張建斌，李曉慧

（1.長治醫(yī)學(xué)院附屬和濟(jì)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山西長治046011；2.長治醫(yī)學(xué)院附屬和濟(jì)醫(yī)院神經(jīng)康復(fù)科，山西長治046000）

草酸艾司西酞普蘭對大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用

張建斌1，李曉慧2

（1.長治醫(yī)學(xué)院附屬和濟(jì)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山西長治046011；2.長治醫(yī)學(xué)院附屬和濟(jì)醫(yī)院神經(jīng)康復(fù)科，山西長治046000）

目的探討草酸艾司西酞普蘭對局灶性腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及可能的機(jī)制。方法取SD雄性大鼠160只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組）、生理鹽水組(NS組）、干預(yù)組(CIT組，又分干預(yù)14 d組和21 d組）。線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注(MCAO）模型，使用改良神經(jīng)功能缺損(modified neurological severity score，mNSS）量表評價各組大鼠神經(jīng)功能缺損情況。分別于術(shù)后14 d和21 d按不同的實(shí)驗(yàn)時間點(diǎn)，使用激光共聚焦技術(shù)觀察各組大鼠缺血區(qū)微血管直徑、密度和總面積。酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）濃度。免疫組化染色法和蛋白質(zhì)印跡法檢測VEGF表達(dá)。結(jié)果模型制作后，干預(yù)14 d組和干預(yù)21 d組內(nèi)的大鼠神經(jīng)功能缺損情況明顯改善，各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果如下：術(shù)后14 d mNSS評分，生理鹽水組評分為(6.57±1.13）分，干預(yù)14 d組評分為(4.39±0.92）分，較生理鹽水組明顯降低(P＜0.05）；術(shù)后21 d mNSS評分，干預(yù)21 d組［(3.23±0.55）分］較干預(yù)14 d組［(4.14±0.74）分］明顯降低(P＜0.01）。術(shù)后14 d三維共聚焦結(jié)果顯示：藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移而逐步見效。術(shù)后14 d酶聯(lián)免疫吸附法結(jié)果顯示：相對于假手術(shù)組、生理鹽水組干預(yù)14 d組和干預(yù)21 d組血漿VEGF濃度顯著增加，藥物干預(yù)后的實(shí)驗(yàn)組VEGF蛋白水平可顯著增高。術(shù)后14 d免疫組化分析法顯示：干預(yù)21 d組缺血腦組織VEGF表達(dá)顯著性高于干預(yù)14 d組(P＜0.01）。結(jié)論草酸艾司西酞普蘭可以明顯減輕腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)損傷和改善神經(jīng)功能，具有神經(jīng)保護(hù)作用，且藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移而逐步增強(qiáng)，其機(jī)制可能與VEGF介導(dǎo)的血管新生有關(guān)。

