劉燕青　趙啟軍　何羽強等

【摘要】 目的：觀察嗅鞘細胞（OECs）聯(lián)合神經(jīng)干細胞（NSCs）對大鼠急性脊髓損傷及神經(jīng)營養(yǎng)素-3（NT-3）表達的影響。方法：SD大鼠80只，Allens法行急性脊髓損傷造模后，將大鼠按隨機數(shù)字表法分為對照組（假手術(shù)組）、實驗1組（NSCs移植組）、實驗2組（OECs移植組）和實驗3組（NSCs+OECs聯(lián)合移植組）。局部注射法進行細胞移植。于術(shù)前和術(shù)后1、3、5、7、14、21、28 d，采用BBB評分法、改良的Tralov評分法和斜板實驗，對大鼠后肢運動功能狀況進行評分，進行運動誘發(fā)電位（MEP N1波）潛伏期的檢測。最后，各組隨機抽取一只大鼠進行灌注、取材與固定，免疫組織化學(xué)染色的方法觀察各組NT-3在局部受損脊髓組織中的表達情況。結(jié)果：（1）造模及細胞移植術(shù)后，24 h時內(nèi)各組大鼠BBB評分及改良的Tralov評分均為0分；斜板實驗角度下降非常明顯，由實驗前（82.00±3.45）°降為（12.73±1.34）°，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各組MEP（N1波）潛伏期明顯延長。（2）隨著實驗的進行，各組均表現(xiàn)出不同程度的恢復(fù)情況：各實驗組BBB評分及改良的Tralov評分與對照組比較增高顯著（P<0.05）；1周后各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且各實驗組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。（3）斜板實驗角度也逐漸增加，1周后，實驗組增幅大于對照組（P<0.05）；1周后各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且各實驗組兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。（4）各組MEP（N1波）潛伏期均逐漸縮短，3 d后，各實驗組潛伏期縮短幅度均大于對照組（P<0.05）；3 d后各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且各實驗組兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。（5）各組大鼠受損脊髓組織中NT-3均有明顯增高，7 d內(nèi)維持在較高的水平，此后逐漸減少。其中從第5天開始，各實驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且各實驗組兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：（1）細胞移植治療大鼠急性脊髓損傷時，單種細胞單獨移植，OECs的治療修復(fù)效果要強于NSCs的治療修復(fù)效果，OECs與NSCs聯(lián)合移植取得的治療修復(fù)效果最好。（2）NT-3在OECs與NSCs細胞聯(lián)合移植組中表達最高。

