王友川，李津

（1.山東省勝利油田中心醫(yī)院藥學(xué)部，山東東營257034；2.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院干部保健特診科，福建廈門361000）

葛根提取物對糖尿病模型大鼠氧化應(yīng)激影響的實(shí)驗(yàn)研究

王友川1，李津2

（1.山東省勝利油田中心醫(yī)院藥學(xué)部，山東東營257034；2.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院干部保健特診科，福建廈門361000）

目的研究葛根提取物對糖尿病模型大鼠氧化應(yīng)激的影響。方法采用高糖高脂食物喂養(yǎng)聯(lián)合單次腹腔注射鏈脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型。將所有大鼠隨機(jī)分3組，正常對照組10只，不造模，給予普通飼料喂養(yǎng)；糖尿病組10只，為糖尿病造模成功的大鼠；葛根組10只，為糖尿病造模成功的大鼠，給予葛根提取物灌胃。12周后，對比3組大鼠的血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平、腎臟中丙二醛（MDA）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性以及過氧化氫酶（CAT）含量，觀察腎臟病理形態(tài)改變情況。結(jié)果12周后，糖尿病組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平顯著高于對照組大鼠；葛根組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平顯著低于糖尿病組大鼠，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；12周后，糖尿病組大鼠腎臟中丙二醛（MDA）含量顯著高于對照組，T-SOD活性及CAT含量顯著低于對照組大鼠；葛根組大鼠MDA含量顯著低于糖尿病組，T-SOD活性及CAT含量顯著高于糖尿病組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；12周后，糖尿病組與葛根組大鼠腎臟病理均有所改變，葛根組大鼠腎臟病理較糖尿病組大鼠明顯有所改善。結(jié)論葛根提取物能夠明顯改善糖尿病大鼠的氧化應(yīng)激指標(biāo)。

葛根提取物；糖尿病；氧化應(yīng)激反應(yīng)

糖尿?。╠iabetes）是由于胰島素分泌不足或其生物作用受損，導(dǎo)致血液中葡萄糖濃度上升而引起一系列機(jī)體功能障礙的代謝性疾?。?］。作為代謝性疾病，糖尿病除了血糖長時間處于高水平狀態(tài)下外，血壓以及血脂也會出現(xiàn)異常，從而導(dǎo)致出現(xiàn)神經(jīng)、血管功能及結(jié)構(gòu)等異常，出現(xiàn)并發(fā)癥，如糖尿病足、糖尿病腎病等［2］。本病臨床表現(xiàn)為多飲、多尿、多食、消瘦、疲乏無力以及肥胖等［3］。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，人們更加重視本病對生活質(zhì)量的影響。近年研究［4］表明氧化應(yīng)激在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中有關(guān)鍵的重要作用。研究認(rèn)為葛根提取物具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤的作用［5］，同時具有降血脂和抗動脈粥樣硬化等的藥理學(xué)作用［6］。目前關(guān)于葛根提取物對糖尿病大鼠的治療作用，國內(nèi)研究相對較少［7］，因此本研究旨在通過建立糖尿病大鼠模型，檢測血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平、腎臟中MDA、T-SOD活性以及CAT含量、腎臟病理形態(tài)改變等指標(biāo)，對葛根提取物對糖尿病大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)影響的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康SPF級雄性SD大鼠，體質(zhì)量（160.2± 18.3）g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，許可證號：SCXK（滬）2013-0005。飼養(yǎng)室溫度20℃～25℃，相對濕度40%～70%。本實(shí)驗(yàn)需遵循《實(shí)驗(yàn)動物保護(hù)條例》，遵守3R原則。

1.2 飼料的準(zhǔn)備 普通喂養(yǎng)飼料成分：60%的碳水化合物、22%的蛋白質(zhì)、10%的脂肪及8%其他成分；高糖高脂喂養(yǎng)飼料成分：在普通喂養(yǎng)飼料中增加15%的豬油、20%的蔗糖、3%的膽固醇、1%的膽酸鈉以及適量的磷酸氫鈣、酪蛋白、石粉等。

1.3 給藥方法 在保證實(shí)驗(yàn)動物自由飲水及進(jìn)食的條件下，正常組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，3 d后向大鼠腹腔內(nèi)注射檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液；糖尿病組與葛根組大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，3 d后向大鼠腹腔內(nèi)注射檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液稀釋的鏈脲佐菌素55mg／kg，當(dāng)天禁食不禁水，次日于尾靜脈取血，測定血糖大于11.1mmol／L，確定造模成功。葛根組大鼠造模后每天通過灌胃給予葛根提取物懸浮液200mg／kg，1天1次，對照組與糖尿病組大鼠均給予等量生理鹽水，2周后比較3組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平，MDA、T-SOD活性以及CAT含量，觀察各組大鼠腎臟病理形態(tài)改變情況。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.4.1 血糖、血肌酐及24 h尿蛋白水平 所有大鼠尾靜脈取血，采用血糖儀測量血糖濃度，采用自動生化分析儀測量血肌酐及24 h尿蛋白。

