劉幫慧, 戴啟荷

(湖北省荊州市中心醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科, 湖北 荊州, 434022)

癲癇是神經(jīng)內(nèi)科較為常見的短暫性腦功能失調(diào)綜合征，發(fā)病率逐年上升，癲癇發(fā)作的表現(xiàn)主要以運動、行為、感覺、自主神經(jīng)等一系列的功能障礙為主，如不及時采取治療措施，可能會遷延惡化為難治性癲癇，對患者的生命健康與生活質(zhì)量造成十分大的威脅?？拱d癇藥物(AED)是目前控制疾病發(fā)作、減少發(fā)作次數(shù)的主要藥物，但是部分AED長期服用可能出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，損害臟器或認(rèn)知功能[1-3]，因此，臨床應(yīng)用的AED需要保證有較好的耐受性和安全性。本組建立癲癇大鼠模型，給予卡馬西平與塞來昔布聯(lián)合用藥，并設(shè)立生理鹽水對照組，觀察用藥后的不良反應(yīng)，為臨床安全用藥提供可靠的動物實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級雄性Wistar大鼠90只，購自荊州市中心醫(yī)院動物實驗室，體質(zhì)量180～250 g, 放在獨立、通風(fēng)的籠盒飼養(yǎng), 5只/籠，飼養(yǎng)溫度19 ℃～25 ℃, 濕度50%～60%, 飼養(yǎng)環(huán)境經(jīng)常消毒，大鼠自由進食，每2 d更換一次墊料。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 實驗儀器：微量注射器(上海玻利鴿工貿(mào)有限公司)，腦立體定位儀(日本NARISHIGE公司)，OLYMPUS顯微鏡(日本NARISHIGE公司)，BL-420圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)，小型牙鉆(韓國DSI公司)。

1.2.2 實驗試劑：海仁酸(美國Kainic Acid公司)，大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTnT)ELISE 試劑盒(德國寶靈曼公司)，NycoPlastin試劑(ISI值=1.19)，CaCl2溶液、蘇木素液、伊紅染液(上?？婆d生物科技有限公司)，卡馬西平片(北京諾華制藥有限公司)，塞來昔布(美國輝瑞公司)。

1.3 方法

1.3.1 分組方法：隨機選出10只大鼠設(shè)為假手術(shù)組，其余80只設(shè)為癲癇模型組。造模過程中假手術(shù)組有2只死于麻醉，剩下8只納入研究；模型組麻醉、手術(shù)過程死亡18只，根據(jù)腦電圖淘汰2只，剩余60只納入研究，并隨機均分為對照組與實驗組，各30只。

1.3.2 癲癇模型建立方法：大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉，俯臥位固定；于頭背部中間處剪毛消毒后做長2 cm縱切口，暴露前囟區(qū)，于右側(cè)的海馬CA3區(qū)鉆孔，海仁酸1.5 μg(濃度1 μg/μL)緩慢注入該區(qū)域，整個注射過程大約10 min, 停針約5 min后緩慢拔出注射器，并在注射區(qū)域及額竇置入電極，以502膠固定?？p合切口后外敷青霉素防感染，放回籠后，依照Racine分級辦法密切觀察大鼠的癲癇發(fā)作行為及腦電圖。假手術(shù)組模型建立方法同上，但在大鼠海馬CA3區(qū)域注射的是等量生理鹽水，術(shù)后腹腔注射青霉素防感染。

1.3.3 治療方法：灌胃給藥，假手術(shù)組及對照組均給予生理鹽水1 mL/d、實驗組給予卡馬西平125 mg/kg、塞來昔布20 mg/kg，連續(xù)治療28 d后，處死大鼠。

1.4 癲癇點燃標(biāo)準(zhǔn)

本組根據(jù)Racine分級標(biāo)準(zhǔn)判斷模型癲癇點燃情況：大鼠在術(shù)后30 min～6 h內(nèi)出現(xiàn)Ⅳ級以上的癇性行為，即被認(rèn)為是癲癇充分點燃或者點燃成功；將癇性行為的發(fā)作強度分為6個級別，分別為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級、Ⅴ級、Ⅵ級。

1.5 觀察指標(biāo)

大鼠全部處死后選其腎臟組織、胃竇黏膜制成病理標(biāo)本，采用光鏡檢測、觀察，分析各組胃竇黏膜的病理學(xué)改變；取心臟血檢測凝血功能，計算國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)，并觀察血液中心肌損傷標(biāo)志物cTnT的表達水平。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠的存活情況

假手術(shù)組8只均存活，存活率100%; 對照組存活17只，存活率為56.67%; 試驗組存活22只，存活率為73.33%。

2.2 各組大鼠胃竇黏膜病理學(xué)改變

假手術(shù)組與對照組大鼠胃竇黏膜均未見明顯病理學(xué)改變，實驗組中僅有2例(6.67%)出現(xiàn)病理學(xué)改變，其中1例表現(xiàn)為胃竇黏膜炎細(xì)胞浸潤，另1例表現(xiàn)為胃竇黏膜充血。3組胃竇黏膜病理學(xué)改變發(fā)生率無顯著差異(P>0.05)。3組大鼠的胃竇組織病理切片見圖1～3。

