畢作木,崔春萍,孫桂珍,徐冬,周其鋒

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬淄博市第一醫(yī)院 血液科,山東 淄博 255200;2.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 血液學(xué)研究室,北京 100039;3.淄博市沂源縣人民醫(yī)院,山東 淄博 255200)

PKC-ε、cIAP在CD44介導(dǎo)的髓系白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移和增殖中的作用及可能機(jī)制

畢作木1,崔春萍2Δ,孫桂珍3,徐冬1,周其鋒1

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬淄博市第一醫(yī)院 血液科,山東 淄博 255200;2.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 血液學(xué)研究室,北京 100039;3.淄博市沂源縣人民醫(yī)院,山東 淄博 255200)

目的 探討PKC-ε在調(diào)節(jié)cIAP、CD44及P-gp介導(dǎo)的髓系白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖及耐藥中的作用及可能機(jī)制。方法采用MTT法檢測白血病細(xì)胞親本株及耐藥株K562、K562R、HL60和HL60R的耐藥特性；Western blot和免疫組化檢測各細(xì)胞株中PKC-ε表達(dá)水平；免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測各細(xì)胞株CD44表達(dá)；軟瓊脂克隆形成實驗檢測細(xì)胞株增殖能力；免疫熒光檢測PKC-ε與P-gp、cIAP和CD44共定位。結(jié)果 髓系白血病耐藥株較親本細(xì)胞株高表達(dá)PKC-ε，采用化療藥物處理可上調(diào)親本株P(guān)KC-ε的表達(dá)。通過添加PKC激動劑或抑制劑證實:髓系白血病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及耐藥與PKC-ε的高表達(dá)有關(guān)，增殖與PKC-ε的低表達(dá)有關(guān)。細(xì)胞及轉(zhuǎn)移灶中，cIAP及P-gp的表達(dá)與PKC-ε的表達(dá)變化一致，CD44的表達(dá)與PKC-ε的表達(dá)變化相反。免疫熒光結(jié)果顯示PKC-ε與P-gp、cIAP及CD44分別共定位于髓系白血病細(xì)胞膜上。結(jié)論 PKC-ε通過調(diào)節(jié)P-gp和cIAP介導(dǎo)白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移，同時參與調(diào)節(jié)CD44介導(dǎo)的白血病細(xì)胞增殖。

PKC-ε；cIAP；髓系白血病細(xì)胞；增殖；轉(zhuǎn)移

蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)參與腫瘤的耐藥、轉(zhuǎn)移及 增殖等各個過程［1-6］。PKC-ε是蛋白激酶C家族成員,有研究顯示其能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡能力、改變細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)等。在不同種類的腫瘤中,PKC-ε的表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),其表達(dá)水平高低提示了腫瘤的預(yù)后情況［7-8］。研究證實:在鱗狀細(xì)胞癌及某些其他類型的腫瘤中,PKC-ε是介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要因素。有報道表明:PKC-ε在乳腺癌細(xì)胞中通過上調(diào)cIAP的表達(dá)以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞抵抗凋亡的能力,同時還能上調(diào)P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表達(dá)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的耐藥性［9］。在研究腫瘤增殖特性方面,有報道顯示PKC-ε可通過與CD44相互作用,調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的增殖及分化能力,并調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞的抗凋亡能力及抗藥性［7］。目前尚無PKC-ε參與調(diào)節(jié)髓系白血病細(xì)胞耐藥、增殖及轉(zhuǎn)移方面的報道。本文通過研究髓系白血病細(xì)胞親本株K562和 HL60及其耐藥株K562R和HL60R的體內(nèi)外的增殖情況,以PKC-ε為靶點,探討白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移及增殖的分子機(jī)制,以期為白血病的治療打開新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系與動物:人急性髓系白血病細(xì)胞系HL-60、人慢性髓系白血病急性期細(xì)胞系K562購自ATCC(美國典型培養(yǎng)生物典藏中心)。髓系白血病細(xì)胞系耐藥株K562R、髓系白血病細(xì)胞系耐藥株HL60R購自天津中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病研究所。SCID小鼠,雄性,4～5周齡,購自河南大學(xué)ABSL-3動物實驗中心,并飼養(yǎng)于無特異性抗原的SPF動物房中。