1.4.2 MDA、T-SOD活性以及CAT含量測定 所有大鼠處死后稱取0.5 g腎皮質(zhì)組織置于4.5mL冰冷生理鹽水中制成組織勻漿，低溫離心，取上清液，采用使用放免法測量 MDA、T-SOD活性及CAT含量［免疫熒光試劑盒（Sigma-Aldrich，美國）］，所有操作均嚴(yán)格按說明書操作。

1.4.3 腎臟病理形態(tài)觀察 取大鼠腎臟組織，采用常規(guī)方法制備腎臟石蠟切片，進(jìn)行Masson染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正態(tài)計(jì)量資料用“±s”表示，正態(tài)資料組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠血糖、血肌酐及24 h尿蛋白水平比較 12周后，糖尿病組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平顯著高于對照組大鼠（P＜0.05），表明模型構(gòu)建成功；葛根組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平顯著低于糖尿病組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

表1 3組大鼠血糖、血肌酐及24 h尿蛋白水平比較Tab.1 Comparison of blood sugar，blood creatinine and 24 h urinary protein level among three groups

2.2 3組大鼠MDA、T-SOD活性及CAT含量比較 12周后，糖尿病組大鼠MDA顯著高于對照組大鼠，T-SOD活性及CAT含量顯著低于對照組大鼠；葛根組大鼠MDA顯著低于糖尿病組大鼠，T-SOD活性及CAT含量顯著高于糖尿病組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

表2 3組大鼠MDA、T-SOD活性以及CAT含量指標(biāo)比較情況Tab.2 Comparison of MDA，T-SOD activity and CAT content among three groups

2.3 3組大鼠腎臟病理形態(tài)改變比較 12周后，糖尿病組與葛根組大鼠腎臟病理均有所改變，葛根組大鼠腎臟病理較糖尿病組大鼠明顯有所改善。Masson染色結(jié)果顯示：對照組大鼠腎組織石蠟切片在光鏡下為正常綠色膠原纖維；糖尿病組大鼠綠色膠原纖維增多，且基底膜彌漫增厚，腎小球體積略大于對照組；葛根組綠色膠原纖維較對照組有所增多，較糖尿病組有所減少，系膜增生明顯減輕（見圖1）。

圖1 3組大鼠腎臟切片染色結(jié)果Fig.1 Staining results of rats kidney slices in three groups

3 討論

隨著社會的不斷發(fā)展，生活水平的不斷提高，糖尿病的發(fā)病率正逐年增長，嚴(yán)重危害人體健康，影響患者的生活質(zhì)量。研究表明糖尿病的主要危害在于糖尿病并發(fā)癥，其中糖尿病腎病影響整個機(jī)體代謝，且未發(fā)現(xiàn)明確有治療效果的藥物［8-9］。

糖尿病大鼠由于高血糖致使血管損傷，使得血管內(nèi)壁組織成分改變，氧化應(yīng)激在其中有重要作用，因其會使自由基產(chǎn)生增加，從而出現(xiàn)抗氧化能力減弱。陳湘宏等［10］研究認(rèn)為抗氧化劑可減少自由基的產(chǎn)生亦或是直接消滅自由基，達(dá)到抗氧化作用。楊志勇［11］研究認(rèn)為葛根提取物對由糖尿病引起的氧化應(yīng)激變化有一定影響，同時具有降血脂和抗動脈粥樣硬化的功能等。本研究通過建立糖尿病大鼠模型，檢測健康大鼠、糖尿病大鼠以及經(jīng)過葛根提取物治療的糖尿病大鼠的血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平，MDA、T-SOD活性以及CAT含量，腎臟病理形態(tài)改變等指標(biāo)，探討葛根提取物對糖尿病大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。作為代謝性疾病，陳琳等［12］研究表明糖尿病除了血糖升高外，隨著疾病的發(fā)展，腎臟受到累及，因而血肌酐、24 h尿蛋白水平、MDA、T-SOD活性、CAT含量以及腎臟病理形態(tài)均有異常。本研究結(jié)果顯示糖尿病組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平顯著高于對照組大鼠，葛根組大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平顯著低于糖尿病組大鼠，與楊志勇［11］結(jié)果相似；糖尿病組大鼠MDA明顯高于對照組，T-SOD活性及CAT含量明顯低于對照組大鼠；葛根組大鼠MDA明顯低于糖尿病組大鼠，葛根組大鼠T-SOD活性及CAT含量明顯高于糖尿病組大鼠，與趙敬等［13］報(bào)道一致；糖尿病組與葛根組大鼠腎臟病理均有所改變，葛根組大鼠腎臟病理較糖尿病組大鼠有明顯改善，與常曉慧等［14］研究結(jié)果相似。

綜上所述，葛根提取物能夠明顯改善糖尿病大鼠的血糖、血肌酐、24 h尿蛋白水平、MDA、T-SOD活性以及CAT含量以及腎臟組織形態(tài)，值得進(jìn)一步探討。

［1］董志超，何際嬋，王天群，等.肉桂提取物對α-葡萄糖苷酶活性及糖尿病模型大鼠餐后高血糖的抑制作用［J］.中國藥房，2013，47（9）：4421-4424.