【關(guān)鍵詞】 嗅鞘細胞； 神經(jīng)干細胞； 急性脊髓損傷； 神經(jīng)營養(yǎng)素-3

【Abstract】 Objective：To observe the impact of olfactory ensheathing cells combined neural stem cells in rats with acute spinal cord injury and neurotrophin-3 Expression.Method：80 SD rats were selected， after acute spinal cord injury modeling by Allen's method， the rats were randomly divided into the control group （sham group）， the experimental 1 group （NSCs transplantation group）， the experimental 2 group （OECs transplantation group） and the experimental 3 group （NSCs+OECs transplantation group）. Cells were used local injection method to transplant. In the preoperative and postoperative 1， 3， 5， 7， 14， 21， 28 days， adopt BBB score， improved Tralov score and inclined plane experiments were used to rate the status of rats hindlimb motor function， tested motor evoked potential（MEP N1 wave） preclinical. Finally， one rat in each group were selected， randomly， then perfused， drawn and fixed. Immunohistochemical staining were used to observe neurotrophin-3（NT-3） in the damaged spinal cord tissue localized expression in each group. Result：（1）After modeling and cell transplanting， the rats BBB rating and improved Tralov score was 0 points within 24 hours， inclined plane experiments angle decreased very significantly， from the previous experiment（82.00±3.45） ° reduced to（12.73±1.34） °（P<0.05）.Each groups MEP （N1 wave） latency was prolonged. （2）As the experiment progresses， the groups had shown varying degrees of recovery. Compared with the control group， the BBB score and improved Tralov score of the experimental group were increased significantly （P<0.05）； after 1 week， the differences of each group in each time point were statistically significant （P<0.05）， and the differences in each two of the experimental group were statistically significant （P<0.05）.（3）Oblique plate experiment angle also gradually increased， after 1 week， the experimental group was increased than the control group （P<0.05）； after 1 week， the differences of each group in each time point were statistically significant （P<0.05）， and the differences in each two of the experimental group were statistically significant （P<0.05）. （4）MEP （N1 wave） of each groups were gradually shortened in the incubation period； after 3 d， the incubation period shorten amplitude of the experimental group were greater than the control group （P<0.05）； after 3 d， the differences of each group in each time point were statistically significant （P<0.05）， and the differences in each two of the experimental group were statistically significant （P<0.05）.（5）The NT - 3 of damaged spinal cord tissue rats in each groups were significantly higher， 7 d maintain at a high level， then gradually reduced. Since 5 days， the difference of the experimental group and the control group was statistically significant （P<0.05）； the differences of each group in each time point were statistically significant （P<0.05）， and the differences in each two of the experimental group were statistically significant （P<0.05）.Conclusion：（1）When a single cell specie transplant to treat acute spinal cord injury alone， OECs transplantation has better restoration treatment effect than NSCs transplantation. OECs and NSCs transplantation group achieve the best results.（2）NT-3 expresses highest in the OECs and NSCs cell transplantation group.endprint

【Key words】 Olfactory ensheathing cells； Neural stem cells； Acute spinal cord injury； Neurotrophic-3

First-authors address：The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College，Baotou 014010，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.22.008

脊髓損傷（Spinal Cord Injury，SCI）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種嚴重創(chuàng)傷，近年來其發(fā)病呈逐年增多的趨勢[1]。如何有效地治療脊髓損傷已成為當(dāng)今研究的熱點難題[2]。在治療脊髓損傷眾多方法中，細胞移植的治療方法越來越受到人們的重視。本實驗采用局部注射法將神經(jīng)干細胞（NSCs）及嗅鞘細胞（OECs）分別、共同移植于大鼠脊髓受損區(qū)，通過行為學(xué)評價（BBB評分、改良Tarlov評分和斜板實驗）、電生理檢測（運動誘發(fā)電位）及免疫組織化學(xué)的方法觀測各種指標(biāo)，從而考察兩種細胞移植后在脊髓損傷區(qū)的存活、分化、表達及功能情況，以期為脊髓損傷的臨床治療提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD雄性大鼠購買自內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，共83只，其中3只（出生3 d內(nèi)）用于神經(jīng)干細胞及嗅鞘細胞的培養(yǎng)取材。余80只大鼠用于實驗。

1.2 主要試劑與儀器 試劑：DMEM/F12細胞培養(yǎng)液、B27、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）、表皮生長因子（EGF）、兔抗鼠巢蛋白（Nestin）單抗、兔抗鼠P75單抗、兔抗鼠NT-3單抗、異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記羊抗兔二抗、NT-3染色SP試劑盒等；儀器：5% CO2培養(yǎng)箱、倒置熒光顯微鏡、垂直流潔凈工作臺、電熱恒溫水浴鍋、玻璃細胞培養(yǎng)瓶等。

