陳鑫 王上 高玲 吉文慶

基礎(chǔ)研究

丹參多酚酸鹽介導(dǎo)的心梗后大鼠心功能和心室重構(gòu)的改善

陳鑫 王上 高玲 吉文慶

目的 探討丹參多酚酸鹽對(duì)心梗后大鼠心功能和心室重構(gòu)的影響。方法 結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支建立心梗模型。術(shù)后6周內(nèi)治療組肌肉注射丹參多酚酸鹽1 mg/kg；非治療組注射生理鹽水。6周后心導(dǎo)管法測(cè)定大鼠心功能，馬松染色了解心肌組織膠原含量，免疫組化了解梗死周圍區(qū)新生血管密度。結(jié)果 治療組大鼠心功能好轉(zhuǎn)顯著優(yōu)于對(duì)照組［max dp/dt（4788.2+1069.3）mm Hg/s比（3325.2+775.9）mm Hg/s，P<0.01］，治療組梗死邊緣區(qū)的血管密度明顯高于對(duì)照組［（98.7+12.9/高倍鏡視野比69+11.0/高倍鏡視野，P<0.01］，治療組組織膠原含量明顯低于對(duì)照組［（25.8+5.9）%比（35.1+9.1）%，P<0.01］。結(jié)論 丹參多酚酸鹽可以改善大鼠心梗后心功能，降低梗死區(qū)膠原含量，促進(jìn)血管新生，改善心室重構(gòu)。

丹參多酚酸鹽； 心肌梗死； 心功能； 心室重構(gòu)

研究表明，心肌梗死后的心室重構(gòu)是引起心臟收縮功能減弱的重要因素之一[1]。也有研究表明，丹參酮多酚酸鹽可通過促進(jìn)血管新生，改善供血，從而改善心肌缺血[2]，說明多酚酸鹽對(duì)心臟缺血組織的形態(tài)和功能都會(huì)產(chǎn)生影響。本研究通過建立大鼠心梗模型，觀察心肌梗死后肌肉注射丹參多酚酸鹽對(duì)心臟形態(tài)學(xué)和血流動(dòng)力學(xué)等方面的影響，探討丹參多酚酸鹽在改善心梗后心功能和組織結(jié)構(gòu)方面的可能作用和機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 心梗模型建立 SPF級(jí)雄性Lewis大鼠16只，體重（215+15）g，隨機(jī)分為 2 組。按照文獻(xiàn)[3]沿左第4肋間隙胸壁暴露心臟，找到冠狀動(dòng)脈左前降支后，用7-0或8-0絲線結(jié)扎，結(jié)扎后左室壁變蒼白，并出現(xiàn)室壁運(yùn)動(dòng)減弱。

1.2 分組與給藥 治療組大鼠注射丹參多酚酸鹽（5 mg·kg-1·d-1）；按照文獻(xiàn)[4]對(duì)照組大鼠注射生理鹽水（5 mg·kg-1·d-1），連續(xù)給藥 6 周后取材。

1.3 心功能分析 利用心導(dǎo)管法檢測(cè)心功能。病毒轉(zhuǎn)染后6周，按照文獻(xiàn)[5]在頸部腹側(cè)偏右縱向切開皮膚，在胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)分離右頸總動(dòng)脈1.5 cm后沿插入導(dǎo)管至左室腔，測(cè)量心室內(nèi)壓力的變化速度。通過ARIA1壓力容量分析軟件分析±dp/dt作為心功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.4 心肌組織的形態(tài)學(xué)分析 新生血管密度分析使用CD31免疫組化法。按照文獻(xiàn)[6]連續(xù)切片，按照文獻(xiàn)[7]免疫組化。封片后顯微鏡觀察并拍照。在確定梗死周圍區(qū)心肌組織后，光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取多個(gè)視野拍照后,在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)CD31陽性細(xì)胞數(shù)量。

通過馬松染色觀測(cè)梗死周圍區(qū)膠原含量。光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取多個(gè)視野拍照后，按照文獻(xiàn)[8]，通過Image-Pro Plus Version 6.0軟件計(jì)算CVF值（CVF＝膠原面積/總組織面積）作為該指標(biāo)的分析結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。所有定量數(shù)據(jù)以±s表示，兩組定量資料間的比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠心梗后的心功能情況 術(shù)后6周，通過心導(dǎo)管測(cè)定大鼠心功能。與對(duì)照組相比，治療組的左室壓力上升速度和左室壓力下降速度明顯增加（P<0.01）。見表 1。