草酸艾司西酞普蘭；腦缺血；神經(jīng)保護(hù)；血管內(nèi)皮生長因子

據(jù)國內(nèi)權(quán)威專著調(diào)查統(tǒng)計(jì)，我國的腦血管疾病已成為嚴(yán)重危害人民健康的三大致死疾病之首，每年新發(fā)的近200萬腦血管疾病中約80%為缺血性腦血管?。╥schemic cerebralvascular diease，ICD）［1］。由于其高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率，且存活患者中3/4存在著不同程度的功能殘疾和抑郁狀態(tài)，給社會和患者家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)［2］。目前臨床上主要應(yīng)用的神經(jīng)保護(hù)治療藥物多為一些中成藥制劑，使用時間長、不良反應(yīng)多、療效不確切［3］。為此，本課題選用缺血再灌注大鼠模型，在草酸艾司西酞普蘭（escitalopram oxalate tablets，CIT）藥物干預(yù)情況下，觀察不同時間點(diǎn)各組大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)情況，通過激光共聚焦技術(shù)檢測各組大鼠缺血區(qū)腦組織的血管新生情況，同時通過檢測缺血區(qū)的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)情況來探討其可能的分子生物學(xué)機(jī)制［4］，以期為臨床治療ICD提供新的治療方法或開辟新的方向。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 從中南大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心購得雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠160只，許可證號：SCXK（湘）2008～0004，SPF級，8～114日齡，體質(zhì)量180～220 g。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 儀器：MRi23型高速多功能冷凍離心機(jī)（美國JOUAN公司）；SW-CJ-IF型超凈工作臺（蘇凈集團(tuán)安泰公司）；XDS-1B型倒置相差顯微鏡（重慶光學(xué)儀器廠）；FLUOVIEWFV1000型激光共聚焦顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；MHR-02實(shí)驗(yàn)室用微波爐（青島邁可威公司）；CUT6062石蠟切片機(jī)（德國SLEE公司）；YT-7C型生物組織烤片機(jī)（金華市益迪醫(yī)療設(shè)備廠）；202-0A型電熱干燥箱（杭州藍(lán)天儀器有限公司）；CX31-BIM雙目生物顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；DELTA320 pH計(jì)（梅特勒-托利多上海有限公司）；JT2002型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；2432-50型北京沙東線栓（北京沙東生物技術(shù)有限公司）。

1.2.2 主要藥品和試劑：草酸艾司西酞普蘭（山東京衛(wèi)制藥有限公司）；異硫氰酸熒光素-FITCF8070-50（美國Sigma公司）；兔抗大鼠VEGF抗體（北京博奧森生物公司）；SABC免疫組化試劑盒（武漢博士德生物公司）；DAB試劑盒（南京凱基生物公司）；其他免疫組化試劑（福州邁新生物公司）。

1.3 方法

1.3.1 動物分組處理：按體質(zhì)量將所有實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成3組，分別為假手術(shù)組、生理鹽水組、干預(yù)組（CIT組，干預(yù)14 d和干預(yù)21 d組）。采用改良Longa-Zea線栓法［9］制作大腦中動脈閉塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）再灌注模型。假手術(shù)組僅分離血管，暴露右側(cè)頸總動脈、頸外動脈及頸內(nèi)動脈，不進(jìn)行手術(shù)插線和結(jié)扎操作，不做缺血再灌注。將CIT磨制成粉末，使用0.9%氯化鈉溶液溶解，配制成20mg/100mL的混懸液。2個CIT藥物干預(yù)組的大鼠在模型制作后按2mg/（kg·d）的標(biāo)準(zhǔn)灌胃，分別持續(xù)給藥至14 d或21 d；生理鹽水組大鼠在模型制作后2 h開始給予等容積生理鹽水（10 mL/kg，每只大鼠按比例折算約為2mL/d）灌胃，灌胃均于每天上午8：30執(zhí)行；假手術(shù)組大鼠不給藥，只做常規(guī)飼養(yǎng)觀察。

1.3.2 檢測指標(biāo)：激光共聚焦三維腦血管成像：于術(shù)后14 d及21 d，每組（共6組分為2個時間點(diǎn)進(jìn)行，每個時間點(diǎn)3組——假手術(shù)組、生理鹽水組、干預(yù)14 d或21 d組）分別取5只大鼠常規(guī)麻醉后，通過股靜脈給予異硫氰酸熒光素標(biāo)記物FITC-低分子右旋糖苷［相對分子質(zhì)量2×106，50mg/（mL·kg），Sigma公司］標(biāo)記血漿，1min后快速斷頭取腦，取動物腦組織置入4%的多聚甲醛外的冰盒中固定24～48 h，避光。標(biāo)本采用振動切片機(jī)冠狀切片，選取視交叉部位，向大腦端連續(xù)切片，片厚100μm。用激光掃描共聚焦顯微鏡掃100個層面。綠色熒光所占體積表示血漿灌注量，顯微鏡下獲得的圖像，分析血管直徑小于8mm的血管，觀察血管形態(tài)、內(nèi)徑、密度及單位面積熒光物質(zhì)點(diǎn)數(shù)。

酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿VEGF濃度：于術(shù)后14 d及21 d，每組（共6組分為2個時間點(diǎn)進(jìn)行，每個時間點(diǎn)3組——假手術(shù)組、生理鹽水組、干預(yù)14 d及21 d組）分別取5只大鼠靜脈外周血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿VEGF水平，具體操作過程依照試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）說明書進(jìn)行。首先用EDTA抗凝管采集各組大鼠外周血約3mL，30min內(nèi)離心，收集上層血漿，分裝后-20℃保存。樣品檢測不稀釋，預(yù)包被抗大鼠VEGF抗體96孔板上加樣品（2份）和標(biāo)準(zhǔn)品（2份）：將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按照100μL，依次加在一排7孔中，1孔僅加樣品稀釋液作為零孔并增1孔，作為TMB空白顯色孔；將準(zhǔn)備好的生物素抗大鼠VEGF抗體工作液，按每孔100μL依次加入，TMB空白顯色孔除外；將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔100μL依次加入，TMB空白顯色孔除外；按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30 min的TMB顯色液，37℃避光反應(yīng)15min；按每孔100μL依次加入TMB終止液，最后應(yīng)用RT-2100C型酶標(biāo)儀（美國Rayto生命和分析科學(xué)有限公司），選擇在450 nm波長處檢測吸光度，并采用軟件計(jì)算各組大鼠樣品的VEGF濃度。

免疫組化染色法檢測各組大鼠腦組織中VEGF表達(dá)：于術(shù)后14 d及21 d，每組（共6組分為2個時間點(diǎn)進(jìn)行，每個時間點(diǎn)3組——假手術(shù)組、生理鹽水組、干預(yù)14 d及21 d組）分別取5只大鼠行免疫組化染色檢測，組織灌注與固定簡要手術(shù)步驟如下：首先以10%水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉，多聚甲醛持續(xù)灌注30min后，取材動物腦組織，并用4%的多聚甲醛后固定，脫水與石蠟包埋。行VEGF免疫組化。一抗為鼠抗VEGF，1：200，切片經(jīng)脫蠟致水，孵育，吸干，加一抗EGF抗體4℃過夜；加生物化二抗工作液37℃下孵育約20min；加過氧化物酶標(biāo)記，并用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，ABC孵育，DAB后顯色。取1 mL蒸餾水，試劑盒中A，B，C試劑各1滴，混勻后滴加至切片中央，輕輕搖勻。室溫下放置15min，蒸餾水洗滌→蘇木素溶液輕度復(fù)染1min，用鹽酸酒精分化，脫水，用二甲苯透明，后用中性樹脂封片，在倒置顯微鏡下觀察并拍照，使用Image-Pro Plus 6.0軟件分析免疫組化圖片，測定IOD光密度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用±s”表示，兩樣本間比較采用配對t檢驗(yàn)，多樣本均數(shù)采用采用單因素方差分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠的神經(jīng)功能缺損評分 模型制作前1 d，假手術(shù)、生理鹽水組、干預(yù)14 d組和干預(yù)21 d組mNSS評分，4組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明此時4組大鼠的腦神經(jīng)均無損傷，神經(jīng)功能正常，術(shù)前各組大鼠的生理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)基本相同；術(shù)后2 d測評，假手術(shù)組大鼠僅有輕微的神經(jīng)功能缺損（2.13±0.35）分，隨著時間的推移，各組大鼠神經(jīng)功能缺損均有不同程度恢復(fù)；術(shù)后14 d測評，假手術(shù)組大鼠mNSS評分變化不大，生理鹽水組、干預(yù)14 d組和干預(yù)21 d組的mNSS評分都有不同程度下降，干預(yù)14 d組明顯低于生理鹽水組，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明干預(yù)14 d組神經(jīng)功能的恢復(fù)明顯優(yōu)于生理鹽水組；術(shù)后21 d測評，假手術(shù)組大鼠mNSS評分仍然變化不大，其它3組干預(yù)21 d組＜干預(yù)14 d組＜生理鹽水組，在CIT藥物連續(xù)21 d的作用下，干預(yù)21 d組大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)明顯優(yōu)于干預(yù)14 d組（見表1）。

