閆治川，周占琴，任 潔

(1.陜西省榆林市畜牧獸醫(yī)研究與技術(shù)推廣所，陜西 榆林 719000；2.西北農(nóng)林科技大學(xué) 動物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

硒發(fā)現(xiàn)于1817年，但在相當(dāng)長的一段時間里被認(rèn)為是一種有毒的物質(zhì)。直到1957年，Scharz和Foltz發(fā)現(xiàn)硒能夠預(yù)防雛雞和大鼠的某些疾病后，硒的營養(yǎng)作用才引起人們的重視，并逐漸明確為動物體內(nèi)必須的微量元素[1～3]。近年來，有關(guān)硒對動物繁殖性能的影響，引起了人們的高度關(guān)注。Kaur等人的研究表明：缺硒可降低雄性動物精子活率，提高精子的畸形率[4，5]。楊茹潔認(rèn)為，硒可促進(jìn)睪丸曲精細(xì)管、間質(zhì)組織及間質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育，維持生殖細(xì)胞的發(fā)生和分化，與對照組相比，給基礎(chǔ)日糧中添加0.3 mg·kg-1納米硒可顯著升高斷奶雄性山羊血清中T、FSH和LH的水平[6]。梁明振、胡雙保等人也得出相同的研究結(jié)果[7，8]。寶雞市麟游縣屬于缺硒地區(qū)，為了改善家畜的精液品質(zhì)、提高種用公畜的繁殖性能，本研究通過給公羊注射亞硒酸鈉維生素E注射液，探討硒對種公羊精液品質(zhì)和性激素水平的影響，以便對波爾山羊公羊進(jìn)行更科學(xué)的養(yǎng)殖和更合理的利用。

1 材料和方法

1.1 藥物

亞硒酸鈉維生素E注射液，上海市獸藥廠出品，每支10 mL，含亞硒酸鈉10 mg，維生素E 500 IU。

1.2 試驗動物及試驗設(shè)計

試驗于2013年9月1～30日在寶雞麟游波爾羊良種繁育中心進(jìn)行。選擇體質(zhì)健康、營養(yǎng)狀況良好的3歲波爾山羊公羊16只作為試驗動物，并隨機分成2組，每組8只。試驗組肌肉注射亞硒酸鈉維生素E 4 mL/只，對照組未注射。

1.3 飼養(yǎng)管理及日糧組成

所有羊只采用放牧加舍飼的飼養(yǎng)方式，每只每日補充精料補充料0.4 kg，自由飲水。

1.4 血清制備與測定

1.4.1 血清制備 按常規(guī)方法采集兩組羊(空腹)頸靜脈血樣6 mL，室溫靜置1～2 h，以3 000 r/min，離心20 min。取血清，置于-80 ℃保存待測。每隔10 d采集1次。

1.4.2 血清硒測定 采用GB/T5009.93-2003(氫化物原子熒光光譜法)，所用儀器為AFS-930雙道原子熒光光度計。

1.4.3 血清生殖激素檢測 采用放射免疫分析法(RIA)檢測血清中睪酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)及雌二醇(E2)水平。試劑盒購自北京福瑞生物工程公司，操作過程嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行，同時測定了血清低(QCL)、高(QCH)質(zhì)控點，QCL、QCH質(zhì)控值均在±1SD范圍內(nèi)，說明結(jié)果準(zhǔn)確可信。

1.5 精液品質(zhì)測定

2013年10月3～5日采取公羊精液，按WHO標(biāo)準(zhǔn)精液分析方法[9]對精子活率、精液密度、精子畸形率進(jìn)行測定和評判，用北京偉力全自動計算機輔助分析系統(tǒng)(CASA)對數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析。

1.6 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 補硒時間對血硒濃度的影響

補硒后波爾山羊公羊血清硒濃度的變化見表1。

表1 補硒對血硒濃度的影響 (μg/L)

注：同一行中，不同的大寫字母標(biāo)為差異極顯著(P< 0.01)。同一列中，不同的大寫字母標(biāo)為差異極顯著(P< 0.01)。

由表1可知，試驗組羊在注射亞硒酸鈉維生素E注射液后第10天，血清硒水平達(dá)到12.01 μg/L，與對照組差異顯著(P< 0.05)。到第20天達(dá)到18.07 μg/L，與對照組差異極顯著(P< 0.01)。第30天時下降至12.67 μg/L，接近第10天的水平。未注射亞硒酸鈉的對照組血清中硒水平在整個試驗期都維持在2 μg/L左右。

2.2 硒對生殖激素的影響

補硒對波爾山羊公羊生殖激素水平的影響見表2。

表2 硒對波爾山羊生殖激素的影響

注：同一列中，不同的小寫字母標(biāo)為差異顯著(P< 0.05)。

由表2可知，在注射亞硒酸鈉初期，成年公羊生殖激素水平?jīng)]有明顯變化，但到20 d和30 d時，試驗組羊血清中T和FSH水平顯著高于對照組。尤其是在補硒20 d時，血清T和FSH水平均達(dá)到最高峰，分別為1 227.15±193.1 pg/mL和3.4±0.32 IU/L；但兩組羊的E2和LH水平差異不顯著。