表1 兩組大鼠的心功能變化（±s）

表1 兩組大鼠的心功能變化（±s）

-dp/dtmax（mm Hg/s）對(duì)照組 421.9±28.0 3325.2±775.9 -3184.5±844.5治療組 405.6±35.7 4788.2±1069.3 -4718.7±1041.5 P值 >0.05 <0.01 <0.01組別 心率（次/min）+dp/dtmax（mm Hg/s）

2.2 兩組大鼠心梗后梗死周圍區(qū)新生血管和膠原增生情況（圖1、2，表2） 治療組和對(duì)照組樣本在400倍鏡視野下的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31陽性計(jì)數(shù)分別為（98.70±12.90）和（69.00±11.01）（n=8，P<0.01），治療組的梗死周圍區(qū)新生血管密度高于對(duì)照組；治療組和對(duì)照組的心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)分別為（25.8±5.9）%和（35.1±9.1）%（n=8，P<0.01），治療組的梗死周圍區(qū)膠原含量下降。

表2 兩組大鼠梗死周圍區(qū)新生血管和膠原含量比較（±s）

表2 兩組大鼠梗死周圍區(qū)新生血管和膠原含量比較（±s）

注：以上數(shù)據(jù)均是在光學(xué)顯微鏡×400高倍鏡視野下統(tǒng)計(jì)，CD31陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)以高倍鏡視野陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)；膠原含量＝高倍鏡視野里膠原面積/總組織面積

組別 CD31陽性細(xì)胞數(shù) 膠原含量（%）對(duì)照組 69.0±11.0 35.1±9.1治療組 98.7±12.9 25.8±5.9 P值<0.01 <0.01

3 討論

心力衰竭的治療一直是人們關(guān)注的問題。大量研究表明，心梗繼發(fā)的心力衰竭與心梗后的左室重構(gòu)關(guān)系密切。心室重構(gòu)的過程包括梗死區(qū)進(jìn)行性擴(kuò)張、心腔擴(kuò)大、心肌組織肥大、替代纖維化、心功能降低等[1]。心肌缺血是導(dǎo)致心梗后一系列病理生理變化的始動(dòng)因素，同時(shí)缺血也參與了心室重構(gòu)發(fā)展的過程。雖然繼發(fā)于心梗后的缺血可通過缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）等途徑誘導(dǎo)血管生成，但正常情況下缺血區(qū)的新生血管既不能滿足心肌梗死后組織生長(zhǎng)、修復(fù)所需，也無法為代償性肥大的心肌組織提供足夠的血供[9]。具有收縮活力的肥大心肌組織因缺乏足夠的氧氣和營(yíng)養(yǎng)而發(fā)生凋亡，進(jìn)一步導(dǎo)致梗死區(qū)擴(kuò)張、替代纖維化及心功能下降。因此，促進(jìn)缺血心肌血管生成可以減輕心肌缺血，防止細(xì)胞壞死和凋亡，預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心室重塑，從而改善心功能。

丹參多酚酸鹽能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，明顯降低冠脈阻力，擴(kuò)張冠脈血流量，加強(qiáng)心肌收縮力，阻止血小板黏附，抑制微血栓形成；還可促進(jìn)纖溶酶活性，加速已形成的微血栓溶解，改善微循環(huán)[2]。丹參酮Ⅱ-A是丹參的主要有效成分，具有明顯的抗炎、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)活性，其抑制血小板黏附、聚集及血栓形成作用，可能與競(jìng)爭(zhēng)性抑制肌動(dòng)球蛋白激活Mg2+-ATP酶活性有關(guān)[10]。

本實(shí)驗(yàn)采用大鼠心梗模型，在恢復(fù)期給予丹參酮多酚酸鹽治療。與絕對(duì)梗死區(qū)不同，梗死周圍區(qū)心肌并未完全缺血壞死，尚有大量有功能存活心肌和冬眠心肌，因此我們選用梗死周圍區(qū)作為觀察對(duì)象。治療后第6周我們發(fā)現(xiàn)，治療組大鼠心功能明顯優(yōu)于對(duì)照組，顯示丹參多酚酸鹽確實(shí)可以改善心功能。通過進(jìn)一步的觀察我們發(fā)現(xiàn)，治療組大鼠微血管密度顯著高于對(duì)照組，這也印證了我們初始的猜想，即丹參酮多酚酸鹽可以促進(jìn)組織的血管生成。為了進(jìn)一步證明丹參多酚酸鹽能減緩心室重構(gòu)，我們分析了心室重構(gòu)纖維沉積情況，發(fā)現(xiàn)治療組膠原沉積程度比對(duì)照組輕微，提示心室重構(gòu)得到緩解。這可能與使用丹參多酚酸鹽后新生血管增多，改善缺血區(qū)組織生長(zhǎng)、修復(fù)及代償性肥大的心肌組織所需的血供，減緩心肌繼續(xù)凋亡，從而抑制替代性纖維沉積等有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，缺血大鼠使用丹參酮多酚酸鹽同樣可以促進(jìn)缺血心肌的血管生成，減緩心室重構(gòu)，改善心功能。本實(shí)驗(yàn)為心梗及心梗后的左室重構(gòu)的輔助治療提供了新的思路。

