陳華,凌娜

(1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤婦科,青海 西寧 810001;2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 婦科,遼寧 沈陽(yáng) 110032)

環(huán)氧合酶-2和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)與宮頸癌的相關(guān)性研究

陳華1,凌娜2

(1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤婦科,青海 西寧 810001;2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 婦科,遼寧 沈陽(yáng) 110032)

目的 探索環(huán)氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF)的表達(dá)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性及其臨床意義。方法 采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)COX-2和bFGF分別在180例宮頸癌、30例慢性宮頸炎、20例正常宮頸組織中的表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)分析其與宮頸癌臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 COX-2在宮頸癌、慢性宮頸炎、正常宮頸組織中的表達(dá)率分別為76.11%（137/180)、26.67%（8/30)、0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008)。COX-2在宮頸癌不同的臨床分期、病理分級(jí)和間質(zhì)浸潤(rùn)中的表達(dá)情況有顯著差異（P＜0.05)，而在不同年齡、組織病理類(lèi)型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，COX-2表達(dá)與臨床分期、病理分級(jí)和間質(zhì)浸潤(rùn)的相關(guān)系數(shù)分別為0.233（P=0.001)、0.362（P=0.003)、0.291（P=0.012)。bFGF在宮頸癌、慢性宮頸炎、正常宮頸組織中的表達(dá)率分別為82.78%（149/180)、40.00%（12/30)、10.00%（2/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001)。bFGF與宮頸癌的病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)系數(shù)分別為0.242（P=0.004)、0.372（P=0.011)，而在其他病理特征中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 COX-2和bFGF的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展可能有關(guān)，可能成為宮頸癌治療的新靶點(diǎn)。

環(huán)氧合酶-2；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子；宮頸癌；相關(guān)

宮頸癌目前在女性惡性腫瘤中位于第二位,并且是發(fā)展中國(guó)家導(dǎo)致女性死亡的主要原因之一［1］。盡管宮頸癌在全世界引起了廣泛的關(guān)注,但其發(fā)生發(fā)展機(jī)制及影響因素仍未完全闡明。近年來(lái)研究表明［2］,腫瘤的發(fā)生發(fā)展涉及許多復(fù)雜的分子生物過(guò)程,其中研究較多的有COX-2和bFGF［3］。COX-2是合成前列腺素的限速酶,主要在炎癥、腫瘤刺激因子等的誘導(dǎo)下才表達(dá)［4］。研究顯示COX-2可能發(fā)揮著促進(jìn)腫瘤新生血管生成、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制機(jī)體免疫功能及提高腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)性［5］等作用,從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。bFGF是目前認(rèn)為能強(qiáng)烈刺激血管生成的因子之一,可能在腫瘤血管的形成及浸潤(rùn)中發(fā)揮重要作用［6］。因此,有學(xué)者認(rèn)為,檢測(cè)腫瘤組織中相關(guān)生物分子的表達(dá),在評(píng)價(jià)腫瘤分期、尋求有效治療及評(píng)價(jià)預(yù)后中可能有重要意義［7］。目前,COX-2與bFGF與宮頸癌的相關(guān)性仍不十分明確,國(guó)內(nèi)外也缺乏相應(yīng)的報(bào)道。鑒于以上背景,本研究通過(guò)分析COX-2和bFGF在宮頸癌中的表達(dá)情況和與其臨床分期、病理分級(jí)等病理特征之間的關(guān)系,從分子水平探討其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用,并為臨床上尋求早期診斷、有效治療和預(yù)后評(píng)估手段提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2003年2月～2009年2月青海大學(xué)附屬醫(yī)院對(duì)宮頸癌患者進(jìn)行手術(shù)治療所獲得的宮頸癌組織180例,術(shù)前均未行化學(xué)藥物、放射、及免疫等治療,按國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)分期。選擇本院所采集到的慢性宮頸炎組織30例和正常宮頸組織20例作為對(duì)照組。