1.1.2 試劑及抗體:Doxorubicin、Vincristine購自Merck公司。RPMI 1640培養(yǎng)液及新生牛血清均購自 Gibco公司。Annexin V/PI凋亡檢測試劑盒購自晶美公司。Mitocapture線粒體膜電位檢測試劑盒購自Biovision公司。兔抗人cIAP多克隆抗體購自Abcam公司。鼠抗人P-gp、β-actin單克隆抗體均購自Santa Cruz公司。SP法免疫組化試劑盒購自邁新生物技術(shù)公司。HRP標(biāo)記羊抗兔、羊抗鼠多克隆抗體均購自 Biosharp公司。Transwell小室購自Costar公司。DAB顯色劑購自eBiosource公司。FITC標(biāo)記鼠抗人CD44單克隆抗體,FITC標(biāo)記兔抗鼠、羊抗兔二抗,PE標(biāo)記羊抗兔二抗均購自Biolegend公司,鼠抗人βactin單克隆抗體購自Santa Cruz公司。DAPI購自Sigma公司。Staurosporine(PKC抑制劑),PKC激動劑(Staurosporine)均購自圣克魯斯生物技術(shù)公司。

1.1.3 主要實驗儀器:倒置熒光顯微鏡(IX71-F22FL/PH,Olympus公司),Nu-4850水套式二氧化碳培養(yǎng)箱(NuAire公司),TE2000倒置光學(xué)顯微鏡(Nikon公司),YS100正置光學(xué)顯微鏡(Nikon公司),Nu-6382E-85℃超低溫冰箱(NuAire公司),BCD-176C3-20℃低溫冰箱(Haier公司)。

磁力攪拌器、掌式離心機(jī)、血細(xì)胞分類計數(shù)器、恒溫水浴箱、水套式恒溫培養(yǎng)箱、高溫干燥箱、脫色搖床、微量及少量電子秤等均為國產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 溶液配置

① Tris-乙酸緩沖液(TAE):工作液(l×):40 mmol Tris-乙酸:1mmol EDTA;儲存液 Tris-乙酸2 mol/L(50×):24.2 g Tris base,57.1mL冰醋酸,100mL 0.5mol/L EDTA(pH 8.0)。

②Tris-甘氨酸緩沖液(5×):15.19 Tris堿,94 g甘氨酸,50mL 10%SDS溶液(避光保存)。

③RIPA(Radio Immuno Precipitation Assay)裂解液:150 mM氯化鈉溶液,1.0%NP-40 or Triton X-100,0.5%脫氧鵝膽酸,0.1%SDS(十二硫基磺酸鈉),50mM Tris,pH 8.0。

1.2.2 藥物敏感性實驗:采用MTT法檢測白血病細(xì)胞親本 及耐藥株K562、K562R、HL60和HL60R的耐藥特性,計算相對 于親本細(xì)胞株之耐藥指數(shù),達(dá)到耐藥細(xì)胞實驗標(biāo)準(zhǔn)即可進(jìn)行后 續(xù)實驗。