1.3 實驗方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)及鑒定 （1）神經(jīng)干細胞（NSCs）的培養(yǎng)及鑒定：新生（出生3 d內(nèi)）SD大鼠消毒后，引頸法處死。無菌條件下，充分暴露出嗅球、兩側(cè)大腦半球及小腦。外科顯微鑷剪斷與海馬有聯(lián)系的大腦皮質(zhì)或神經(jīng)組織，仔細剝離海馬。垂直流潔凈工作臺內(nèi)，無菌條件下將海馬表面的軟腦膜剔除干凈，4 ℃生理鹽水內(nèi)清洗3次后，將海馬放入DMEM/F12細胞培養(yǎng)液中，顯微鏡下用顯微外科剪將其剪碎，巴氏吸管先反復(fù)輕柔機械吹打分離，不銹鋼細胞濾網(wǎng)過濾后離心沉淀，最后將沉淀加入含bFGF、EGF和B27的DMEM/F12細胞培養(yǎng)液內(nèi)，細胞培養(yǎng)瓶中懸浮培養(yǎng)，置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3～4 d換液1次，每次換50%培養(yǎng)液。傳代一次約需5～7 d。第二代細胞用特異性Nestin抗原免疫熒光染色法鑒定NSCs。最后將細胞濃度調(diào)整為1×109/L，備用。（2）嗅鞘細胞（OECs）的培養(yǎng)及鑒定：同樣方法，無菌條件下取大鼠兩側(cè)嗅球后培養(yǎng)OECs。3 d全部換液1次。傳代1次約需16 d。第二代細胞用P75受體單抗免疫熒光染色法鑒定OECs。最后將細胞濃度調(diào)整為1×109個/L，備用。

1.3.2 實驗動物分組 SD雄性大鼠（體重200～300 g）80只，按隨機數(shù)字表法分為對照組（假手術(shù)組）15只、實驗1組（NSCs移植組）20只、實驗2組（OECs移植組）20只和實驗3組（OECs+NSCs聯(lián)合移植組）20只，剩余5只大鼠備用。分組完成后將大鼠做好標(biāo)記。

1.3.3 大鼠急性脊髓損傷Allens模型的制備及術(shù)后一般情況和處理 （1）模型制備：腹腔注射麻醉大鼠起效后，手術(shù)區(qū)備皮，將大鼠俯臥固定于手術(shù)臺上，消毒、鋪巾，背部正中切口，鈍性剝離椎旁肌，縫線牽拉開，顯露T10～12棘突、橫突及椎板。切除T10棘突及椎板下部、T12棘突及椎板上部和全部T11棘突及椎板，形成方形骨窗，充分暴露相應(yīng)脊髓節(jié)段（T11）的硬脊膜及椎管，作為打擊損傷區(qū)域。自制的改良Allens撞擊器15 g自6 cm高度自由落下，對T11段脊髓造成損傷，制成急性脊髓損傷動物實驗?zāi)Ｐ蚚3]。打擊完成后，4 ℃生理鹽水沖洗2次，依次逐層常規(guī)縫合切口。（2）術(shù)后一般情況和處理：術(shù)后大鼠禁食水?dāng)?shù)小時，以后逐漸增加進食水量至正常。7 d內(nèi)先單獨飼養(yǎng)，7 d后5只合籠飼養(yǎng)。術(shù)后7 d內(nèi)青霉素2×105 U肌注2次，預(yù)防傷口、肺部感染，每日飼喂呋喃坦啶水以預(yù)防泌尿系感染。大鼠術(shù)后出現(xiàn)尿潴留，在其恢復(fù)之前，每日應(yīng)給予按摩膀胱協(xié)助排尿3次。

1.3.4 局部注射法行細胞移植 進行細胞移植之前，先將部分NSCs與OECs混合，用于實驗3組的聯(lián)合細胞移植。各組細胞移植均在急性脊髓損傷動物實驗?zāi)Ｐ椭谱魍瓿?4 h以內(nèi)進行。操作方法：造模成功以后，4 ℃生理鹽水沖洗后，外科顯微鑷輕柔提起T11處硬脊膜，1 mL無菌注射器針頭在硬脊膜上刺一小洞，垂直進針，緩慢向該處硬脊膜下約3 mm、脊髓損傷方向插入，緩慢注入細胞懸液0.1 mL（細胞數(shù)約為1×105個）。關(guān)閉切口前，小塊可吸收明膠海綿微加壓填塞于硬脊膜進針點處，防止細胞移植液及大鼠腦脊液的滲漏。對照組生理鹽水代替細胞移植液，作陰性對照，余操作步驟與實驗組相同。

