莊琰，崔毓桂

（1.鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州450000；2.南京醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系，江蘇南京210029）

TRPV2對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞生物學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究

莊琰，崔毓桂

（1.鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州450000；2.南京醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系，江蘇南京210029）

目的探討TRPV2離子通道對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞株5637和EJ細(xì)胞增殖及遷移侵襲的影響。方法將人膀胱癌EJ細(xì)胞株分為空白組、對(duì)照組和sh-RNA干擾組；5637細(xì)胞株分為空白組，對(duì)照組和TRPV2轉(zhuǎn)染組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)細(xì)胞篩選出單克隆陽性細(xì)胞后，采用Western blot檢測(cè)TRPV2蛋白表達(dá)的變化，鑒定基因的轉(zhuǎn)染效率。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞生長周期，MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長曲線，劃痕法檢測(cè)細(xì)胞遷移侵襲能力，Transwell法檢測(cè)細(xì)胞的浸潤能力。結(jié)果Western blot結(jié)果顯示EJ細(xì)胞干擾組的TRPV2蛋白表達(dá)量明顯低于空白組與對(duì)照組；EJ細(xì)胞干擾組G1期細(xì)胞比例，顯著高于空白組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MTT法檢測(cè)繪制細(xì)胞周期結(jié)果，3組細(xì)胞數(shù)目在第3天開始出現(xiàn)差異，干擾組的細(xì)胞數(shù)目顯著低于空白組和對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)（P＜0.05），空白組與對(duì)照組細(xì)胞相比細(xì)胞周期無顯著差異；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，干擾EJ細(xì)胞中的TRPV2表達(dá)后可以抑制EJ細(xì)胞的遷移；Transwell細(xì)胞浸潤實(shí)驗(yàn)，說明干擾EJ細(xì)胞中TRPV2的表達(dá)后可以抑制腫瘤細(xì)胞的局部浸潤作用。Western blot結(jié)果顯示，干擾組5637細(xì)胞的TRPV2蛋白表達(dá)水平明顯高于空白組和對(duì)照組；但3組細(xì)胞G1期細(xì)胞比例的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MTT法檢測(cè)繪制細(xì)胞周期結(jié)果，3組細(xì)胞的生長曲線無明顯差異；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)5637細(xì)胞中TRPV2的表達(dá)量上升后可以明顯加強(qiáng)5637細(xì)胞的遷移作用；Transwell浸潤實(shí)驗(yàn)說明經(jīng)過導(dǎo)入外源性的TRPV2使5637細(xì)胞中TRPV2的表達(dá)量上升后可以明顯加強(qiáng)5637細(xì)胞的對(duì)于局部組織的浸潤作用。結(jié)論TRPV2可能是治療膀胱腫瘤的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

膀胱腫瘤；TRPV2；增殖；遷移浸潤

膀胱腫瘤的病理分級(jí)主要有尿路上皮細(xì)胞（移行上皮癌）、鱗狀細(xì)胞癌、腺癌以及小細(xì)胞癌、混合型癌、癌肉瘤以及轉(zhuǎn)移性癌等罕見病理分類。其中，絕大部分的膀胱腫瘤為移行細(xì)胞癌［1-2］，移行細(xì)胞癌占所有膀胱腫瘤的發(fā)病比率超過90%［3-4］。本實(shí)驗(yàn)通過sh-RNA干擾EJ細(xì)胞中的TRPV2的表達(dá)，導(dǎo)入外源性的TRPV2進(jìn)入5637細(xì)胞，檢測(cè)處理后2種腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征的變化，探明TRPV2對(duì)于膀胱腫瘤的具體作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料及設(shè)備 人類膀胱腫瘤細(xì)胞株5637細(xì)胞株、EJ細(xì)胞株（ATCC，美國）；胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基、胰酶（GIBCO，美國）；蛋白提取試劑盒、ECL顯色試劑盒、RT-PCR試劑盒、顯影定影試劑盒（凱基，中國）；聚丙烯酰胺凝膠制備試劑盒（博士德，中國）；蛋白酶抑制劑（CALBIOCHEM，瑞典），G418（Sigma，美國）硝酸纖維素膜（Amersham，美國）；X-film（FUJIFLIM，日本）；ECL發(fā)光液（SANTA CRUZ，美國）；TRPV2兔抗人、大鼠、小鼠多克隆抗體（SANTA CRUZ，美國）；lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑（GIBCO，美國）；sh-TRPV2-RNA（milipore，中國）短發(fā)卡的正義鏈序列為 5′-GGTAAGACGTGCCTGATGA-3′，過表達(dá)TRPV2質(zhì)粒（鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供）。

