盧國豐 陳 軍 劉菊林 吳躍龍 李 靜

上海市嘉定區(qū)中心醫(yī)院病理科(201800)

結(jié)直腸癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其生物學行為具有侵襲性生長和轉(zhuǎn)移的特征。已有大量研究表明，結(jié)直腸癌患者預后與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，其中環(huán)氧合酶-2(COX-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)起有極為重要的作用[1]。本研究通過采用免疫組化法檢測COX-2、MMP-2在結(jié)直腸癌中的表達，旨在探討兩者的相互關(guān)系及其臨床意義，從而為探索結(jié)直腸癌的發(fā)病機制和臨床采用新的治療方法提供有用數(shù)據(jù)。

對象與方法

一、研究對象

收集2009年3月-2013年8月上海市嘉定區(qū)中心醫(yī)院82例非遺傳性結(jié)直腸癌患者的手術(shù)切除標本，其中男47例，女35例；年齡30～85歲，平均(46.5±12.5)歲；患者術(shù)前均未進行過放化療等相關(guān)治療，并排除結(jié)直腸癌家族史和結(jié)直腸癌術(shù)后復發(fā)者。82例均為腺癌，其中中高分化59例，低分化23例；結(jié)直腸癌TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期34例，Ⅲ、Ⅳ期48例；腫瘤浸潤未及漿膜層27例，浸潤超過漿膜層55例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。所有標本均經(jīng)甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

二、研究方法

COX-2、MMP-2單克隆抗體、SP試劑盒、DAB-酶底物顯色試劑購于上海長嘉生物科技有限公司，采用免疫組化SP法，實驗操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，用已知陽性染色的結(jié)直腸癌切片為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

結(jié)果判斷：COX-2、MMP-2均定位于胞質(zhì)內(nèi)，腫瘤細胞胞質(zhì)呈棕黃色且背景清晰者判斷為陽性，在中倍光學顯微鏡下(×200)隨機觀察10個視野[2]，計算陽性細胞數(shù)，以陽性細胞數(shù)>5%為陽性，<5%為陰性。

三、統(tǒng)計學分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)非等級資料的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、COX-2 和MMP-2在結(jié)直腸癌組織中的表達

結(jié)直腸癌組織中COX-2和MMP-2均表達于腫瘤細胞的細胞質(zhì)內(nèi)(圖1、圖2)。COX-2的陽性表達率為64.6%，MMP-2為65.9%。COX-2和MMP-2陽性表達與腫瘤臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05)，提示COX-2和MMP-2陽性患者臨床分期更晚，浸潤度更深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更常見。COX-2和MMP-2陽性表達與患者性別、年齡、腫瘤大小以及分化程度等無關(guān)(P>0.05)(表1)。

圖1 COX-2表達于細胞質(zhì)(免疫組化SP法，×200)

圖2 MMP-2表達于細胞質(zhì)(免疫組化SP法，×200)

表1 COX-2 和MMP-2在結(jié)直腸癌組織中的表達(n)

*50歲為我國結(jié)直腸癌好發(fā)年齡

二、COX-2 和MMP-2在不同腫瘤臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中的共表達

分別有15例和34例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期的結(jié)直腸癌患者共表達COX-2和MMP-2，在浸潤深度未及漿膜層和侵及漿膜層者中分別為12例和37例，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中分別為10例和39例。行統(tǒng)計學分析后發(fā)現(xiàn)，COX-2和MMP-2在結(jié)直腸癌中的共同陽性表達率很高，表達具有協(xié)同效應(χ12=8.912 8，P1=0.002 83；χ22=4.650 1，P2=0.031 05；χ32=5.954 0，P3=0.014 68)。

討 論

COX是前列腺素合成過程中的限速酶，可將花生四烯酸代謝成各種前列腺素產(chǎn)物，后者參與維持機體的各種生理和病理功能。COX至少存在兩種亞型，即COX-1和COX-2。COX-1在大多數(shù)組織中均表達，參與維持機體正常的生理功能；COX-2是一種誘導型酶，正常生理狀態(tài)下難以檢測，但在細胞因子、內(nèi)毒素、腫瘤促進劑、癌基因等因素的刺激下可迅速產(chǎn)生[3]。COX-2與多種消化道腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，在結(jié)直腸癌、食管癌、胃癌[4]、宮頸癌[5]和乳腺癌等腫瘤中呈高表達。

細胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜是抵御腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的屏障。在局部浸潤和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細胞必須具備降解ECM和基底膜的能力。MMP-2基因位于人染色體6q21，激活的MMP-2能降解細胞基底膜和ECM中Ⅳ型、Ⅴ型膠原等成分[6-7]，導致基底膜破壞，從而發(fā)生腫瘤細胞浸潤，侵入淋巴管和小血管發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此，MMP-2在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起有重要作用[8-10]。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌COX-2和MMP-2陽性組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較陰性組增高，且與腫瘤臨床分期和浸潤深度相關(guān)。說明MMP-2在結(jié)直腸癌浸潤、轉(zhuǎn)移中起舉足輕重的作用，與Allgayer等[11]的結(jié)論相似；而COX-2過表達可能增強腫瘤細胞浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能，提示預后不佳。本研究進一步發(fā)現(xiàn)COX-2蛋白和MMP-2蛋白在不同臨床分期、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的共同陽性表達例數(shù)為49例，表明結(jié)直腸癌組織中COX-2高表達，MMP-2亦隨之高表達，具有協(xié)同效應(P<0.05)。此外，Tsujii等[12]的研究認為，在結(jié)腸癌中COX-2激活可促使血管生成因子增多，后者可作用于內(nèi)皮細胞誘導血管生成，該作用在體外可被特異性COX-2抑制劑所逆轉(zhuǎn)。因此，在一些有潛在罹患結(jié)直腸癌危險的患者中，選擇性應用COX-2抑制劑可預防結(jié)直腸癌的發(fā)生[13]，可將COX-2作為腫瘤預防和治療的靶點。

綜上所述，COX-2和MMP-2在結(jié)直腸癌中均呈高表達，兩者之間具有協(xié)同效應，共同促進結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展，為研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機制、預后評估和治療提供了有價值的臨床指標。COX-2與MMP-2抑制劑的聯(lián)合應用，可能對結(jié)直腸癌的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移具有協(xié)同抑制作用，為臨床醫(yī)師尋找綜合有效的治療方案提供了新的思路。

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