1.4 功能檢測

1.4.1 行為學(xué)評價 術(shù)前和術(shù)后1、3、5、7、14、21 d和28 d，隨機抽取實驗組15只大鼠及全部對照組大鼠，采用BBB評分法、改良的Tralov評分法和斜板實驗，對大鼠后肢運動功能狀況進行雙盲法評分，與手術(shù)之前相比較，以了解受損脊髓功能恢復(fù)情況。

1.4.2 神經(jīng)電生理檢測 運動誘發(fā)電位（MEP N1波）的檢測，觀察外周運動神經(jīng)（坐骨神經(jīng)）的功能狀態(tài)。檢測方法：大鼠麻醉起效后，環(huán)形切開頭后部皮膚，剝離至骨膜，細紋螺釘鉆孔，孔的大小以剛好將刺激電極放入為宜。根據(jù)MEP的產(chǎn)生原理，刺激電極置于皮層，記錄電極置于后肢大腿后側(cè)坐骨神經(jīng)處，參考電極置于硬腭下。刺激類型是：單脈沖粗電壓，強度3 V，波寬1 ms、頻率10 Hz，濾波3000 Hz，增益20倍，時間常數(shù)0.01 s，次數(shù)100次。檢測完畢后縫合切口。endprint

1.5 大鼠灌注、取材、固定與免疫組織化學(xué)染色 各組隨機抽取1只大鼠進行灌注、取材與固定，免疫組織化學(xué)染色的方法測定NT-3標(biāo)記陽性細胞指數(shù)，檢測NT-3在局部受損脊髓組織中的表達情況。操作方法：腹腔麻醉起效后，開胸后經(jīng)左心室主動脈插管，剪開右心耳，先快速灌注冰鹽水，清亮液體流出后，再用多聚甲醛經(jīng)心灌注、固定動物，速度先快后慢。切取T10～T12脊髓節(jié)段上下各約1 mm脊髓節(jié)段，立即放入中性福爾馬林溶液內(nèi)后固定，再入蔗糖溶液內(nèi)脫水，置4 ℃下至沉底，常規(guī)石蠟包埋，切片機連續(xù)切片，厚度為10 um。免疫組織化學(xué)染色按NT-3染色SP試劑盒操作說明進行（操作步驟詳見說明書）。NT-3染色陽性的標(biāo)志是細胞漿或細胞膜呈棕黃色。選取15張最優(yōu)切片，每張切片在10倍光鏡下分別計數(shù)4個視野內(nèi)染色陽性細胞，測定各組染色陽性細胞在總計數(shù)細胞中所占比例（即陽性細胞指數(shù)），重復(fù)5次，求平均值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 11.5統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗，不同時間點比較采用單因素方差分析（ANOVA），以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SD大鼠急性脊髓損傷細胞移植后BBB評分變化 對照組及各實驗組大鼠術(shù)后24 h內(nèi)BBB評分均為0分，隨著實驗的進行，各組均表現(xiàn)出不同程度的恢復(fù)情況。其中實驗組恢復(fù)速度及程度大于對照組（P<0.05）；1周后各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且有增大趨勢；各實驗組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1、圖1。

2.2 SD大鼠急性脊髓損傷細胞移植后改良的Tralov評分變化 所有大鼠模型制備完成后及術(shù)后任一檢測時間點，Tralov評分均顯著低于術(shù)前。隨著實驗的進行，各組大鼠均表現(xiàn)出不同程度的恢復(fù)情況。與BBB評分的統(tǒng)計分析結(jié)果相似，實驗組Tralov評分均顯著高于同一檢測時間點的對照組（P<0.05）；1周后，各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），各實驗組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）見表2、圖2。

2.3 SD大鼠急性脊髓損傷細胞移植后斜板實驗角度變化 造模及細胞移植術(shù)后，大鼠斜板實驗角度大幅下降，術(shù)后1 d由（82.00±3.45）°降為（12.73±1.34）°，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。隨著實驗的進行，各實驗組大鼠斜板實驗角度逐漸增加，以術(shù)后第7天增加非常明顯。實驗組與對照組術(shù)后1周以內(nèi)大鼠斜板實驗角度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；1周后，實驗組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各組各時間點比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），各實驗組兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3、圖3。