pH計(jì)，MP220型（Mettler公司，瑞典）；電子分析天平：AE260型（Mettler公司，瑞典）；倒置顯微鏡：IX70型（OLYMPUS公司，日本）；垂直電泳－轉(zhuǎn)膜裝置（BIO-RAD300，美國）；超級(jí)恒溫儀、恒溫磁力攪拌器（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠，上海）；低溫高速離心機(jī)（Beckman，德國）；細(xì)胞培養(yǎng)箱（Jounal，法國）；倒置熒光顯微鏡（OLYMPUS公司，日本）；Gallios流式細(xì)胞儀（Beckman Coulter，美國）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞分組：將人膀胱癌EJ細(xì)胞株常規(guī)分為空白組、對(duì)照組和sh-RNA干擾組；5637細(xì)胞組分為空白組，對(duì)照組和TRPV2轉(zhuǎn)染組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 操作步驟：用lipofectamine 2000介導(dǎo)sh-TRPV2-RNA轉(zhuǎn)染EJ細(xì)胞，過表達(dá)TRPV2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染5637細(xì)胞。轉(zhuǎn)染過程：①將膀胱腫瘤細(xì)胞常規(guī)鋪6孔板，待細(xì)胞生長至融合度為約90%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染；②配置溶液1：240μL無血清培養(yǎng)基＋10μL lipofectamine 2000（總體積250μL）；溶液2：245μL無血清培養(yǎng)基＋5μL質(zhì)粒（質(zhì)粒濃度調(diào)整為1μL／μL，總體積250μL）。將上述2種溶液混合均勻備用；③在上述準(zhǔn)備好的6孔板中加入2 mL無血清培養(yǎng)基；④將“②”中混合溶液逐滴加入“③”細(xì)胞中；⑤轉(zhuǎn)染完畢后，將6孔板置于細(xì)胞培養(yǎng)基中常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)5～6 h（37℃，5%CO2）；⑥棄去上述培養(yǎng)基中液體，用滅菌的PBS清洗3遍；⑦常規(guī)48 h更換含G418的全血清培養(yǎng)基1次；⑧棄去孔內(nèi)所有的培養(yǎng)基后，小心地用PBS清洗單克隆細(xì)胞附近的培養(yǎng)基；⑨待單克隆細(xì)胞團(tuán)處的細(xì)胞變圓有脫落跡象時(shí)，轉(zhuǎn)入新的細(xì)胞培養(yǎng)板；⑩上述細(xì)胞用含有效G418濃度的全培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)傳代。

1.2.3 采用Western blot檢測(cè)TRPV2蛋白的表達(dá)鑒定基因的轉(zhuǎn)染效率。選用大鼠源性TRPV2的mRNA（NM_ 001270797.1）作為模板和人的TRPV2 blast之后，同時(shí)使用2個(gè)引物作為大鼠源性TRPV2的特異性引物。TRPV2（a）：5′-GTGACGGAACAGCCCACGGT－3′（475 bp，NM_001270797.1）；TRPV2（b）：5′-AACAAGGGGAAGCAGGAACCGC-3′（390 bp，NM_ 001270797.1）。

反應(yīng)條件為：按照95℃退火5min；95℃30 s，60℃30 s，72℃30 s總共30個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min后4℃恒溫。PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)上述細(xì)胞生長周期：常規(guī)傳代培養(yǎng)24 h后，細(xì)胞生長融合度約60%，用滅菌的PBS緩沖液清洗細(xì)胞2遍，加入胰酶消化，1000 r／min離心收集細(xì)胞。預(yù)先配制好70%的酒精，用PBS緩沖液和純乙醇按體積比3∶7配制70%的固定液，置于－20℃預(yù)冷備用。用PBS清洗細(xì)胞2遍，1000 r／min離心5min棄去上層清液。其中盡量用吸管輕輕吹勻，吹成單個(gè)細(xì)胞的懸浮液。加入越冷的70%乙醇溶液固定，注意緩慢加入，使細(xì)胞盡量均勻。4℃固定過夜。上機(jī)檢測(cè)前，3000 r／min離心5min棄去固定的乙醇，PBS清洗2次，在離心管中留1 mL PBS溶液，用吸管輕輕吹打，打亂細(xì)胞團(tuán)后加入RNase 5μL（10mg／mL），37℃放置1 h。將細(xì)胞中加入預(yù)先配制好的PI（100 ug／mL）染液500μL，輕輕吹勻。在室溫下避光染色30min后，經(jīng)小孔紗網(wǎng)濾過后行流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.2.5 MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長曲線：打開酶標(biāo)儀，預(yù)熱10 min后。用96孔板的空白孔，加入200μL的DMSO和50μL的PBS溶液作為空白調(diào)零。選擇570 nm波長，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值，記錄結(jié)果。

