孫強，王濤，劉斌

(泰安市食品藥品檢驗中心，山東 泰安 271000)

HPLC同時測定保胎靈中芍藥苷和五味子醇甲的含量

孫強*，王濤，劉斌

(泰安市食品藥品檢驗中心，山東 泰安 271000)

目的：建立同時測定保胎靈中芍藥苷和五味子醇甲含量的高效液相色譜方法。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇為流動相A，水為流動相B，梯度洗脫；流速為0.8 mL·min-1；檢測波長為220 nm。結(jié)果：芍藥苷、五味子醇甲的線性范圍分別為0.052～1.04 μg(r=0.999 9，n=6)，0.055 8～1.116 μg(r=0.999 8，n=6)。加樣回收率分別為96.6%，96.1%(n=6)。結(jié)論：該方法可靠、準確、專屬性強，可有效控制保胎靈的質(zhì)量。

保胎靈；芍藥苷；五味子醇甲；高效液相色譜

保胎靈由熟地黃、五味子、白芍、巴戟天、槲寄生等14味中藥制成，具有補腎、固沖、安胎的功能，用于先兆流產(chǎn)，習慣性流產(chǎn)及因流產(chǎn)引起的不孕癥[1]。該品種收載于《衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑》第四冊，現(xiàn)行標準中僅有顯微鑒別以及片劑的檢查項目，且相關(guān)文獻也只有芍藥苷含量的高效液相測定方法[2-3]。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用HPLC梯度洗脫法在同一色譜條件下，選用合適的檢測波長分別對白芍中的芍藥苷以及五味子中的五味子醇甲進行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010液相色譜儀(島津)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品、五味子醇甲對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110736-201035，110857-201010)；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑為分析純；保胎靈(吉林國藥制藥有限責任公司，規(guī)格0.3 g/片：，批號：20121101，20120701，20120401)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇為流動相A，以水為流動相B，按表1進行梯度洗脫；流速：0.8 mL·min-1；檢測波長：220 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

表1 流動相洗脫程序

2.2 混合對照品溶液的制備

取芍藥苷對照品、五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含芍藥苷50 μg、五味子醇甲25 μg的混合對照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取保胎靈20片，除去包衣后，精密稱定，研細，再分別精密稱定本品粉末0.5 g，置錐形瓶中，精密量取25 mL甲醇，稱定，置水浴上加熱回流30 min，放冷，稱定，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方中的比例，取除白芍和五味子以外的其他中藥，按標準中的工藝制成陰性制劑，再按2.3制成陰性樣品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，在與對照品色譜相對應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，而陰性樣品溶液在此處無干擾。見圖1。

A.混合對照品 B.供試品 C.陰性樣品 1.芍藥苷 2.五味子醇甲圖1 保胎靈及對照品溶液HPLC圖

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密吸取每1 mL含芍藥苷104.0 μg、五味子醇甲111.6 μg的混合對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，10 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，得系列對照品溶液。分別吸取系列對照品溶液各10 μL注入液相色譜儀中，記錄峰面積。以對照品進樣量(μg)為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得芍藥苷回歸方程：Y=1.221×106X+70.1，r=0.999 9；五味子醇甲回歸方程：Y=6.737×106X+2.58×103，r=0.999 8。結(jié)果表明，芍藥苷在0.052～1.04 μg、五味子醇甲在0.055 8～1.116 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

精密吸取對照品溶液，重復測定6次，每次10 μL，測定峰面積，計算芍藥苷峰面積的RSD=0.66%(n=6)，五味子醇甲峰面積的RSD=0.59%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液(批號：20121101)，在配制后0，1，3，8，12，24 h精密吸取10 μL，注入液相色譜儀中，測定芍藥苷和五味子醇甲峰面積，計算芍藥苷峰面積的RSD=0.53%(n=6)，五味子醇甲峰面積的RSD=0.71%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復性試驗

取保胎靈(批號：20121101)樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，進行含量測定，結(jié)果芍藥苷平均質(zhì)量分數(shù)為1.13 mg·g-1，RSD=0.72%(n=6)；五味子醇甲平均質(zhì)量分數(shù)為0.672 mg·g-1，RSD=0.69%(n=6)，說明該方法重復性良好。