表1 各組大鼠改良神經(jīng)功能缺損評分結(jié)果Tab.1 Results ofmNSS in each groups

2.2 激光共聚焦三維腦血管成像 術(shù)后14 d所做的大鼠腦組織激光共聚焦分析結(jié)果見圖1、表2。干預(yù)14 d組、21 d組的毛細(xì)血管直徑較假手術(shù)組和生理鹽水組明顯減少（P＜0.01）；干預(yù)14 d組、21 d組的血管密度較假手術(shù)組及生理鹽水組均有顯著增大（P＜0.01）；干預(yù)14 d組、21 d組大鼠缺血區(qū)微血管總面積顯著增加與假手術(shù)組和生理鹽水組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。干預(yù)21 d組血管直徑小于干預(yù)14 d組；血管密度較干預(yù)14 d組顯著增多（P＜0.01）；微血管總面積顯著大于干預(yù)14 d組（P＜0.01），說明藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移而逐步見效，在CIT藥物連續(xù)3周的作用下，干預(yù)21 d組大鼠腦血管的新生和恢復(fù)明顯優(yōu)于干預(yù)14 d組（見表2）。

圖1 腦缺血大鼠缺血區(qū)微血管激光共聚焦三維成像結(jié)果Fig.1 Confocal 3D imaging results ofmicrovascular in cerebral ischemic area of cerebral ischemia rats

表2 腦缺血大鼠缺血區(qū)微血管激光共聚焦三維成像分析Tab.2 Confocal 3D imaging analysis ofmicrovascular in cerebral ischemic area of cerebral ischemia rats

2.3 血漿VEGF濃度 術(shù)后14 d，用酶聯(lián)免疫吸附法測得假手術(shù)組、生理鹽水組和干預(yù)14 d組3組間大鼠血漿VEGF濃度存在明顯差異。其中，生理鹽水組和干預(yù)14 d組均顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01），而干預(yù)14 d組也顯著高于生理鹽水組（P＜0.01）。術(shù)后21 d，干預(yù)21 d組大鼠血漿VEGF濃度值與干預(yù)14 d組相比較，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，見表3）。

表3 血漿VEGF濃度Tab.3 The plasma concentrations of VEGF

2.4 免疫組化染色法檢測各組大鼠腦組織中VEGF表達(dá)免疫組化染色結(jié)果可見：VEGF陽性細(xì)胞具有神經(jīng)元的形態(tài)特征，主要分布在大腦皮質(zhì)、海馬和紋狀體等腦區(qū)，表現(xiàn)為胞漿呈棕黃色深染，缺血區(qū)周圍較多，而缺血中心區(qū)則很少，在神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞上均有表達(dá)（見圖2）。

缺血再灌注14 d到21 d，都可以見到VEGF表達(dá)，術(shù)后14 d從上述3區(qū)域的VEGF免疫組化光密度值（IOD）分析，干預(yù)14 d組顯著高于假手術(shù)組和生理鹽水組的IOD值（海馬區(qū)F= 1440.2，P＜0.01；皮質(zhì)區(qū)F=647.04，P＜0.01；紋狀體區(qū)F= 1549.59，P＜0.01），進(jìn)一步證實(shí)腦缺血后VEGF的表達(dá)水平是上調(diào)的，且經(jīng)過藥物干預(yù)后VEGF的表達(dá)水平明顯增高（見圖3）。術(shù)后21 d從上述3區(qū)域的VEGF免疫組化光密度值（IOD）可知，干預(yù)21 d組與干預(yù)14 d組存在顯著的差異性：①海馬區(qū)，干預(yù)21 d（391.64±11.47）與干預(yù)14 d（359.24±12.38）比較（P＜0.01）；②皮質(zhì)區(qū)，干預(yù)21 d（689.37±41.38）與干預(yù)14 d（628.56±35.63）比較（P＜0.01）；③紋狀體區(qū)，干預(yù)21 d（681.67±23.64）與干預(yù)14 d（616.89±11.34）比較（P＜0.01），說明CIT藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移呈現(xiàn)逐步增強(qiáng)的趨勢。