180例宮頸癌患者年齡為25～84歲,平均年齡(45.56±9.75)歲;FIGO分期:Ⅰ期79例,Ⅱ、Ⅲ期共101例;病理學(xué)分級(jí):Ⅰ級(jí)93例,Ⅱ、Ⅲ級(jí)共87例;病理分類(lèi):鱗癌124例,腺癌56例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移111例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法:采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)室免疫組織化學(xué)S-P法［8］對(duì)所有研究的組織進(jìn)行石蠟標(biāo)本切片和染色檢測(cè)COX-2和bFGF的表達(dá)情況。所用材料(兔抗人COX-2單抗、兔抗人bFGF多抗、DAB酶底物顯色劑、EDTA抗原修復(fù)液)均購(gòu)于博士德生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):采用光鏡下半定量積分法確定其陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度。以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒為COX-2和bFGF染色陽(yáng)性,無(wú)黃色顆粒記為0分,淡黃色記為1分,棕黃色記為2分,棕褐色記為3分。高倍鏡(400×)下判斷陽(yáng)性細(xì)胞的百分率,＜5%記為0分,5%～25%記為1分,25%～50%記為2分,＞50%記為3分。染色強(qiáng)度和高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞的百分率的評(píng)分之積即為COX-2和bFGF的表達(dá)強(qiáng)度:0分為陰性,1～4分為低表達(dá),4分以上為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.1對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,采用卡方檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2的表達(dá)情況

2.1.1 COX-2的定性檢測(cè)結(jié)果:通過(guò)定性檢測(cè),COX-2表達(dá)的陽(yáng)性率在宮頸癌中為76.11%(137/180),在慢性宮頸炎為26.67%(8/30),而在正常宮頸組織中無(wú)COX-2表達(dá)。COX-2在3組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008),在宮頸癌中的表達(dá)顯著高于在慢性宮頸炎和正常宮頸組織中的表達(dá)(見(jiàn)表1,圖1)。

表1 COX-2在宮頸癌、慢性宮頸炎、正常宮頸組織中的表達(dá)情況Tab.1 The expression of COX-2 in cervical carcinoma,chronic cervical inflammation and normal cervical tissue

圖1 COX-2在宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)Fig.1 Positive expression of COX-2 in cervical cancer

2.1.2 COX-2的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系:由表2可見(jiàn),COX-2在宮頸癌不同的臨床分期、病理分級(jí)和間質(zhì)浸潤(rùn)中的表達(dá)情況有顯著差異(P=0.001,P=0.003,P=0.012),而在不同年齡、組織病理類(lèi)型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明COX-2的表達(dá)與宮頸癌的臨床分期、病理分級(jí)和間質(zhì)浸潤(rùn)有關(guān)。臨床分期Ⅱ和Ⅲ期在COX-2高表達(dá)中占63.72%(65/102),而在COX-2陰性表達(dá)中占48.27%(14/29),前者高于后者(P=0.041);病理學(xué)分級(jí)Ⅱ和Ⅲ級(jí)在COX-2高表達(dá)中占75.68%(56/74),而在COX-2陰性表達(dá)中的占24.32%(9/37),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)。間質(zhì)浸潤(rùn)到深肌層的發(fā)生率在COX-2高表達(dá)中占62.69%(42/67),而在其陰性表達(dá)中占41.07%(23/56),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023)。進(jìn)一步采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)COX-2表達(dá)與臨床分期、病理分級(jí)和間質(zhì)浸潤(rùn)的相關(guān)系數(shù)分別為0.233(P=0.001)、0.362(P=0.003)、0.291(P=0.012),說(shuō)明COX-2的表達(dá)與3者均呈正相關(guān),而與年齡、病理類(lèi)型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表2)。

表2 COX-2與臨床病理特征之間的關(guān)系Tab.2 The relationship between COX-2 and clinical pathological features

2.2 bFGF的表達(dá)情況

2.2.1 bFGF的定性檢測(cè)結(jié)果:bFGF在宮頸癌組、慢性宮頸炎組和正常宮頸組中的陽(yáng)性率分別為82.78%、40.00%、10.00%,bFGF在宮頸癌組的表達(dá)陽(yáng)性率高于其他2組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001,見(jiàn)表3、圖2)。

表3 bFGF在宮頸癌、慢性宮頸炎、正常宮頸組織中的表達(dá)情況Tab.3 The expression of bFGF in cervical carcinoma,chronic cervical inflammation and normal cervical tissues