2.4 SD大鼠急性脊髓損傷細胞移植后MEP（N1波）潛伏期變化 造模及細胞移植術(shù)后，各組MEP（N1波）潛伏期明顯延長，但各實驗組N1波潛伏期短于對照組（P<0.05）。隨著實驗的進行，實驗組及對照組潛伏期均逐漸縮短，但各實驗組潛伏期縮短幅度大于對照組（P<0.05）。實驗組間比較：3 d后，各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），各實驗組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4、圖4。

2.5 SD大鼠急性脊髓損傷細胞移植后NT-3染色表達陽性的細胞數(shù)變化 造模及細胞移植術(shù)后，各組大鼠受損脊髓組織中NT-3均有明顯增高，其中術(shù)后第3天達到高峰，7 d內(nèi)NT-3的表達維持在較高的水平，此后逐步減少。自術(shù)后第5天（包含5 d）開始，各實驗組與對照組比較NT-3增高顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），各實驗組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表5、圖5。

3 討論

治療急性脊髓損傷必須要明確其受損機制，從而針對其中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)做出行之有效干預(yù)治療措施。急性脊髓損傷的具體機制雖尚未被完全闡明，但醫(yī)學(xué)工作者的認識逐漸趨于統(tǒng)一，認為脊髓損傷包括原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷[4]。基于這一認識，目前急性脊髓損傷動物實驗?zāi)Ｐ突A(chǔ)研究中所實驗的新方法新技術(shù)和臨床上治療脊髓損傷的各種常用措施，就是要及早正確的干預(yù)、減輕和預(yù)防可逆性的繼發(fā)性損傷，但取得的治療效果卻不甚理想。上世紀90年代初，Reynold等[5]在鼠紋狀體中發(fā)現(xiàn)了具有多向分化潛能、不斷進行分裂的細胞群，后來Mckay將之命名為神經(jīng)干細胞（NSCs）。他們的發(fā)現(xiàn)顛覆了人們以往認為成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元不能夠再生的認知，為治療脊髓損傷提供了新的治療思路—細胞移植。自此，各種細胞被嘗試用來治療神經(jīng)系統(tǒng)損傷和脊髓損傷。在這些嘗試中，最成功的例子就是神經(jīng)干細胞移植治療帕金森病、癲癇、中風(fēng)等神經(jīng)系統(tǒng)疾病[6-9]。但急性脊髓損傷的機制更加錯綜復(fù)雜，細胞移植雖然在基礎(chǔ)實驗研究及動物實驗等方面取得了重大進展與突破，但國內(nèi)外人體臨床試驗尚未大規(guī)模開展，這仍有待于研究者的進一步地探索研究。

神經(jīng)干細胞（NSCs）是一類特定的干細胞，它可以通過非對稱分裂的方式分化成為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞等。此外，還可自分泌神經(jīng)生長因子（NGF）、神經(jīng)營養(yǎng)因子（NTF）等物質(zhì)。自其被發(fā)現(xiàn)伊始，神經(jīng)干細胞就被醫(yī)學(xué)工作者用來自體移植治療神經(jīng)系統(tǒng)損傷，這樣不僅可以避免免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生，同時又解決了移植細胞的來源問題，取得了滿意的臨床療效，可作為急性脊髓損傷治療的重要參照[10]。

嗅鞘細胞（OECs）是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)可以再生的細胞之一，被認為是髓鞘化能力最強的膠質(zhì)細胞，其特點是具備終生再生分裂的能力，它不僅能存活于中樞神經(jīng)系統(tǒng)當(dāng)中，而且又可以促進外周神經(jīng)元細胞軸突的生長。Sasaki等[11]研究就發(fā)現(xiàn)，嗅鞘細胞移植后能夠突出脊髓受損區(qū)達8 mm，除了仍可保持再生分裂的能力外，還可使已經(jīng)脫髓鞘的神經(jīng)元軸突重新髓鞘化。此外，與NSCs相似，嗅鞘細胞也能分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子，這些可能都對神經(jīng)元軸突的生長起著重要的促進作用[12]。endprint