1.2.3 PKC-ε表達(dá)水平的檢測:分別采用Western blot和免疫組化檢測細(xì)胞株P(guān)KC-ε表達(dá)水平。后者具體步驟如 下:68℃烤片20 min;常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水;二甲 苯I20min、二甲苯II20min、100%酒精10min、100%酒精10 m in、95%酒精5 m in、80%酒精 5 m in、70%酒精 5 m in;阻斷滅 活內(nèi)源性過氧化物酶:3%H2O237℃孵育10 min,PBS沖洗3×5min;抗原修復(fù):置0.01 M枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)中用 煮沸(95℃,40 min),自然冷卻20 min,PBS沖洗3×5 min。 正常羊血清工作液封閉,37℃15 m in。滴加一抗4℃冰箱孵 育過夜,PBS沖洗3×5min(用PBS緩沖液代替一抗作陰性對 照);滴加生物素標(biāo)記二抗,37℃孵育30 min,PBS沖洗3×5 m in;滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液,37℃ 孵育30min,PBS沖洗3×5 min;DAB/H2O2反應(yīng)染色,自來水 充分沖洗后,蘇木素復(fù)染,常規(guī)脫水,透明,干燥,封片。結(jié)果 判定:高倍鏡下(×400)對每張切片隨機(jī)選擇5個視野,每個 視野計數(shù)200個細(xì)胞,共計1000個,計算每張切片顯色棕黃 色顆粒的陽性細(xì)胞百分率,切片中陽性細(xì)胞數(shù)＜1%為陰性 片,陽性細(xì)胞數(shù)≥1%陽性片。并使用Image Pro Plus軟件分 析平均光密度。放大倍數(shù):400倍。一抗稀釋倍數(shù)1∶100。

1.2.4 細(xì)胞株CD44表達(dá)檢測:免疫熒光檢測PKC激動或 抑制劑作用后細(xì)胞株CD44的表達(dá)?？贵w濃度:FITC標(biāo)記的CD44抗體(1∶500)。放大倍數(shù):200倍。流式細(xì)胞術(shù)檢測PKC激動或抑制劑作用后各細(xì)胞株CD44的表達(dá),使用Flowjo 7.6.1軟件分析PKC激動劑及抑制劑作用前后CD44分子平均熒光強(qiáng) 度的變化。

1.2.5 細(xì)胞株增殖能力檢測:采用軟瓊脂克隆形成實驗檢 測PKC激動或抑制劑作用后細(xì)胞株增殖能力,收集細(xì)胞前,分別 使用PKC激動劑及抑制劑處理白血病細(xì)胞親本株及耐藥株30min,以DMSO處理組為對照。

1.2.6 PKC-ε與P-gp、cIAP和CD44共定位:采用免疫熒光 法檢測PKC-ε與P-gp、cIAP、CD44的相互關(guān)系。收集細(xì)胞并使 用PBS洗一遍后細(xì)胞涂片,風(fēng)干,4%PFA于25℃固定30min;PBS漂洗,5min×3次,1%BSA室溫孵育30min;加入一抗FITC CD44抗體(1∶200),4℃孵育8 h;PBS漂洗,5min×3次;DAPI復(fù)染細(xì)胞核;無熒光甘油封片劑封片;熒光顯微鏡下觀察照相,FITC激發(fā)波長為488 nm,陰性對照組以PBS代替一抗。放大倍數(shù):200倍。

1.2.7 Transwell實驗檢測敏感株及耐藥株的遷移能力:實驗步驟如下:①制備細(xì)胞懸液。細(xì)胞血清饑餓24 h,后550×g離心5min收集細(xì)胞,PBS洗2遍,以含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸。調(diào)整細(xì)胞密度至5×105/mL。②接種細(xì)胞。取細(xì)胞懸液100μL加入Transwell小室(孔徑8μm)。24孔板下室加入600μL含20%FBS的培養(yǎng)基。③培養(yǎng)細(xì)胞:常規(guī)培養(yǎng)12 h和24 h。④結(jié)果統(tǒng)計:直接計數(shù)法,在鏡下(100倍)計數(shù)下室中的白血病細(xì)胞數(shù)目。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0分析數(shù)據(jù),正態(tài)計量資料以“±s”表示,組間比較進(jìn)行t檢驗,計數(shù)資料組間用χ2檢驗,以P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白血病細(xì)胞親本及耐藥株的抗藥性 MTT結(jié)果表明:K562R耐藥指數(shù)為28,HL60R耐藥指數(shù)100,達(dá)到耐藥細(xì)胞實驗標(biāo)準(zhǔn),可用于下一步實驗。