圖2 bFGF在宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)Fig.2 Positive expression of bFGF in cervical cancer

2.2.2 bFGF的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系:由表4可見(jiàn),bFGF的表達(dá)情況與宮頸癌的病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)(P=0.004,P=0.011),而與其他臨床病理特征無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。病理分級(jí)Ⅱ和Ⅲ級(jí)在bFGF高表達(dá)中占70.89%(56/79),而在其陰性表達(dá)中占34.01%(17/50),前者顯著高于后者(P=0.021)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性在bFGF高表達(dá)中占74.45%(67/90),而在其陰性表達(dá)中占44.18%(19/43),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.013)。進(jìn)一步采用Spearman相關(guān)性分析,bFGF的表達(dá)與病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)系數(shù)分別為0.242(P=0.004)、0.372(P=0.011),表明bFGF表達(dá)與2者均呈正相關(guān),而與其他病理因素的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表4)。

表4 bFGF與臨床病理特征之間的關(guān)系Tab.4 The relationship between bFGF and clinical pathological features

3 討論

目前已知宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)慢性進(jìn)展的過(guò)程［9-10］,正常的宮頸上皮在反復(fù)外界刺激或內(nèi)在因素作用下逐步發(fā)展為慢性宮頸炎、不典型增生,其進(jìn)一步加重發(fā)生惡變而進(jìn)展為宮頸癌［9-10］。 研究發(fā)現(xiàn)［9-11］,COX-2 與 bFGF在消化道、乳腺、肺臟等腫瘤中的表達(dá)均增加,強(qiáng)烈提示其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用,并為腫瘤的有效治療提供了線(xiàn)索［12］。但目前COX-2和bFGF與宮頸癌的相關(guān)性仍缺乏相應(yīng)的報(bào)道,故本文以免疫組化的方法,檢測(cè)COX-2和bFGF分別在宮頸癌組織中的表達(dá),揭示其與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性,并為臨床上尋求宮頸癌的早期診斷、有效治療和預(yù)后評(píng)估手段提供一定的參考依據(jù)。

COX-2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶,在一般情況下正常組織中不能被檢出,當(dāng)機(jī)體在炎癥、疼痛、腫瘤等刺激作用下表達(dá)增加,從而促進(jìn)前列腺素E2的產(chǎn)生,發(fā)揮其作用［13］。有學(xué)者［14］認(rèn)為,COX-2可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)新生血管的生成、抑制機(jī)體免疫功能等參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究顯示,COX-2在宮頸癌、慢性宮頸炎和正常宮頸組織中的表達(dá)率分別為76.11%、26.67%、0%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008),提示COX-2的表達(dá)與宮頸癌發(fā)生有密切關(guān)系。COX-2在正常宮頸組織、慢性宮頸炎和宮頸癌中的表達(dá)逐漸增加,提示宮頸癌的發(fā)生可能是逐漸進(jìn)展的過(guò)程,但本研究對(duì)照組中不包括宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasias,CIN),因此尚不能看出其是否符合正常宮頸上皮-慢性宮頸炎-不典型增生-宮頸癌這一演變過(guò)程。韓麗麗［15］等的研究通過(guò)檢測(cè)COX-2在20例正常宮頸組織、25例CIN病變、45例宮頸癌中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)其在3組中的表達(dá)率分別為0%(0/20)、44.0%(11/25)、82.2%(37/45),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),而且在3組中的表達(dá)逐漸增加,提示宮頸癌的發(fā)生很可能符合上述的演變過(guò)程。本研究還顯示,COX-2的表達(dá)與宮頸癌的臨床分期、病理分級(jí)及間質(zhì)浸潤(rùn)成正相關(guān)(r=0.233,r=0.362,r=0.291),提示其表達(dá)水平與宮頸癌的惡性程度相關(guān),有可能作為宮頸癌早期診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的指標(biāo)。韓麗麗等的研究亦表明COX-2的表達(dá)與病理分級(jí)相關(guān)(P=0.043),但與FIGO分期的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.457)［15］,可能與其研究對(duì)象例數(shù)過(guò)少有關(guān),需增加研究樣本做進(jìn)一步的研究分析。近年來(lái)國(guó)內(nèi)學(xué)者正積極尋找天然植物中的選擇性COX-2抑制劑,以期在抗腫瘤的治療中取得新的進(jìn)展［16］。