本實驗中，采用單種細胞或兩種細胞聯(lián)合移植治療大鼠急性脊髓損傷，將能夠分泌NT-3的神經(jīng)干細胞及嗅鞘細胞分別、共同移植于脊髓受損區(qū)，以期可持續(xù)分泌NT-3，這樣就可避免外源性神經(jīng)營養(yǎng)因子半衰期短和持續(xù)性作用差的弊端，等同于NT-3、神經(jīng)干細胞及嗅鞘細胞共同修復(fù)受損的脊髓，改善大鼠急性脊髓損傷后運動功能的恢復(fù)[13]。實驗中筆者觀察到，造模及細胞移植術(shù)后，24 h內(nèi)各組大鼠BBB評分及改良的Tralov評分均為0分，斜板實驗角度下降非常明顯，由實驗前的（82±3.45）°降為（12.73±1.34）°，各組MEP（N1波）潛伏期明顯延長。隨著實驗的進行，各組均表現(xiàn)出不同程度的恢復(fù)情況，各實驗組BBB評分及改良的Tralov評分與對照組相比增高顯著（P<0.05）；斜板實驗角度也逐漸增加，實驗組增幅要大于對照組，以術(shù)后第7天增加非常明顯；各組MEP（N1波）潛伏期均逐漸縮短，且各實驗組潛伏期縮短幅度大于對照組（P<0.05），說明大鼠急性脊髓損傷后有一定的自我恢復(fù)作用，細胞移植能夠?qū)κ軗p脊髓產(chǎn)生修復(fù)治療效應(yīng)，促進大鼠雙后肢運動動能恢復(fù)。實驗3組BBB評分和改良的Tralov評分在各實驗組中增高最顯著，實驗2組次之，實驗1組最弱，表明細胞移植雖能促進大鼠傷后后肢運動動能的恢復(fù)，但單種細胞移植或兩種細胞聯(lián)合移植后取得的治療效果不甚相同。筆者還觀察到，急性脊髓損傷后NT-3表達量迅速增高，術(shù)后第3天達到最高峰，7 d內(nèi)其濃度維持在一個較高的水平，此后表達明顯變?nèi)?，趨于平緩。這說明，大鼠急性脊髓損傷后機體本身NT-3合成增加，推測NT-3可能在急性脊髓損傷的早期修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。實驗3組和實驗2組與實驗1組相比促進作用更顯著（P<0.05），實驗3組與實驗2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這說明，OECs+NSCs聯(lián)合移植促進NT-3分泌的作用最優(yōu)，OECs移植次之，NSCs移植最弱。這與以上實驗結(jié)果相一致。

然而，并非所有的實驗研究都獲得了一致或相仿的研究結(jié)論。有學(xué)者認為，局部注射法進行細胞移植時，“細胞遷徙”可能是人為進行細胞移植時局部注射的壓力所導(dǎo)致的局部擴散而已，而不是所謂的“主動遷徙”[14]。在各種急性脊髓損傷模型中，如脊髓半或全橫斷模型，脊髓壓迫模型等，可見細胞移植無療效或療效甚微的案例，故而一部分學(xué)者對細胞移植治療急性脊髓損傷的療效抱有懷疑態(tài)度[15]。盡管如此，筆者認為急性脊髓損傷機制的復(fù)雜性決定了其治療的全面性，不是單獨應(yīng)用一種治療方法或多種治療方法聯(lián)合應(yīng)用就可一蹴而就的。細胞移植的方法雖然不是涉及了急性脊髓損傷修復(fù)的所有方面，但取得了一定的療效。

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（收稿日期：2014-05-14） （本文編輯：蔡元元）endprint

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