2.2 白血病細(xì)胞親本及耐藥株P(guān)KC-ε表達(dá)水平檢測Western blot結(jié)果顯示:耐藥細(xì)胞株K562R及HL60R高表達(dá)PKC-ε,親本細(xì)胞株K562及HL60低水平表達(dá)PKC-ε,2者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。采用化療藥物DOX處理親本細(xì)胞株24h后,PKC-ε表達(dá)水平均顯著上調(diào)(P＜0.05)。提示PKC-ε可能參與白血病細(xì)胞耐藥性的形成。

圖1 耐藥株及親本株P(guān)KC-ε表達(dá)水平比較Fig.1 Comparison of PKC-εexpression in resistant strains and parents strains

2.3 PKC-ε與白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究

2.3.1 白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移灶中PKC-ε表達(dá)水平比較:免疫組化結(jié)果顯示:在脾臟、骨髓、肺臟及肝臟中,耐藥株 K562R和HL60R組轉(zhuǎn)移灶PKC-ε表達(dá)水平明顯高于親本株K562和HL60組(P＜0.001),耐藥組轉(zhuǎn)移灶中PKC-ε表達(dá)平均光密度高于親本組。正常對照組未檢測出人PKC-ε的表達(dá)(見圖2)。

圖2 器官轉(zhuǎn)移灶中PKC-ε表達(dá)水平比較(×400)Fig.2 Comparison of PKC-ε expression in organ metastases( ×400)

2.3.2 PKC激動劑對白血病親本株轉(zhuǎn)移能力的影響:使用PKC激動劑PMA處理親本細(xì)胞K562及HL60后,白血病細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)(P＜0.05);而使用PKC抑制劑十字孢堿(staurosporine,SP)處理上述2株細(xì)胞系后,腫瘤細(xì)胞的遷移能力稍降低,但無統(tǒng)計學(xué)差異。同樣的,PKC激動劑處理耐藥細(xì)胞K562R及HL60R后,白血病細(xì)胞的遷移能力無明顯改變,而使用PKC抑制劑處理上述2株細(xì)胞系后,腫瘤細(xì)胞的遷移能力明顯降低(P＜0.05,見圖3)。

圖3 PKC激動劑或抑制劑處理24 h對細(xì)胞遷移能力的影響Fig.3 Effect of PKC agonist or inhibitors treatment for 24h on cellmigration ability

2.4 PKC-ε與白血病細(xì)胞增殖的研究

2.4.1 免疫熒光檢測PKC激動劑或抑制劑對白血病親本株CD44表達(dá)的影響:免疫熒光結(jié)果顯示:使用PKC激動劑PMA處理白血病細(xì)胞30 min后,親本細(xì)胞的CD44表達(dá)水平明顯下降,而耐藥細(xì)胞株CD44表達(dá)水平基本維持不變;使用廣譜激酶抑制劑Staurosporine處理白血病細(xì)胞30 min后,耐藥細(xì)胞的CD44表達(dá)水平明顯上調(diào)而親本株CD44表達(dá)水平基本維持不變(見圖4)。

圖4 PKC激動劑及抑制劑處理對細(xì)胞株CD44表達(dá)的影響Fig.4 Effect of PKC agonist or inhibitors treatment on CD44 expression

2.4.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測PKC激動劑或抑制劑對白血病細(xì)胞親本株CD44表達(dá)的影響:流式結(jié)果顯示:使用PMA處理白血病細(xì)胞30 min后,親本細(xì)胞株CD44表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05);使用Staurosporine處理白血病細(xì)胞30min后,耐藥細(xì)胞株CD44表達(dá)水平明顯上調(diào)(P＜0.05)。與免疫熒光結(jié)果一致,提示髓系白血病細(xì)胞株中PKC-ε參與調(diào)節(jié)CD44的表達(dá)(見圖5)。

圖5 PKC激動劑或抑制劑處理對CD44表達(dá)的影響Fig.5 Effect of PKC agonist or inhibitors treatment on CD44 expression