［2］唐英，陳剛，曹和欣，等.糖尿病腎病抗氧化治療的中醫(yī)藥研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2014（1）：202-204.

［3］朋紅霞，章雪蓮，王億平，等.中藥干預(yù)糖尿病腎病氧化應(yīng)激狀態(tài)的研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2014（1）：85-88.

［4］郭保根.參芪復(fù)方對KKAy小鼠糖尿病大血管病變差異基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究［D］.成都中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

［5］高宗桂.川芎嗪干預(yù)大鼠缺血性中風(fēng)作用及其機(jī)制的研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué).2014.

［6］趙丹丹.降糖消渴顆粒對DM大鼠的作用及AMPK信號通路的影響研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

［7］劉乃彬.血糖波動對2型糖尿病大鼠種植體骨結(jié)合影響的實(shí)驗(yàn)研究［D］.陜西：第四軍醫(yī)大學(xué)，2013.

［8］趙興國.黃連解毒湯對2型糖尿病影響的臨床研究及對2型糖尿病大鼠血管HIF-1α、VEGF影響的實(shí)驗(yàn)研究［D］.山東：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

［9］高巍，張雪梅，朱路甲.姜黃素對糖尿病大鼠氧化應(yīng)激的影響［J］.中國食品添加劑，2013（1）：88-91.

［10］陳湘宏，文紹敦，吳萍等.蕪菁不同提取物對糖尿病模型小鼠降血糖作用的研究［J］.中國藥房，2013（7）：596-598.

［11］楊志勇.葛根醇提物對糖尿病模型大鼠血脂與血管的保護(hù)作用［J］.中國藥房，2013，43（5）：4063-4065.

［12］陳琳，喻明，夏娟，等.咖啡對糖尿病大鼠胰島素分泌、敏感性及氧化應(yīng)激影響［J］.中南藥學(xué)，2013（6）：424-428.

［13］趙敬.糖腎平對DKD大鼠腎臟保護(hù)作用及TGF-β_1-Smad2／3-ILK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響的研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

［14］常曉慧，向陽.復(fù)合天然藥物提取物對2型糖尿病大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能的影響［A］.中華中醫(yī)藥學(xué)會.中華中醫(yī)藥學(xué)會第二屆岐黃論壇——血液病中醫(yī)藥防治分論壇論文集［C］.中華中醫(yī)藥學(xué)會：2014：8.

（編校：吳茜）

Experiment study on the effect of kudzu root extract on oxidative stress in diabetic model rats

WANG You-chuan1，LIJin2

（1.Department of Pharmacy，Shandong ShengliOilfield Central Hospital，Dongying 257034，China；2.Cadre Health Special Clinic Branch，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Xiamen University，Xiamen 361000，China）

ObjectiveTo observe the effect of kudzu root extract on oxidative stress of diabetic model rats.MethodsDiabetic rats model was established by high sugar，high fat diet combining single intraperitoneal injections of streptozotocm（STZ）.All rats were random ly into three groups，normal control group had 10 rats，were given the ordinary feed，diabetes group and kudzu rootgroup both had 10 diabetes rats，and the latter were given kudzu root extract.12 weeks later，blood glucose，serum creatinine and 24 h urinary protein，MDA，T-SOD activity and CAT content changes in three groupswere determined and compared.ResultsAfter 12 weeks，the blood glucose，serum creatinine and 24 h urine protein levels of rats in diabetes group were significantly higher than control group rats，those indexes of rats in kudzu root group were significantly lower than diabetes group，the differenceswere all statistically significant（P＜0.05）.After 12 weeks，MDA content of rats in diabetes group was significantly higher than that of control group，T-SOD activity and CAT contentwere significantly lower than control group；MDA content of rats in kudzu root group was significantly lower than that in diabetes group，T-SOD activity and CAT content were significantly higher than diabetes group，the differences were all statistically significant（P＜0.05）.After 12 weeks，rats of diabetes group and puerarin group all had kidney pathological change，and compared with diabetes group，renal pathology in kudzu root group were improved obviously.Conclusion Kudzu root extract could significantly improve the blood glucose，serum creatinine and 24 hours urinary protein level，MDA content，T-SOD activity and CAT content and kidney tissuemorphology of diabetic rats.

kudzu root extract；diabetes；oxidative stress response

R587.1

A

1005－1678（2014）08－0029－03

福建省衛(wèi)生廳項(xiàng)目（2013-2-87）

王友川，男，本科，副主任醫(yī)師、藥師，研究方向：中藥調(diào)配，E-mail：bnwychuan＠126.com。