1.2.6 劃痕法檢測(cè)細(xì)胞遷移侵襲能力：用進(jìn)口的200μL微量移液器的槍頭進(jìn)行劃痕。劃痕的時(shí)候用直尺幫助，槍頭要平整，用力要一致，盡量使劃痕的寬度一致，每孔劃4～6個(gè)劃痕。用PBS緩沖液將上述的已經(jīng)劃痕過的6孔板清洗3遍，盡量清除已經(jīng)脫落的細(xì)胞后加入無血清的培養(yǎng)基2 mL培養(yǎng)。分別在0、6、12、24 h取樣拍照，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.2.7 Transwell法檢測(cè)細(xì)胞的浸潤能力：用50 mg／L Matrigel膠用無血清的培養(yǎng)基按照1∶8的比例稀釋，小心的用減去前部尖頭的200μL的滅菌槍頭吸取50μL的稀釋膠均勻的涂在Transwell小室底部膜的上室面，4℃風(fēng)干備用。將常規(guī)的含10%FBS的細(xì)胞全培養(yǎng)基500μL加入24孔板的下孔，此時(shí)一定要注意小室的膜和下層的培養(yǎng)基液面之間沒有氣泡產(chǎn)生，否則浸潤實(shí)驗(yàn)不能順利進(jìn)行。如有氣泡，可以用無菌槍頭調(diào)整小室的位置，使氣泡逸出。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)24 h后，將24孔板去除。小心的用棉簽擦除小室上層的細(xì)胞培養(yǎng)基以及Matrigel膠。用多聚甲醛固定后用PBS清洗后用0.1%的結(jié)晶紫染色15min，自然風(fēng)干約15min。顯微鏡下取隨機(jī)視野行細(xì)胞計(jì)數(shù)，在高倍鏡下分別取正中、正上、正下、正左、正右5個(gè)隨機(jī)視野行細(xì)胞計(jì)數(shù)，記錄結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用“±s”表示，樣本率的比較用卡方檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 shRNA-TRPV2質(zhì)粒對(duì)于膀胱腫瘤細(xì)胞株EJ細(xì)胞的干擾作用 Western blot結(jié)果顯示干擾組的TRPV2蛋白表達(dá)量明顯低于空白組與對(duì)照組，而空白組和對(duì)照組間無明顯區(qū)別，表明：小干擾sh-RNA-TRPV2片段轉(zhuǎn)染成功并能有效下調(diào)目的蛋白TRPV2的表達(dá)，而空載體對(duì)于TRPV2基因的蛋白水平表達(dá)無影響（見圖1）。

圖1 Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率的結(jié)果Fig.1 Results of transfection rates by Western blot

2.2 TRPV2轉(zhuǎn)染5637細(xì)胞篩選單克隆細(xì)胞 轉(zhuǎn)染組可見明顯的TRPV2條帶，而在空白組和對(duì)照組無對(duì)應(yīng)的條帶出現(xiàn)。表明TRPV2質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染5637細(xì)胞并且能夠在mRNA水平表達(dá)見圖2A。Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組TRPV2表達(dá)明顯上升，明顯高于空白組和對(duì)照組。進(jìn)一步證實(shí)細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功并且能在翻譯水平發(fā)揮作用。

圖2 TRPV2表達(dá)結(jié)果Fig.2 TRPV2 mRNA and protein expression results

2.3 sh-RNA-TRPV2干擾質(zhì)粒對(duì)于EJ細(xì)胞的增殖影響經(jīng)過干擾TRPV2后的EJ細(xì)胞的G1期細(xì)胞比例（63.21± 5.60）%顯著高于空白組（47.34±4.43）%和對(duì)照組（49.30± 4.86）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而空白組與對(duì)照組細(xì)胞相比細(xì)胞周期的無明顯差異。這說明干擾 EJ細(xì)胞中的TRPV2的表達(dá)后可以使細(xì)胞周期停滯在G0～G1期，細(xì)胞分裂間期時(shí)間增長，使細(xì)胞的增殖速度減慢，從而抑制腫瘤的生長。同時(shí)，在采用MTT法繪制細(xì)胞1周生長曲線也得到類似的結(jié)果，上述3種細(xì)胞小密度接種后第1、2天MTT檢測(cè)的A值無顯著差異。細(xì)胞的數(shù)目決定了結(jié)晶紫的量，所以可以用酶標(biāo)儀測(cè)量得到的A值來反映細(xì)胞數(shù)目。上述3組細(xì)胞數(shù)目在第3天開始出現(xiàn)差異，通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)含干擾組的A值顯著低于空白組和對(duì)照組，這就說明含干擾組的細(xì)胞數(shù)目顯著低于空白組和對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)（P＜0.05）。證實(shí)干擾EJ細(xì)胞中的TRPV2的表達(dá)后對(duì)于細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。