2.4.3 PKC激動劑或抑制劑對白血病細(xì)胞耐藥株增殖能力的影響:軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果表明:使用PMA預(yù)處理細(xì)胞30min后,親本細(xì)胞克隆形成能力明顯下降(P＜0.05),而耐藥細(xì)胞株克隆細(xì)胞數(shù)基本維持不變;使用Staurosporine處理白血病細(xì)胞30min后,耐藥細(xì)胞株的細(xì)胞克隆形成數(shù)明顯增多(P＜0.05),而親本株克隆形成數(shù)基本維持不變。表明PKC-ε可能通過調(diào)控CD44表達(dá)介導(dǎo)髓系白血病細(xì)胞的增殖(見圖6)。

圖6 PKC激動劑或抑制劑處理對白血病細(xì)胞增值的影響Fig.6 Effect of PKC agonist or inhibitor treatment on leukemia cell clones forming

2.5 PKC-ε與白血病細(xì)胞耐藥、轉(zhuǎn)移及增殖之間的關(guān)系研究

2.5.1 PKC-ε與P-gp共定位檢測:細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:在親本細(xì)胞及耐藥細(xì)胞株中,PKC-ε與P-gp分子共定位于細(xì)胞膜,并且耐藥細(xì)胞株高表達(dá)PKC-ε和P-gp,親本細(xì)胞株低表達(dá)PKC-ε和P-gp。提示PKC-ε與P-gp之間存在聯(lián)系,PKC-ε可能參與調(diào)節(jié)P-gp所介導(dǎo)的髓系白血病細(xì)胞耐藥過程。

圖7 免疫熒光法檢測PKC-ε與P-gp的表達(dá)定位情況(×200)Fig.7 Immunofluorescence test results of PKC-εand P-gp co-localization(×200)

2.5.2 P-gp在小鼠轉(zhuǎn)移灶部位的表達(dá):免疫組化結(jié)果顯示:2耐藥株組轉(zhuǎn)移灶中P-gp表達(dá)水平較親本株組更高(P＜0.05,見圖8),提示P-gp與PKC-ε的表達(dá)變化一致,PKC-ε可能通過P-gp介導(dǎo)髓系白血病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

圖8 P-gp在轉(zhuǎn)移灶部位表達(dá)結(jié)果(×400)Fig.8 P-gp expression in organ metastases(×400)

2.5.3 PKC-ε與cIAP共定位對白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響:雙標(biāo)免疫熒光檢測結(jié)果顯示:PKC-ε與cIAP分子共定位于細(xì)胞膜,且PKC-ε的表達(dá)與cIAP的表達(dá)變化一致,提示PKC-ε可能通過調(diào)節(jié)cIAP介導(dǎo)髓系白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移(見圖9)。

圖9 PKC-ε與cIAP分子共定位結(jié)果(×200)Fig.9 Co-localization of PKC-εand cIAPmolecular( ×200)

