原發(fā)性支氣管肺癌(簡(jiǎn)稱肺癌)是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中居首位。肺癌中最常見類型為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，很多患者確診時(shí)已為晚期，晚期非小細(xì)胞肺癌的治療主要采用以化療為主的綜合治療。目前以鉑類為基礎(chǔ)的化療方案作為綜合治療的重要組成部分是治療晚期NSCLC的主要方法。鉑類藥物主要是通過引起DNA損傷而發(fā)揮其抗腫瘤療效，其引起的DNA損傷主要由核酸切除修復(fù)(Nucleotide excision repair，NER)通路修復(fù)，該途徑的DNA修復(fù)能力與鉑類藥物的療效及預(yù)后關(guān)系密切[1]。本研究探討了在晚期NSCLC中ERCC1基因多態(tài)性與含鉑類方案化療療效及預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取江西省人民醫(yī)院2012年4月至2013年11月收治的經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)診斷的Ⅲb-Ⅳ期肺腺癌患者50例，經(jīng)CT掃描證實(shí)肺部具有可測(cè)量的腫瘤病灶。50例中男性14例，女性36例，平均年齡56歲(45～78歲)。臨床分期：Ⅲb期26例，Ⅳ期24例?；熐盎颊唧w力評(píng)分采用ECOG(美國(guó)東部協(xié)作腫瘤組)評(píng)分為0～1分。血常規(guī)、肝腎功能及心電圖均正常。

1.2 ERCC1基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法

基因組DNA的提取：化療治療開始前，經(jīng)患者同意進(jìn)行遺傳標(biāo)志物與療效相關(guān)研究，并自愿捐獻(xiàn)3 ml靜脈血用于提取基因組DNA。采用DNA試劑盒(購(gòu)自樂悠生物科技有限公司)提取外周血基因組DNA。引物系列：C8092A：上游引物5'-ACAGTGCCCCAAGAGGAGAT-3'，下游引物5'-AGTCTCTGGGGAGGGATTCT-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物204 bp；ERCC1 118：上游引物5'-GCAGAGCTCACCTGAGGAAC-3'，下游引物5'-GAGGTGCAAGAAGAGGTGGA-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物199 bp。引物由樂悠生物科技有限公司合成。PCR反應(yīng)條件；94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s、72 ℃ 45 s，共30個(gè)循環(huán)；72 ℃再充分延伸7 min后置4 ℃冰箱保存。酶切處理體系及電泳：對(duì)C8092A采用限制性內(nèi)切酶BstEⅡ(購(gòu)自樂悠生物科技有限公司)進(jìn)行酶切、100V 電泳50 min。C8092A基因?yàn)锳/A型獲得酶切產(chǎn)物片段大小為116 bp和88 bp 2個(gè)片段；C/T型則獲得204 bp、116 bp和88 bp 3個(gè)片段；而C/C型則只有204 bp 1個(gè)片段。對(duì)ERCC1 118采用限制性內(nèi)切酶BsrD Ⅰ(購(gòu)自樂悠生物科技有限公司)進(jìn)行酶切、100 V 電泳50 min，為C/C型則檢測(cè)獲得片段大小為208 bp；C/T型，則為128和208 bp；T/T型，則為128 bp。

1.3 化療方案

順鉑75 mg/m2，靜脈滴注第1天，長(zhǎng)春瑞濱25 mg/m2，靜脈滴注第1、8天，21天為1個(gè)周期，共4個(gè)周期。化療結(jié)束后4周復(fù)查目標(biāo)病灶CT，根據(jù)世界衛(wèi)生組織實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。

1.4 療效評(píng)估

按世界衛(wèi)生組織實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：近期療效分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)、惡化(PD)。參考國(guó)內(nèi)外同類研究，設(shè)定CR+PR為有效，SD+PD為無效。另觀察無進(jìn)展生存期(progression for survival，PFS)?；颊叩碾S訪資料來源于門診和病房的病歷資料。隨診工作主要由本課題組成員隨診組完成。對(duì)于在隨訪截至日期無進(jìn)展的病例，在統(tǒng)計(jì)時(shí)作為刪失數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)處理