圖3 不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EJ細(xì)胞的增殖情況Fig.3 Proliferation results of EJ cells transfected with different plasmid

2.4 TRPV2過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)于5637細(xì)胞的增殖影響 轉(zhuǎn)染組5637細(xì)胞G1期細(xì)胞比例為（60.36±5.89）%，對(duì)照組（57.32 ±5.89）%，空白組（59.04±3.72）%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。MTT法檢測(cè)繪制的細(xì)胞周期也同樣發(fā)現(xiàn)，3組細(xì)胞的生長曲線無明顯差別。這說明過表達(dá)的TRPV2的質(zhì)粒對(duì)于5637細(xì)胞的生長和增殖沒有明顯影響。

圖4 不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染5637細(xì)胞的增殖情況Fig.4 Proliferation results of 5637cells transfected with different plasmid

2.5 sh-RNA-TRPV2干擾質(zhì)粒對(duì)于EJ細(xì)胞的遷移和浸潤的影響 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，干擾EJ細(xì)胞中的TRPV2的表達(dá)后可以抑制EJ細(xì)胞的遷移。Transwell細(xì)胞浸潤實(shí)驗(yàn)，全細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)發(fā)現(xiàn)，sh-RNA-TRPV2干擾組的穿過小室的細(xì)胞數(shù)目為（55.5± 9.75）×109／L，顯著少于空白組細(xì)胞（102.2±8.74）×109／L以及對(duì)照組細(xì)胞（108.5±11.89）×109／L（P＜0.05），這說明干擾EJ細(xì)胞中TRPV2的表達(dá)后可以抑制腫瘤細(xì)胞的局部浸潤作用（見圖5）。

圖5 不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EJ細(xì)胞的遷移和浸潤情況Fig.5 Migration and infiltration results of EJ cells transfected with different plasmids

2.6 TRPV2過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)于5637細(xì)胞的遷移和浸潤的影響 將上述成功篩選出的過表達(dá)的TRPV2質(zhì)粒的5637細(xì)胞和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，以及正常對(duì)照組按照上述實(shí)驗(yàn)方法中的進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，5637細(xì)胞中的TRPV2的表達(dá)量上升后可以明顯加強(qiáng)5637細(xì)胞的遷移作用。而在5637各組細(xì)胞的Transwell浸潤實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TRPV2轉(zhuǎn)染組的5637細(xì)胞穿過小室的細(xì)胞數(shù)目（86.31±7.04）顯著多于空白組（53.22±4.94）以及對(duì)照組（50.59±5.91）（P＜0.05），說明經(jīng)過導(dǎo)入外源性的TRPV2使5637細(xì)胞中TRPV2的表達(dá)量上升后可以明顯加強(qiáng)5637細(xì)胞的對(duì)于局部組織的浸潤作用（見圖6）。

圖6 不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染5637細(xì)胞的遷移和浸潤情況Fig.6 Migration and infiltration results of 5637 cells transfected with different plasmids

3 討論

目前發(fā)現(xiàn)TRPV2和膀胱腫瘤有非常密切的聯(lián)系，通過比較臨床手術(shù)所獲取的腫瘤組織標(biāo)本和正常的膀胱組織發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的TRPV2含量顯著高于正常的膀胱組織含量，并且隨著臨床腫瘤的分級(jí)分期的提高，TRPV2的表達(dá)量也顯著上升［5-6］，TRPV2可能對(duì)于膀胱腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展起到關(guān)鍵的作用。TRPV2陽離子通道有著多種功能，其中一個(gè)主要功能就是介導(dǎo)鈣離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能［7-9］。而鈣離子可以通過鈣信號(hào)通路參與細(xì)胞的增殖、凋亡、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、維持細(xì)胞的穩(wěn)定性、以及誘導(dǎo)新生血管的形成重要作用［10-13］。根據(jù)腫瘤的特性和形成的特點(diǎn)，腫瘤細(xì)胞的無限增殖和快速生長，以及誘導(dǎo)新生血管的形成、抗宿主免疫的形成都是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要條件。而這些過程都離不開鈣離子信號(hào)通路的參與，而作為鈣離子信號(hào)通路的重要組成部分，TRPV2離子通道也對(duì)膀胱腫瘤的發(fā)展起到非常重要的作用［14-15］。

