周天浩，徐京，牟艷英，李晉生，解素花*

(1.北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司，北京 100079；2.北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司，北京 100079)

仙靈脾益源膠囊提取工藝研究△

周天浩1，2，徐京2，牟艷英1，2，李晉生1，2，解素花2*

(1.北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司，北京 100079；2.北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司，北京 100079)

目的：研究篩選仙靈脾益源膠囊的最佳提取工藝。方法：采用正交試驗設計，以淫羊藿苷和總黃酮為考察指標，對影響仙靈脾益源膠囊提取工藝的各因素進行研究。結果：仙靈脾益源膠囊最佳提取工藝為淫羊藿、骨碎補進行醇提，70%乙醇提取3次，每次用12倍量溶劑，提取1 h。結論：該法提取工藝具有較好的效果，提取工藝合理可行，可為工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

仙靈脾益源膠囊；淫羊藿苷；總黃酮；正交試驗設計

仙靈脾益源膠囊是針對骨質疏松癥的高危和發(fā)病人群，主要為絕經(jīng)后婦女和中老年人開發(fā)的具有輔助增強骨密度的保健食品。以中醫(yī)辨證論治思想為基礎，以骨質疏松常見證型脾腎陽虛、肝腎陰虛和氣滯血瘀為重點研究對象，從健脾溫陽、滋腎益肝、補精益髓、行氣活血入手來全面調理，補肝腎，強筋骨，益精髓，健脾益氣，活血通絡，增強臟腑功能，提高身體免疫力，降低骨質流失，調節(jié)骨代謝平衡，增加骨密度，有效改善骨質疏松癥狀。配方中淫羊藿味辛、甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)，有補腎陽，強筋骨，祛風濕功能，具有促進骨髓細胞DNA合成的作用[1-3]。骨碎補味苦性溫，歸肝、腎經(jīng)，有療傷止痛，補腎強骨功能，用于跌撲閃挫，筋骨折傷，腎虛腰痛，筋骨痿軟，耳鳴耳聾，牙齒松動，能促進骨對鈣的吸收，提高血鈣和血磷水平，有利于骨折的愈合，推遲骨細胞的退行性病變[1，4-5]。上述兩藥為治療骨質疏松癥之要藥，在仙靈脾益源膠囊方中為君藥。以淫羊藿苷和總黃酮為指標性成分，研究其復方飲片的提取工藝，從而優(yōu)化出合適提取工藝，為工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1100 series高效液相色譜儀(安捷倫公司)，DZF06050型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)，AB135-S電光分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料

淫羊藿苷、蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院)，淫羊藿、骨碎補(購于安國市羅深行中藥材有限責任公司)。

聚酰胺粉(柱層析80～100 目)；乙腈(色譜純)，純凈水(微孔濾膜濾過，0.45 μm)，乙醇(分析純)，甲醇(分析純)。

2 方法與結果

2.1 淫羊藿苷測定

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為waters symmetry C18柱(150 mm×4.6mm，5 μm)；以乙腈-水(30∶70)為流動相，柱溫30 ℃；檢測波長為250 nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷[1]峰計算應不低于4 000。

2.1.2 標準曲線的制備 精密稱取淫羊藿苷3.9 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度配置成儲備液。分別精密稱取儲備液0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度搖勻，取10 μL進樣，測定峰面積。進行線性回歸，得方程Y=13 063X+1.404 2，r=1.000。結果表明淫羊藿苷在39～312 μg·mL-1呈良好的線性關系。

2.1.3 供樣品溶液的制備及測定 取本品粉末(過50目)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理1 h，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 總黃酮測定

2.2.1 標準曲線的制備 精密稱取蘆丁15 mg于500 mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度配置成儲備液。分別精密稱取儲備液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于波長360 nm比色。進行線性回歸，得方程Y=3.927 1X+0.000 6，r=0.998 6。結果表明總黃酮在30～150 μg·mL-1呈良好的線性關系。

2.2.2 供樣品溶液的制備及測定 取本品粉末約1.0 g，加甲醇定容至25 mL，搖勻后，超聲提取20 min，放置，吸取上清液1.0 mL，于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉入層析柱。先用20 mL苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25 mL。此液于波長360 nm測定吸收值。根據(jù)線性回歸方程，計算試樣中總黃酮含量[6]。