2.10 加樣回收試驗

精密稱取保胎靈(批號：20121101)樣品6份，各0.25 g，按2.3制備溶液后分別精密加入質(zhì)量濃度為0.101 2 mg·mL-1的芍藥苷對照品溶液3 mL(0.303 6 mg)、質(zhì)量濃度為0.112 2 mg·mL-1的五味子醇甲對照品溶液1.5 mL(0.168 3 mg)，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 保胎靈中芍藥苷和五味子醇甲回收率試驗

2.11 樣品含量測定

取3批保胎靈樣品，按2.3制成供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以外標法測定芍藥苷及五味子醇甲的含量，結(jié)果見表3。

表3 保胎靈中芍藥苷及五味子醇甲的測定 mg/片

3 討論

3.1 提取條件的選擇

分別考察加熱回流法、超聲提取法對芍藥苷和五味子醇甲的提取效率，結(jié)果表明，加熱回流提取效率更高；提取溶劑分別考察了純甲醇、80%甲醇、50%甲醇，結(jié)果表明純甲醇提取效果最佳；同時考察了體積分別為15，25，50 mL的甲醇，結(jié)果表明25 mL的甲醇即可完全提取，最終確定純甲醇25 mL加熱回流30 min作為提取條件。

3.2 檢測波長的選擇

取對照品溶液，按色譜條件在190～400 nm進行二極管陣列檢測，兼顧芍藥苷和五味子醇甲的紫外最大吸收波長，并查閱相關(guān)文獻[2-5]，最終確定檢測波長為220 nm。

3.3 流動相的選擇

分別考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.05%磷酸溶液，結(jié)果甲醇-水峰型較好，分離較理想。

3.4 指標成分的確定

保胎靈中白芍和五味子用量都較大，芍藥苷作為白芍的功效成分其在藥材中含量較高，且性質(zhì)穩(wěn)定；五味子醇甲作為五味子的專屬性成分，含量高且性質(zhì)穩(wěn)定，能夠和南五味子進行區(qū)別，所以選擇芍藥苷及五味子醇甲作為保胎靈含量的控制指標。與單一的芍藥苷含量指標[3-4]相比，增加五味子醇甲的含量指標更能體現(xiàn)中成藥復方整體作用的特點。實驗建立的方法可靠、準確、專屬性強，可有效控制保胎靈的質(zhì)量。

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑[S].第四冊.1991：133.

[2] 李妍，孫成娟，李桂明.保胎靈定性定量方法研究[J].中國藥品標準，2009，10(4)：268-271.

[3] 曾重英，龍海燕.高效液相色譜法測定保胎靈中芍藥苷含量[J].中國藥業(yè)，2011，20(9)：20-21.

[4] 施祖勇，譚軍.高效液相色譜法測定復方益肝靈片中五味子醇甲、五味子醇乙和五味子甲素的含量[J].中南藥學，2011，9(4)：264-267.

[5] 郭漢文，白旭東.HPLC雙波長法測定更年安膠囊中二苯乙烯苷和五味子醇甲的含量[J].西北藥學雜志，2013，28(3)：260-263.

DeterminationofPaeoniflorinandSchisandrininBaotailingTabletsbyHPLC

Sun Qiang*，Wang Tao，Liu Bin

(TaianFoodandDrugInspectionCenter，Taian271000，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of paeoniflorin and schisandrin in Baotailing tablets.Methods：The separations were performed on an Agilent ZORBAX SB C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm).The mobile phase consisted of methanol(A)-water(B)with gradient elution at a flow rate of 0.8 mL·min-1and the detection wavelength was 220 nm.Results：The linear range was 0.052～1.04 μg(r=0.999 9，n=6)for paeoniflorin and 0.055 8～1.116 μg(r=0.999 8，n=6)for schisandrin，respectively.The average recoveries of paeoniflorin and schisandrin were 96.6% and 96.1%(n=6).Conclusion：The method is reliable，accurate and specific，and can be used for the quality control of Baotailing Tablets.

Baotailing Tablets；Paeoniflorin；Schisandrin；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.11.012

2014-03-07)

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孫強，主管藥師，研究方向：中藥、中成藥、保健食品的質(zhì)量控制；E-mial：mobile1127@163.com