應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)或Fisher’s精確概率法分析計(jì)數(shù)資料；采用Kaplan-Meier法對(duì)生存資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，運(yùn)用Log-Rank檢驗(yàn)比較各因素水平間生存率，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析法進(jìn)行多因素生存分析。

2 結(jié)果

2.1 ERCC1 C8092A、118位基因型頻率

50例晚期肺腺癌患者ERCC1 C8092A位點(diǎn)CC、CA和AA基因型頻率分別為： 42.0%(21/50)、24.0% (12/50)、34.0%(17/50)；ERCC1 118位點(diǎn) CC、CT和TT基因型頻率分別為： 36.0%(18/50)、28.0%(14/50)、36.0%(18/50)。不同年齡、性別、吸煙狀況、臨床分期患者間ERCC1 C8092A、118多態(tài)性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表1)。

2.2 ERCC1 C8092A、118多態(tài)性與療效的相關(guān)性

50例肺腺癌患者經(jīng)療效評(píng)價(jià)后，CR為0例，PR為 14例(28.0%)，SD 為24例(48.0%)，PD 為12例(24.0%)，總有效率(CR+PR)為28.0%。ERCC1 C8092A CC和CA+AA基因型患者療效比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。ERCC1 118位點(diǎn)CC和CT+TT基因型患者療效比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00) (表2)。ERCC1 2個(gè)位點(diǎn)同為CC型患者療效與其它基因型患者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.76)(表3)。

表1 患者基本情況與ERCC1 C8092A、118多態(tài)性相關(guān)性分析(例，%)

表2 肺腺癌患者ERCC1 C8092A、118多態(tài)性與含鉑化療療效的關(guān)系(例，%)

表3 肺腺癌患者ERCC1 C8092A、118多態(tài)聯(lián)合與含鉑化療療效的關(guān)系(例，%)

2.3 ERCC1 C8092A、118多態(tài)性與PFS的相關(guān)性

ERCC1 C8092A CC和CA+AA基因型患者的中位PFS為4個(gè)月，經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，兩者PFS無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P=0.58) (圖1A)；ERCC1 C8092A CC和CT+TT基因型患者的中位PFS分別為5個(gè)月和4個(gè)月，經(jīng)Log-rank分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.16)(圖1B)： Cox多因素回歸分析顯示ERCC1 C8092A、118多態(tài)性均不是影響肺腺癌患者PFS的獨(dú)立因素。

3 討論

鉑類藥物作為肺癌化療的最重要的藥物，其抗腫瘤作用的主要機(jī)制在于引起DNA損傷包括DNA加合物的形成、交聯(lián)和氧化損傷。這些損傷阻斷DNA的復(fù)制從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[2]。但是，這些損傷可以被人類核苷酸切除修復(fù)通路(nucision repair pathway，NER)修復(fù)。因此機(jī)體DNA修復(fù)能力的差異可能是不同患者采用鉑類藥物化療后療效和預(yù)后不同的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。王云南等研究發(fā)現(xiàn)ERCC1是參與修復(fù)DNA加合物等損傷的重要核苷酸切除修復(fù)基因，其表達(dá)低下在肺癌發(fā)生中起著重要作用[3]。且NSCLC中，ERCC1在肺癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織[4]，許崇安等認(rèn)為ERCC1在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)升高并且存在正相關(guān)關(guān)系，可能在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用，ERCC1陽(yáng)性表達(dá)者生存期長(zhǎng)，可能在預(yù)后判定中有一定作用[5]。同時(shí)有學(xué)者認(rèn)為ERCC1高表達(dá)是Ⅰ期NSCLC術(shù)后良好預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)，含DDP化療延長(zhǎng)了Ⅱ期ERCC1低表達(dá)患者的生存，術(shù)后可根據(jù)ERCC1的水平?jīng)Q定是否選擇含DDP方案化療，ERCC1表達(dá)對(duì)NSCLC術(shù)后生存期的影響在Ⅰ期和Ⅱ期DDP化療患者中可能不盡相同，ERCC1高表達(dá)在Ⅰ期NSCLC術(shù)后展現(xiàn)的是其保護(hù)的一面，而Ⅱ期以化療抵抗為主[6]。Park等證明ERCC1 118C變異為T，CT或TT等位基因使ERCC1 mRNA水平增高，DNA修復(fù)能力增強(qiáng)，患者對(duì)鉑類藥物的敏感性降低，野生型基因(CC)患者對(duì)含鉑化療更敏感[7]。而王敬慧等研究認(rèn)為ERCC1 C8092A、118多態(tài)性可能與晚期非小細(xì)胞肺癌患者鉑類化療療效無明顯相關(guān)性[8]。