2.3 正交試驗

淫羊藿和骨碎補都是常用中藥，其中淫羊藿有效成分為淫羊藿苷等黃酮類成分，骨碎補有效成分為總黃酮類化合物。本產(chǎn)品以淫羊藿苷和總黃酮為標志性成分，采用乙醇提取可取得較好效果。由于醇提具有設備普及、成本低廉、生產(chǎn)場地要求不高、容易操作的特點，適合工業(yè)化大生產(chǎn)；同時醇提方法在工業(yè)上一般采用熱回流法，可保留有效成分，達到去粗取精的目的。選用L9(34)正交設計，考察提取溶劑用量、乙醇濃度、提取時間、提取次數(shù)的具體工藝參數(shù)，以淫羊藿苷和總黃酮兩項指標的綜合評分來篩選最佳的提取工藝。綜合評分=淫羊藿苷總量+總黃酮總量。按仙靈脾益源膠囊配方中的飲片比例投料88 g,進行正交試驗，每項實驗均做2個平行，取平均值進行分析。正交試驗因素水平表見表1，正交試驗設計及結果見表2，方差分析見表3。

通過表2直觀分析，表明4種因素對淫羊藿苷和總黃酮提取的綜合評分影響程度依次為：B>A>C>D，其優(yōu)化組合為A3B2C1D3。表3方差分析顯示，乙醇濃度和溶劑用量對綜合評分影響有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提取時間和提取次數(shù)對綜合評分的影響不具有統(tǒng)計學意義。結合直觀分析和方差分析結果，最后優(yōu)選提取條件為：70%乙醇提取3次，每次用12倍量溶劑，提取1 h。

表1 仙靈脾益源膠囊提取工藝正交試驗因素水平表

表2 仙靈脾益源膠囊提取工藝正交試驗

表3 仙靈脾益源膠囊提取工藝方差分析

注：(1)n=2，(2)F(2，2)=19.0

2.4 驗證實驗

為確證工藝的穩(wěn)定性，根據(jù)篩選出的最佳提取條件進行驗證實驗，3批實驗結果見表4。結果表明，所篩選的提取工藝條件基本穩(wěn)定。

3 討論

淫羊藿、骨碎補為仙靈脾益源膠囊的君藥，兩者相輔相成，對于發(fā)揮整個組方的藥效具有決定性的作用，以淫羊藿苷、總黃酮為提取工藝的指標，并以二者的綜合評分作為篩選最佳工藝的依據(jù)，具有代表性和科學性。

實驗通過正交設計法對仙靈脾益源膠囊提取工藝進行優(yōu)選，以淫羊藿苷和總黃酮的綜合評分為考察指標，并考慮了節(jié)省能源和時間問題。按優(yōu)選工藝進行驗證實驗，結果穩(wěn)定性較理想，可為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：306-308，239-240.

[2] 譚清武.骨質疏松癥臨床驗方用藥規(guī)律探析[J].中醫(yī)研究，2004，17(3)：2-3.

[3] 趙麗娜.淫羊藿防治骨質疏松臨床效果評價[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2003，12(9)：922-923.

[4] 咎強，朱超.強骨湯治療腎虛型骨質疏松癥56例[J].陜西中醫(yī)，2006，(8)：957-959.

[5] 黃永明，許少健.骨松安膠囊治療絕經(jīng)后骨質疏松癥34例[J].陜西中醫(yī)，2006，(27)：954-956.

[6] 衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術規(guī)范[S].2003：308.

Study on the Extraction Process of Herba Epimedii Yiyuan Capsule

ZHOU Tianhao1，2，XU Jing2，MOU Yanying1，2，LI Jinsheng1，2，XIE Suhua2*

(1.BeijingZhongyanTongrentangChineseMedicineR&DCo.，Ltd.，Beijing100079，China；2.BeijingTongRenTangTechnologiesCo.，Ltd.，Beijing100079，China)

Objective：Study and choose the best extraction process of Herba Epimedii Yiyuan capsule.Methods：Use the orthogonal experimental design，the indexes icariin and flavonoids，to study the factors affecting the extraction process of Herba Epimedii Yiyuan capsule.Results：Extract the epimedii folium and the drynariae rhizome 3 times with 70% ethanol.And these two herbal medicines are extracted for one hour each time with 12 times volume solvent.Conclusion：This method has good effect on the extraction which is reasonable and feasible.Moreover，this method can also be the basis for industrial production.

Herba Epimedii Yiyuan Capsule；Icariin；Flavonoids；Orthogonal experimental design

國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)(SQ2009AA02XK1487510)

*[通信作者] 解素花，高級工程師，研究方向：中藥復方新藥開發(fā)；Tel：(010)87632553，E-mail：kjyr123@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.01.013

2013-07-22)