2.3 硒對公羊精液品質(zhì)的影響

硒對波爾山羊公羊精液品質(zhì)的影響見表3。

表3 補硒對波爾山羊采精量和精液品質(zhì)的影響

注：同一行中，不同的小寫字母標(biāo)為差異顯著(P< 0.05)。

由表3可知，試驗組和對照組采精量分別為0.85±0.08 mL和0.91±0.11 mL，精液密度分別為(29.2±2.16)×108/mL和(28.37±1.93)×108/mL，精子畸形率為14.75±0.64%和15.89±1.98%。雖然兩組在采精量、精液密度和精子畸形率上沒有顯著差異，但試驗組的平均精子活率達(dá)到80.51±2.36%，顯著高于對照組(76.23±1.78%)。

3 討論

3.1 補硒時間對血硒濃度的影響

飼養(yǎng)在寶雞麟游的波爾山羊公羊血清硒水平僅為2 μg/L左右，但在注射亞硒酸鈉維生素E注射液后，血液硒水平得到很快提升，到第10天就達(dá)到12.01 μg/L，是對照組的5.8倍，差異顯著(P< 0.05)。注射后第20天，達(dá)到最高值(18.07 μg/L)，為對照組的10倍之多，差異極顯著(P< 0.01)。到第30天下降至12.67 μg/L，與第10天的水平接近，但仍然處于較高水平，可以滿足羊只生產(chǎn)與生活需求，在此期間，不需要再次補充硒元素。

3.2 補硒對波爾山羊生殖激素的影響

從表2可以看出，兩組公羊血清E2一直維持在一個較恒定的水平，兩組之間沒有明顯差異，而T、FSH、LH濃度與血清硒有一定關(guān)聯(lián)性，即隨著血清硒含量的升高而升高，隨著血硒降低而下降。這一結(jié)果與Zagrodzki的研究結(jié)果一致[14]。胡雙寶認(rèn)為，硒不是直接影響睪丸細(xì)胞對睪酮分泌，而是在一定量hCG或腺垂體細(xì)胞分泌產(chǎn)物存在的條件下，可增加睪丸間質(zhì)細(xì)胞對hCG或LH的敏感性，進(jìn)而促進(jìn)睪酮的分泌[8]。Behne也得出了相同的結(jié)論[15]。本試驗公羊血清LH與T變化一致，這是由于LH可刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞對T的分泌，使公羊血清中的LH水平隨著T水平的增減而增減。FSH 主要作用于睪丸曲精細(xì)管，促進(jìn)精子的分化和發(fā)育，F(xiàn)SH和T的增加滿足了精子發(fā)生及成熟的需要。體內(nèi)適宜的雌二醇水平是維持雄性動物生殖機能所必須，但過高的E2會干擾精子的發(fā)生、降低男性的生育能力；E2對睪丸輸出小管液體的重吸收有一定作用，缺乏時會出現(xiàn)精液堵塞、精子成熟延緩等現(xiàn)象[16，17]。體況良好的種公羊的E2水平一般都維持在較恒定的水平，對外界因素的干擾不敏感。因此，本試驗兩組公羊血清E2變化不大。

3.2 硒對波爾山羊精液品質(zhì)的影響

硒存在于精子線粒體的細(xì)胞膜中，可選擇性地結(jié)合于精子尾部中段，缺硒可導(dǎo)致精子尾部中段和主段胞膜破裂，軸絲外露，線粒體異常，活力和受精能力下降[10，11]。因此，補硒可以改善精子活力。另一方面，精子在有絲分裂和減數(shù)分裂過程中會產(chǎn)生大量的氧化自由基團及代謝產(chǎn)物，這些物質(zhì)會降低精原細(xì)胞及精母細(xì)胞的數(shù)量[12]。硒是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的組成部分，它的抗氧化作用可有效地防止代謝產(chǎn)生的自由基對精子發(fā)生過程中的損害，從而保證精子形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的完整性。硒還可以通過影響血液T、FSH水平促進(jìn)精子分化和發(fā)育。

硒也可以通過影響睪丸組織的生長發(fā)育來影響精液品質(zhì)。在生殖器官中，睪丸組織的含硒量是最高的。Hansen和楊茹潔研究表明，缺硒可使睪丸、附睪及副性腺重量減輕，組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，缺硒公羔羊睪丸間質(zhì)組織發(fā)育不完全、管壁生殖細(xì)胞層排列不緊密、曲精細(xì)管發(fā)育較差、內(nèi)生殖細(xì)胞發(fā)育不良，只有少數(shù)初級精母細(xì)胞、未分化的精細(xì)胞和游離在管腔內(nèi)的精子[6，13]。由此可見，硒對動物的生殖機能有重要的影響，缺硒可使精子的生成減少、精子活力降低、畸形率增加。

4 結(jié)論

4.1 補硒可顯著提高公羊血清T、FSH濃度，但對LH和E2沒有明顯影響。

4.2 補硒可以提高波爾山羊公羊精子活力，降低畸形率。

4.3 缺硒地區(qū)的公羊在進(jìn)入配種季節(jié)前10天應(yīng)注射亞硒酸鈉維生素E 注射液。

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