圖1 治療組和對(duì)照組梗死周圍區(qū)CD31陽性細(xì)胞數(shù)（免疫組化染色，×400高倍鏡）

圖2 對(duì)照組和治療組梗死周圍區(qū)膠原含量（masson染色，×400高倍鏡）

［1］Sutton MG，Sharpe N.Left ventricular remodeling after myocardial infarction： pathophysiology and therapy. Circulation，2000，101：2981-2988.

［2］ZHANG Bo-li.Mordern research on Fufang Danshen formula-Theory and pratices of thecompatibility of components on mordern Chinese medicine.Beijing：People’s Medical Publishing House，2008：20.

［3］Jayasankar V，Woo YJ，Bish LT，et al.Gene transfer of hepatocyte growthfactor attenuates postinfarction heart failure.Circulation，2003，108：Ⅱ230-236.

［4］Yang ZX，Li ZB，Lin Q，et al.Aastraglan combined with Tanshinone blocking NF-κB activation on expression of MIF，TNF-α and IL-6 in Rats with chronic heat failure.China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy，2012，27：3221-3225.

［5］Woo YJ，Taylor MD，Cohen JE，et al.Ethyl pyruvate preserves cardiac function and attenuates oxidative injury after prolonged myocardial ischemia.J Thorac Cardiovasc Surg，2004，127：1262-1269.

［6］Woo YJ，Panlilio CM，Cheng RK，et al.Therapeutic delivery of cyclin A2 induces myocardial regeneration and enhances cardiac function in ischemic heart failure.Circulation，2006，114：206-213.

［7］Zymek P，Bujak M，Chatila K，et al.The role of platelet-derived growth factor signaling in healing myocardial infarcts.J Am Coll Cardiol，2006，48：2315-2323.

［8］Brilla CC，Janicki JS，Weber KT.Cardioreparative effects of lisinopril in rats with genetic hypertension and left ventricular hypertrophy.Circulation，1991，83：1771-1779

［9］Kocher AA，Schuster MD，Szabolcs MJ，et al.Neovascularization of ischemic myocardium by human bonemarrow-derived angioblasts prevents cardiomyocyte apoptosis，reduces remodeling and improves cardiac function.Nature medicine，2001，7：430-436.

［10］SHEN Ying-jun.Pharmacology monographs of Chinese medicine.Beijing：People’s Medical Publishing House，2009：204-205.

Therapeutic injection of Depside Salt From Salvia Miltiorrhiza induces myocardial remodeling and enhances cardiac function of ischemic heart failure

CHEN Xin，WANG Shang，GAO Ling，et al.Department of Cardiology，Drum Tower Hospital，Nanjing University Medical School，Nanjing 210008，China

Objective To study the effects of injection of Depside Salt From Salvia Miltiorrhiza on cardiac function of myocardial infarction rat.Methods Acute myocardial infarction model was built by left anterior decending coronary artery ligation.Lewis rats underwent left anterior descending coronary artery ligation followed by intramuscular injection of Depside Salt From Salvia Miltiorrhiza（n＝8）or Saline（n＝8）for six weeks.Cardiac hemodynamics parameters were done with pressure catheter.Myocardial histology was analyzed by immunohistochemistry staining.Results The hemodynamicsmanifested improvedin treatment animals（P<0.01）.The borderzone vessels densityin treatment group were demonstrated increased（P<0.01），as well as less collagen volume fraction（P<0.01）.Conclusion Depside Salt From Salvia Miltiorrhiza improves cardiac function in myocardial infarction rat，mediates the effect of ameliorating the vessel regeneration and the collagen content.

Depside Salt From Salvia Miltiorrhiza； Myocardial infarction； Cardiac function； Ventricular remodeling

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：81200092）

210008 江蘇省南京市，南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院心臟科

10．3969/j．issn．1672－5301．2014．07．014

Q95-33；R587.1

A

1672-5301（2014）07-0626－03

2014-03-20）