圖2 大鼠缺血側(cè)VEGF的陽性表達(dá)Fig.2 VEGF positive expression levels of rats in ischemia side

圖3 腦缺血14 d大鼠VEGF免疫組化陽性IOD分析圖Fig.3 IOD graph of immunohistochemical assay of VEGF in rats with cerebral ischemia for 14 d

2.5 蛋白質(zhì)印跡分析法測定各組大鼠腦組織中VEGF表達(dá) Western blot結(jié)果顯示：術(shù)后14 d的大鼠假手術(shù)組、生理鹽水組和干預(yù)14 d組3組間的蛋白條帶灰度值存在明顯差異；生理鹽水組和干預(yù)14 d組顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01），干預(yù)14 d組顯著高于生理鹽水組（P＜0.01）。干預(yù)21 d組的蛋白條帶灰度值與干預(yù)14 d組相比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，見圖4）。結(jié)果表明：CIT藥物對腦缺血后VEGF蛋白表達(dá)有明顯上調(diào)作用，CIT藥物干預(yù)后可增加大鼠缺血區(qū)的腦組織中VEGF的含量，并隨著用藥時間延長而增加。

圖4 蛋白印跡法檢測各組大鼠缺血區(qū)腦組織VEGF蛋白表達(dá)水平分析圖Fig.4 Diagram of expression levels of VEGF protein in cerebral ischemia tissues by Western blot

3 討論

腦缺血后腦組織中的血管新生對腦神經(jīng)的保護(hù)及修復(fù)，有十分重要的作用［5-6］。在腦缺血早期，病灶周邊區(qū)域尚存在“缺血半暗帶”，這時如果能夠及時恢復(fù)血供，可在一定程度上逆轉(zhuǎn)缺血半暗帶內(nèi)神經(jīng)元的損傷，將腦缺血性損傷降低到最低點(diǎn)［7-8］。目前，眾多研究者瞄準(zhǔn)腦缺血后血管新生機(jī)制及有效的調(diào)控手段，力求尋找新的治療藥物和干預(yù)措施以促進(jìn)腦缺血后的血管新生，盡最大可能來恢復(fù)患者神經(jīng)缺失功能，提高患者生存質(zhì)量［9-14］。本課題觀察發(fā)現(xiàn)，動物造模后的14～21 d，CIT干預(yù)組大鼠腦缺血病灶邊沿清晰，腦表面淺表血管分支明顯增加，而且這些血管分支都向腦缺血病灶部位匯聚，并可見一部分血管分支跨越缺血病灶表面，這說明CIT對腦缺血性病灶的吸收愈合和腦缺血后重建血管網(wǎng)有促進(jìn)作用。