bFGF是目前FGF家族中研究較多的成員之一［17］。研究表明,bFGF能刺激細(xì)胞的增值,可能在傷口愈合、胚胎發(fā)育、血管生成等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有學(xué)者猜想,bFGF可能在炎癥或腫瘤發(fā)生過(guò)程中被激活,促進(jìn)癌細(xì)胞的分裂增殖和誘導(dǎo)血管生成,從而介導(dǎo)腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［18-19］。本研究顯示,bFGF在宮頸癌、慢性宮頸炎和正常宮頸組織中的表達(dá)率分別為82.78%(149/180)、40.00%(12/30)、10.00%(2/20),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001),提示bFGF的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。進(jìn)一步分析其與宮頸癌臨床分期、病理分級(jí)等臨床病理特征的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)bFGF的表達(dá)與宮頸癌的病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)(r=0.242,r=0.372),而與年齡、臨床分期、病理類(lèi)型、間質(zhì)浸潤(rùn)的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肖有為［20］等的研究亦表明bFGF的表達(dá)水平與宮頸癌的臨床分期、病理類(lèi)型和宮旁浸潤(rùn)呈明顯正相關(guān),提示bFGF在宮頸癌血管生成、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。目前針對(duì)bFGF及其受體的基因治療已在大多數(shù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中展開(kāi),未來(lái)bFGF可能成為抗腫瘤治療的新靶點(diǎn)［21］。

綜上所述,COX-2和bFGF的表達(dá)在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用,其表達(dá)水平與宮頸癌的惡性程度相關(guān)。COX-2和bFGF可能作為可檢測(cè)的生物分子標(biāo)志物成為宮頸癌早期診斷和預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)之一,并且為臨床上尋求治療宮頸癌的新方法提供了線(xiàn)索與方向。

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(編校:譚玲)

Research on correlation of cyclooxygenase-2 and basic fibroblast grow th factor w ith cervical carcinoma

CHEN Hua1,LING Na2

(1.Department of Gynecologic Tumors,Affiliated Hospital of Qinghai University,Xining 810001,China;2.Department of Gynecological,Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110032,China)

Objective To investigate the correlations between cyclooxygenase-2(COC-2),basic fibroblast growth factor(bFGF)and cervical carcinoma and its clinical significance.Methods Immunohistochemistrymethod was adopted to detect the expression of COX-2 and bFGF in 180 cervical carcinoma tissue,20 chronic cervical inflammation tissue and 20 normal cervical epithelium respectively.The correlations of COX-2 and bFGF in cervical cancer with the clinicopathologic features were analyzed.Results The expression rates of COX-2 in cervical carcinoma,chronic cervical inflammation and normal cervical epithelial were 76.11%(137/180),26.67%(8/30)and 0%respectively,the difference was of statistical significance(P=0.008).The expression of COX-2 was positively correlated with the FIGO staging,histopathological grading and stromal invasion(r=0.233,P=0.001;r=0.362,P=0.003;r=0.291,P=0.012).The expression rate of bFGF in cervical carcinoma,chronic cervical inflammation and normal cervical epithelial were 82.78%(149/180),40.00%(12/30)and 10.00%(2/20),the difference was significant.The expression of bFGF was positively correlated with lymph node metastasis and histopathologic grading(r=0.372,P=0.011;r=0.242,P=0.004).And there was no statistically significant difference expressed in other pathological features.Conclusion The expression of COX-2 and bFGF can he correlated with cervical carcinoma and its development,which indicates a new target to treat cervical cancer.

cyclooxygenase-2;basic fibroblast growth factor;cervical cancer;correlation

R73

A

1005-1678（2014)06-0087-04

遼寧省自然基金資助項(xiàng)目(2013020215)

陳華，女，本科，主治醫(yī)師，主要研究方向：女性生殖系統(tǒng)腫瘤，E-mail：qch1821460020@163.com。