圖1 ERCC1 C8092A(A)和118(B)多態(tài)性的Kaplan-Meier生存曲線

本研究對(duì)我院50例晚期肺腺癌患者ERCC1基因C8092A、第118密碼子多態(tài)性與含鉑方案化療療效的相關(guān)性進(jìn)行探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同年齡、性別、吸煙狀況、臨床分期患者間ERCC1 C8092A、118多態(tài)性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。50例肺腺癌患者經(jīng)療效評(píng)價(jià)后，總有效率(CR+PR)為28.0%。ERCC1 C8092A中，CC基因型患者使用含鉑方案化療有效率高于CA+AA基因型患者，療效間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。ERCC1 118中，CC基因型患者使用含鉑方案化療有效率高于CT+TT基因型患者，療效間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00) (表2)。但ERCC1 2個(gè)位點(diǎn)同為CC型患者療效與其它基因型患者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.76)(表3)。ERCC1 C8092A、118多態(tài)性與晚期肺腺癌患者PFS無明顯相關(guān)性。

目前國(guó)內(nèi)外大量關(guān)于ERCC1多態(tài)性與鉑類藥物治療療效相關(guān)性研究得出的結(jié)論不盡相同。WEI等[9]認(rèn)為118位基因多態(tài)性鉑類藥物化療敏感性有關(guān)，D.Isla1等[10]研究ERCC1多態(tài)與多西他賽加卡鉑聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌療效之間的關(guān)系得出118位基因CC純合型療效更好，能更好延長(zhǎng)患者的生存期。Kalikaki等[11]通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法對(duì)晚期NSCLC患者進(jìn)行基因型分析，結(jié)果表明攜有1個(gè)或者2個(gè)C的等位基因(CC，CT) 對(duì)化療敏感性優(yōu)于不含有C等位基因(OR：0.10；95%CI：0.013～0.828；P=0.033)。還有研究也證實(shí)了該觀點(diǎn)，即認(rèn)為ERCC1 codon118 CC型患者對(duì)鉑類化療反應(yīng)優(yōu)于CT及TT型[12]。然而，也有少部分研究報(bào)道不同，Caicun Zhou等[13]通過對(duì)ERCC1 118基因多態(tài)研究就發(fā)現(xiàn)118TT或CT基因型能明顯地提高鉑類聯(lián)合藥物治療晚期非小細(xì)胞肺癌患者的生存期。關(guān)于C8092A與鉑類藥物治療療效報(bào)道較少，Ji-Youn Han等[14]研究結(jié)果顯示在不吸煙的肺腺癌患者中，攜帶C8092A的AA基因型比CC、CA基因型的患者在治療中獲得更好的療效。

各研究結(jié)果不一致可能受入組病例數(shù)、化療方案、基因型檢測(cè)方法等因素影響，也可能與不同種族基因型頻率分布顯著不同有關(guān)[15]。同時(shí)也可能與基因表達(dá)程度相關(guān)，這有待于今后進(jìn)一步觀察研究。

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