2.3 各組大鼠腎臟病理學(xué)改變情況

假手術(shù)組與對照組受檢模型的腎臟組織均無明顯的病理學(xué)病變，實驗組1例(3.33%)出現(xiàn)腎小球細(xì)胞水樣變性，組間比較無顯著差異(P>0.05)。3組大鼠腎臟病理切片見圖4～6。

圖1 假手術(shù)組胃竇黏膜 HE 100倍

圖2 對照組胃竇黏膜 HE 100倍

圖3 實驗組胃竇黏膜 HE 100倍

圖4 假手術(shù)組腎臟組織 HE 100倍

圖5 對照組腎臟組織 HE 100倍

圖6 實驗組腎臟組織 HE 100倍

2.4 各組INR值及cTnT水平比較

各組治療后INR 值無顯著差異(P>0.05); 對照組及實驗組cTnT水平顯著高于假手術(shù)組(P<0.01), 且實驗組顯著低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組INR值及cTnT水平比較

與假手術(shù)組比較，*P<0.05, **P<0.01;與對照組比較, ##P<0.01。

3 討 論

癲癇是臨床常見神經(jīng)系統(tǒng)疾病，卡馬西平是治療新診斷癥狀性部分性癲癇的一線藥物[4]。研究[5]表明，癲癇的炎性反應(yīng)與腦內(nèi)環(huán)氧化酶-2(COX-2)激活及前列腺素水平增高等密切相關(guān)，因此，COX-2抑制劑被逐漸應(yīng)用于抗癲癇治療。大量研究[6-7]表明，COX-2抑制劑可降低癇性發(fā)作的頻率及癲癇持續(xù)狀態(tài)的病死率。塞來昔布、伐地考昔、羅非昔布等均屬于COX-2抑制劑，但由于不同的COX-2抑制劑存在不同的代謝途徑、半衰期以及血漿蛋白結(jié)合率，因此，在臨床應(yīng)用中可能出現(xiàn)不同的不良反應(yīng)。當(dāng)前，塞來昔布是臨床應(yīng)用最普遍的COX-2抑制劑。Kim E[8]等對高血壓模型大鼠實施了塞來昔布與羅非昔布的對照試驗，結(jié)果顯示塞來昔布在改善腎小球、腎臟CRP值、系膜硬化、防止巨噬細(xì)胞聚集等方面的作用顯著優(yōu)于羅非昔布組，但其在腎臟、凝血功能、心血管等方面的安全性，醫(yī)學(xué)界尚未有統(tǒng)一的意見[9]。

一項納入11008名關(guān)節(jié)炎患者的雙盲、隨機的試驗表明，塞來昔布組的胃腸道不良反應(yīng)率與安慰劑組比較無顯著差異，但顯著低于萘普生組8倍[10]。本研究中，對3組模型大鼠分別進行不同的治療，結(jié)果表明實驗組僅出現(xiàn)1例胃竇黏膜炎細(xì)胞浸潤、1例胃竇黏膜壞死、1例腎小球細(xì)胞水樣變性，3組胃腸道及腎臟病理學(xué)改變發(fā)生率無顯著差異(P>0.05)，提示卡馬西平與塞來昔布聯(lián)合治療癲癇對模型大鼠胃腸道系統(tǒng)及腎臟組織無顯著不良影響。

研究表明，長期聯(lián)用塞來昔布與華法林治療凝血功能障礙的患者，其INR水平較單用華法林者高，因此，臨床實施塞來昔布治療時，應(yīng)密切監(jiān)測患者凝血功能的變化。本組研究中, 3組INR值比較無顯著差異[11-13], 表明利用海仁酸點燃方式建立的癲癇模型未采取抗癲癇治療時大鼠凝血功能無明顯改變；馬西平聯(lián)合塞來昔布治療后也并未對大鼠凝血功能造成顯著不良反應(yīng)[14]。

現(xiàn)階段，國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界尚未對塞來昔布影響心肌細(xì)胞的程度形成統(tǒng)一的結(jié)論，但有實驗研究[15]表明，低劑量塞來昔布可改善急性心肌缺血家兔的冠狀動脈功能。本組研究中，對照組大鼠cTnT水平顯著高于假手術(shù)組，提示如未能及時對癲癇大鼠進行抗癲癇治療，大鼠會出現(xiàn)明顯的心肌細(xì)胞損傷，原因可能是海仁酸點燃操作中，心肌細(xì)胞線粒體膜的通透性被極大改變，細(xì)胞呼吸作用的電子傳遞鏈被阻斷，從而出現(xiàn)心肌損害；同時，癲癇的多次反復(fù)發(fā)作，也可能造成心肌損傷；而實驗組治療后cTnT水平顯著降低，提示聯(lián)合用藥后大鼠心肌損傷的程度得到顯著改善。

綜上所述[16], 對通過海仁酸快速點燃海馬建立的癲癇模型給予卡馬西平及塞來昔布聯(lián)合治療，并未對大鼠的胃腸道、腎臟、血液系統(tǒng)等產(chǎn)生明顯不良反應(yīng)，且可有效降低血液cTnT水平，對心肌具有一定保護作用。但這只是小樣本量動物實驗結(jié)果，其具體作用還需臨床篩選大樣本病例進一步研究。

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