm；流動相：水-乙腈（3∶7，V/V），等度洗脫；流速：1.0 ml/ min；進樣量：5 μl。

2 結果與分析

2.1 標準工作曲線

稱取二氰蒽醌原藥0.010 4 g，用乙腈定容至10 ml，得濃度為1 000.00 mg/L的標準溶液。將上述標準溶液用乙腈稀釋成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L系列標準工作液，在“1.3”色譜條件下，對標準工作液和樣品等體積進樣進行測定。以二氰蒽醌標準溶液濃度與相對應的峰面積做線性分析（圖1），得回歸曲線y=16 662x-247.37，相關系數(shù)（r）為0.999 9（n=6），表明在該濃度范圍內呈良好的線性關系。二氰蒽醌標準系列圖譜見圖2。

2.2 回收率和精密度

分別在空白蘋果和土壤樣品中添加0.05、0.20、1.00 mg/kg 3個水平質量濃度的二氰蒽醌標準溶液，每個添加水平重復5次，在“1.3”色譜條件下測定回收率，同時測定蘋果和土壤空白樣品。由表1可知，蘋果中二氰蒽醌回收率為82.8%～87.2%，

變異系數(shù)為1.3%～2.3%；土壤中回收率為88.7%～92.4%，變異系數(shù)為0.8%～7.2%，回收率、精密度均符合檢測要求。以添加1.00 mg/kg二氰蒽醌為例，蘋果和土壤圖譜見圖3～6。

3 結論

試驗建立了在酸性條件下用乙腈提取、C18凈化的前處理方法和高效液相色譜—紫外檢測器測定蘋果和土壤中二氰蒽醌殘留量的檢測方法，并對方法的回收率、精密度進行分析研究。該方法能有效去除干擾，具有較好的精密度和準確度，符合農殘分析的要求^[8-9]。

參考文獻

MAYUMI U，GRAEME A，YASMIN K，et al.Environmental fate of pesiticdes used in Australian viticulture：Behaviour of dithianon and vinclozolin in the soils of the South Australian Riverland[J].Chemosphere，1997，35（12）：2915-2924.

[2] RALF U，MICHAEL M B.Effects of fungicide and insecticide mixtures on apple tree canopy photosynthesis，dark respiration and carbon economy[J].Crop Protection，2004，23：1001-1006.

[3] 伏松平，謝謙，魏支林，等.22.7%二氰蒽醌懸浮劑防治蘋果炭疽病田間試驗結果初報[J].甘肅農業(yè)科技，2003（10）：45-47.

[4] 李彩霞，王雅東.分散固相萃取- 高效液相色譜法測定水果中的二氰蒽醌殘留[J].廣東農業(yè)科學，2013（3）：110-117.

[5] 焦少俊，石利利，單正軍，等.二氰蒽醌在幾種典型土壤中的降解吸附和移動特性[J].農藥科學與管理，2012，33（11）：23-27.

[6] 石潔，徐亮，姜輝，等.二氰蒽醌的水解、光解和揮發(fā)性[J].農藥，2010，49（1）：23-25.

[7] 金銓.新型殺菌劑二氰蒽醌殘留與光解研究[D].杭州：浙江大學農藥與生物技術學院，2007.

[8] 李本昌.農藥殘留量實用檢測方法手冊（第1卷） [M].北京：中國農業(yè)科技出版社，1995：28-31.

[9] 樊德方.農藥殘留量分析與檢測[M].上海：上?？茖W技術出版社，1982：18-20.