本研究結(jié)果顯示：CIT藥物干預(yù)后通過促進(jìn)血管發(fā)生，可以有效地改善急性腦缺血再灌注大鼠損傷的神經(jīng)功能。在大鼠造模2 d時測評各組大鼠的mNSS分?jǐn)?shù)可知，除假手術(shù)組大鼠出現(xiàn)輕微的神經(jīng)功能缺損外，生理鹽水組、干預(yù)14 d組和干預(yù)21 d組大鼠均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損，但伴隨時間的推移，3組大鼠神經(jīng)功能缺損均有不同程度恢復(fù)；大鼠造模14 d測評，干預(yù)14 d組和干預(yù)21 d組大鼠的神經(jīng)功能評分分?jǐn)?shù)下降較快，損傷程度相對較輕；而生理鹽水組大鼠的神經(jīng)功能評分分?jǐn)?shù)較高，損傷程度較重。說明CIT藥物干預(yù)對腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)十分明顯，而且藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移逐步增強(qiáng)。為進(jìn)一步探索其機(jī)制，檢測了血漿VEGF水平和腦缺血區(qū)三維血管成像，結(jié)果顯示2個干預(yù)組大鼠的血管密度明顯增加，血流恢復(fù)較快，而生理鹽水組的血管密度與2個干預(yù)組相比有很大差異；同時，干預(yù)21 d組比干預(yù)14 d組恢復(fù)效果更好，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明，CIT可以促進(jìn)缺血區(qū)大腦的血管新生，且藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移而逐步見效，這可能與腦缺血區(qū)域的微環(huán)境能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和存活并分化形成新生血管有關(guān)。因此推測，CIT可以有效地減輕缺血性神經(jīng)元損害，促進(jìn)缺血誘導(dǎo)的神經(jīng)-血管單元的形成，有效地分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子和促進(jìn)血管新生的因子，促進(jìn)缺血區(qū)腦組織的血管新生以及神經(jīng)修復(fù)，從而改善神經(jīng)功能狀況。

在動物實(shí)驗(yàn)中，本課題研究運(yùn)用mNSS測評、三維共聚焦血管成像、免疫組化染色、蛋白質(zhì)印跡分析等方法觀察發(fā)現(xiàn)：對腦缺血再灌注大鼠采取草酸艾司西酞普蘭藥物干預(yù)后，其腦組織VEGF表達(dá)水平明顯增高，新生血管密度增加，并且通過比較造模后14 d與21 d不同時間點(diǎn)的藥物干預(yù)效果，發(fā)現(xiàn)藥物干預(yù)的效果隨著時間的推移而逐步見效，證明CIT能夠發(fā)揮腦缺血后促進(jìn)血管新生和神經(jīng)保護(hù)作用。

［1］ Birmingham K.Future of nettro protective drugs in doubt［J］.Nat Med，2002，8(1）：5.

［2］Sweeney MI.Neuroprotective effects of adenosine in cerebral ischemia：window of opporttmity［J］.Neurosci Biohehav Rev，1997，21(2）：207-217.

［3］Lim CM，Kim SW，Park JY，et al.Fluoxetine affords robust neuroprotection in the postischemic brain via its anti-inflam-matory effect［J］.neurosci Res，2009，87(4）：1037-1045.

［4］Narushima K，Paradiso S，Moser DJ，et al.Effect of antidepressant therapy on executive function after stroke［J］.Br JPsy-chiatry，2007，190(1）：260-265.

［5］Joshua G，Mounira B，et al.Vascular endothelial growthfactorsignaling is required for the behavioral actions of antidepressant treatment：pharmacological and cellular characterization［J］. Neuropsychopharmacology，2009，34，(11）：2459-2468.

［6］Nowacka MM，Obuchowicz E.Vascular endothelial growth factor (VEGF）and its role in the central nervous system：a new element in the neurotrophic hypothesis of antidepressant drug action［J］. Neuropeptides.2012，46(1）：1-10.

［7］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，etal.Reversiblemiddle cerebral artery occlusion without cranietomy in rats［J］.Stroke，1989，20(1）：84-91.

［8］Brambrink AM，Koerner IP，Dichl K，eta1.The antibiotic Erythromycin induces tolerce against transient globaloerebral ischemia in rats［J］. Anesthesiology.2006，104(6）：1208-1215.

［9］Kasper S，Baldwin DS，Larsson lonn，et al.Superiority of escitalopram to paroxetine in the treatment of depression［J］.European Neuropsychopharmacology2009，19(4）：229-237.