2.5.4 PKC-ε與CD44共定位對白血病細(xì)胞增殖能力的影響:免疫熒光結(jié)果顯示:PKC-ε與CD44分子共定位于與細(xì)胞膜,且PKC-ε的表達(dá)與CD44的表達(dá)變化相反,提示PKC-ε可能通過調(diào)節(jié)CD44介導(dǎo)髓系白血病細(xì)胞增殖(見圖10)。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn):白血病耐藥細(xì)胞株高表達(dá)PKC-ε,并且化療藥物多柔比星短期處理(24 h)可以誘導(dǎo)親本細(xì)胞株中PKC-ε表達(dá)水平上調(diào);同時,P-gp蛋白表達(dá)水平與PKC-ε表達(dá)水平一致,且PKC-ε與P-gp共定位于細(xì)胞膜上,提示白血病細(xì)胞可能通過PKC-ε調(diào)節(jié)P-gp的表達(dá)從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的耐藥性。此結(jié)果與Bourbuignon等［10］報道PKC-ε通過上調(diào)乳腺癌腫瘤細(xì)胞cIAP及P-gp的表達(dá)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐藥的結(jié)果一致。此外,cIAP在耐藥細(xì)胞株中表達(dá)水平上調(diào),提示其參與腫瘤細(xì)胞耐藥性的形成。以上結(jié)果提示,PKC-ε參與介導(dǎo)白血病細(xì)胞株體內(nèi)外侵襲轉(zhuǎn)移能力的調(diào)節(jié),且白血病細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力與PKC-ε蛋白表達(dá)變化相反。免疫熒光及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明:髓系白血病細(xì)胞株CD44的表達(dá)受PKC-ε的調(diào)節(jié),添加激動劑可下調(diào)親本株CD44表達(dá)水平,而抑制劑上調(diào)耐藥株CD44的表達(dá)。軟瓊脂克隆形成實驗證明:添加激動劑能下調(diào)親本株增殖能力,而抑制劑上調(diào)耐藥株增殖能力。以上結(jié)果表明:PKC-ε參與調(diào)節(jié)髓系白血病細(xì)胞的增殖,且增殖能力與PKC-ε表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)系。免疫熒光及免疫組化結(jié)果說明:PKC-ε與P-gp共定位于細(xì)胞膜,且P-gp高表達(dá)于耐藥株轉(zhuǎn)移灶;PKC-ε與cIAP及CD44共定位于細(xì)胞膜。

綜上所述,在髓系白血病中,PKC-ε參與調(diào)節(jié)P-gp、cIAP及CD44所介導(dǎo)的白血病細(xì)胞耐藥、轉(zhuǎn)移及增殖。

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(編校:吳茜)

Study on themetastasis and proliferation ofmyelocytic leukem ic cells mediated by PKC-εregulating cIAP and CD44

BIZuo-mu1,CUIChun-ping2Δ,SUN Gui-zhen3,XU Dong1,ZHOU Qi-feng1

(1.Department of Hematology,The First Hospital Affiliated ofWeifang Medical University,Zibo 255200,China;2.Hematology Research Laboratory(National Key Laboratory),Institute of radiation medicine,Military Medical Science Academy of the PLA,Beijing 100039,China;3.Yiyuan County People's Hospital in Zibo City,Zibo 255200,China)

Objective To explore themechanism of PKC-ε though cIAP,CD44 and P-gp onmyeloid leukemia cell transfer,proliferation and drug resistance.Methods The resistant characteristics of leukemia cell parents lines and drug-resistant strains K562,K562R,HL60 and HL60R were determined by MTTmethod;PKC-εexpression levels in each strainswere detected byWestern blotand immunohistochemistry;CD44 expression in each strains were detected by immunofluorescence and flow cytomery;the proliferation ability of cell lineswere detected by soft agarose assay;co-location of PKC-ε and P-gp,cIAP and CD44 were studied by immunofluorescence.Results The experimental results shoued that the expression of PKC-ε in the myeloid leukemia drug-resistant strains were higher than the parent cell lines,and chemotherapy drug treatment could increase the PKC-εexpression of parent strains.PKC agonist and inhibition test confirmed that the correlation between myeloid leukemia cell transfer and drug resistance and PKC-ε expression was positive,and the correlation betweenmyeloid leukemia cell proliferation and PKC-εexpression was negative.Cells and metastases,cIAP and P-gp expression and the expression of PKC-εwas positively correlated,and the expression of CD44 was negatively correlated to the expression of PKC-ε.Immunofluorescence results showed that PKC-ε and P-gp,cIAP and CD44 were co-located in myeloid leukemia cell membranes.Conclusion PKC-εmediate leukemic cell transfer though regulating P-gp and cIAP,while regulate the proliferation of leukemic cellmediated by CD44.

metastasis;proliferation;PKC-ε;cIAP

R329.24

A

1005-1678（2014)06-0001-06

國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(30800558)

畢作木，男，本科，主任醫(yī)師、教授，研究方向：血液腫瘤，細(xì)胞治療，E-mail：qch1821460018@163.com；崔春萍，通信作者，女，博士，研究員，研究方向：血液學(xué)研究，E-mail：qch1821460018@163.com。