本課題組研究發(fā)現(xiàn)，干擾EJ細(xì)胞中TRPV2的正常表達(dá)后，細(xì)胞的增殖速度明顯下降，而且腫瘤的侵襲性也明顯下降，說明TRPV2是維持EJ細(xì)胞的快速增殖和高惡性程度所必需的。同時(shí)通過外源性TRPV2轉(zhuǎn)染低表達(dá)TRPV2的5637細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的生長速度無明顯變化，但是惡性程度明顯加強(qiáng)，遷移和局部浸潤能力明顯加強(qiáng)。這說明TRPV2過量表達(dá)在5637對(duì)于細(xì)胞增殖速度無明顯作用，但是可以介導(dǎo)加強(qiáng)細(xì)胞的侵襲性，促進(jìn)膀胱腫瘤進(jìn)展。以上結(jié)果說明，在膀胱腫瘤細(xì)胞株中，適量TRPV2的表達(dá)對(duì)于膀胱腫瘤細(xì)胞的生長和增殖是必須的，TRPV2的表達(dá)量的增高有助于增強(qiáng)膀胱腫瘤細(xì)胞株的侵襲性。

從本課題的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，TRPV2對(duì)于膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖和惡性度的維持都有著非常重要的作用。TRPV2基因?qū)τ诎螂啄[瘤的發(fā)生發(fā)展都有著重大的意義，TRPV2有可能作為膀胱腫瘤的治療和預(yù)防的關(guān)鍵靶點(diǎn)之一。但是，后續(xù)深入研究TRPV2在膀胱腫瘤發(fā)生發(fā)展中的具體作用以及人體試驗(yàn)還是非常有意義的。

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（編校：王儼儼）

Study of biological effects of TRPV2 on bladder tumor cells

ZHUANG Yan1，CUIYu-gui2

（1.Department of Internal Medicine Oncology，The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450000，China；2.Department of clinicalmedicine，Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China）

ObjectiveTo investigate the effect of cationic channel TRPV2 on proliferation，migration and invasion of bladder cancer 5637 and EJ cells.MethodsTRPV2 over-expression plasmid was transfected into 5637 cells，and a sh-RNA-TRPV2 was transfected into EJ cells.The bladder tumor cells lines of EJand bladder tumor cells lines of5637 were divided into three groups：blank group，control group，interv or over-expression group；RTPCR and Western blotwere used to assay the expression of the transfected plasmid.Cell proliferation abilitieswere assayed by flow cytometry（FCM）and MTT assay.Cellmigration abilitieswere assayed by the scratch assay and transwell assay.ResultsWestern blot result showed that the TRPV2 protein expression of EJ cell interference group was significantly lower than blank group and control group；EJ cells proportion of G1 phase in interference group was significantly higher than that of blank group and control group（P＜0.05）；cell cycle were detected and drawed by MTTmethod，the differences of cell number in three groups began to emerged on the third day，the cell number of interference group was significantly lower than that of blank group and control group（P＜0.05），but there were no significant difference between blank control group and negative control group in cell cycle；scratch test showed that themigration of EJcellswas inhibited after the lower expression of TRPV2；Transwellassay showed that the local infiltration effectof EJcells was inhibited after the lower expression of TRPV2.Western blot result showed that the TRPV2 protein expression of 5637 cells in TRPV2 transfected group was significantly higher than blank group and control group；5637 cells proportion of G1 phase in three groups has no significantly differences（P＜0.05）；cell cycle were detected and drawed by MTTmethod，the differences of cell number in three groupswas no obviously differences；scratch test showed that themigration of 5637 cellswas enhanced after the higher expression of TRPV2；Transwell assay showed that the local infiltration effect of5637 cellswas enhanced after the higher expression of TRPV2.ConclusionTRPV2 may be a new target for therapy of bladder tumors.

bladder tumor；TRPV2；proliferation；migration invasion

莊琰，女，研究生，研究方向：肺癌的靶向治療，E-mail：qch1821460019＠163.com。

R34

A

1005－1678（2014）09－0068－04

2011國家自然科學(xué)基金（81170559）