［10］Megan M Burns，David A Greenberg.Antidepressants in the treatment of stroke［J］.Expert Rev.Ne-urother.2010，10(8）：1237-1241.

［11］Kim DH，Li H，Yoo KY，et al.Effects of fluoxetine on ischemic cells and expressions in BDNF and some antioxidants in the gerbil hippocampal CA1 region induced by transient ischemia［J］. Exp.Neurol.204(2）：748-758.

［12］Lim CM，Kim SW，Park JY，et al.Fluoxetine affords robust neuroprotection in the postischemic brain via its anti-inflammatory effect［J］.Neurosci.Res.2009，87(4）：1037-1045.

［13］Krupinski J，Stroemer P，Slcvin M，et a1.Three-dimensional slructure and survival of newly blood vessels after focal cerebral ischemia［J］. Neuroreport，2003，14(8）：1171-1176.

［14］Lu CZ，Xiao BG.G-CSF and neuroprotection：a therapeutic perspective in cerebral ischemia［J］.Biochem Soc Trans，2006，34(6）：1327-1333.

（編校：吳茜）

Neuroprotective effect of escitalopram oxalate on cerebral ischem ia reperfusion injury in rats

ZHANG Jian-bin1，LIXiao-hui2

（1.Department of Neurology，Heji Hospital Affiliated of Changzhi Medical College，Changzhi046011，China；2.Department of Neurological Rehabilitation，Heji Hospital Affiliated to Hospital of ChangzhiMedical College，Changzhi046000，China）

ObjectiveTo explore neuroprotective effect of escitalopram oxalate on cerebral ischemia reperfusion in injury rats and its possible mechanism，thus provide experimental evidence for the use of the drug in the clinical treatment of ischemic cerebrovascular disease.Methods160 male rats of SD were selected and randomly divided into three groups：sham operation group（Sham group），negative control group（NS group），intervention group（CIT group，for 14 days and 21 days）.Focalmiddle cerebral artery occlusion model（MCAO）of ratswere constructed.Neurological deficitof rats in each group were evaluated bymodified neurological severity score（mNSS）scale.Microvessel diameter，density，and total area ofeach group angiogenesis in cerebral ischemic area were observed by Laser cofocal technology after 14 days and 21 days at different time points；the plasma concentrations of VEGF were detected by ELASA，and expression levels of VEGFwere detected by immunohistochemical assay and Western blot in each group，to explore its possiblemechanism ofmolecular biology.ResultsAftermodeling，neurological deficit of intervention group for 14 days and 21 days were improved significantly.The indicatorswere as follows：scores ofmNSS in NS group（6.57±1.13）was significantly higher than（4.39±0.92）in intervention group for 14 days（P＜0.05）；scores ofmNSS in intervention group（3.23±0.55）for21 dayswas significantly lower than（4.14±0.74）in intervention group for 14 days（P＜0.01）.Confocal3D imaging results after14 days showed：microvascular total area was significantly lager which illustrated that the effect of drug intervention for 14 days started to work over time.Plasma concentrations and expression levels of VEGF in intervention group for 14 days and 21 days were higher than those in Sham group，NSgroup.VEGF protein expression of cerebral ischemia tissues in intervention group for21 dayswere higher than that of 14 days（P＜0.01）.ConclusionEscitalopram oxalate could significantly reduce cerebral ischemia and reperfusion in rats nerve injury and improve neurological function，which has a neuroprotective effect，the effect of drug intervention gradually increases over time，and the possible mechanism of which is related to angiogenesismediated by VEGF.

escitalopram oxalate；cerebral ischemia；neuroprotective；vascular endothelial growth factor

張建斌，男，碩士，副教授，研究方向：腦血管病的診斷和治療，E-mail：qch1821460113@163.com。

R743.3

A

1005-1678(2014）07-0009-05

山西省高校科技項(xiàng)目（200713024）