姜霽洺，楊 婧，邱金雙，王艷宏，李永吉，王 銳

(黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，哈爾濱150040)

中藥蛇床子為傘形植物蛇床(Cnidium monnieri L.Cusson)的干燥成熟果實，始載于《神農草經》，列為上品 ，味辛 、苦 ，性溫，具散寒、祛風、燥濕、殺蟲、止癢和壯陽等功能.常用作治療以陰道炎為主的婦科疾病.其主要有效成分為總香豆素和揮發(fā)油類[1].近年來已將其制成乳劑涂抹于患處，用以治療滴蟲陰道炎類婦科疾病.已有文獻表明，蛇床子乳劑抑制滴蟲生長的最低藥物質量濃度為0.15 ～0.62 g/L，抑蟲效果較好[2].但由于乳劑的分散相易合并或破裂，出現(xiàn)分層、絮凝等現(xiàn)象，而且乳劑的輔料易發(fā)生分解和氧化，不適合長期保存和使用[3].故將液態(tài)乳劑制成干乳劑，可改善乳劑的不穩(wěn)定性，延長保質時間.

為改善蛇床子中脂溶性成分制成的O/W型乳劑的諸多不穩(wěn)定因素.采用冷凍干燥法制成干乳，進行穩(wěn)定性試驗，以考察是否達到中國藥典以及新藥穩(wěn)定性試驗的要求.

1 試劑與儀器

蛇床子(購自哈藥集團世一堂中藥飲片有限責任公司，經鑒定符合《中國藥典》(2010年版)規(guī)定);蛇床子素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:201004);甲醇(美國迪馬公司);活性炭(國藥集團化學試劑有限公司);液體石蠟(天津東天化工制劑有限公司);泊洛沙姆407(上海運宏化工制劑有限公司);剪切式乳勻機(JRJ－300－I上海標本模型廠制造)、高壓乳勻機(GRJ－2寧波新芝生物科技有限公司);2695型高效液相色譜儀，2996型檢測器，Empower工作站;美國 Waters公司;冷凍干燥機(VirTis Benchtop 2K);藥物穩(wěn)定性檢查儀(WD－B天津藥典標準儀器廠);藥品強光照射試驗箱(SHH－200 GD重慶市永生試驗儀器廠);M電子天平(JD500－3G，東莞永旭電子有限公司)電熱套(KDM，鄄城現(xiàn)代實驗儀器有限公司);真空干燥箱(DIF－6090上海恒源科學儀器有限公司);布氏漏斗(FA2004，東莞市全科化玻儀器有限公司);旋轉蒸發(fā)儀(R206B，上海申生科技有限公司).

2 蛇床子干乳劑的測定

2.1 色譜條件

色譜柱 Diamonsil C18(5 μm，250 mm × 4.6 mm);流動相:甲醇－水(80∶20);柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;測定波長:323 nm.

2.2 標準曲線的制備

精密稱取蛇床子素對照品適量，置50 mL容量瓶中，用甲醇定容并制成質量濃度為20 μg/mL對照品儲備液.分別精密吸取上述對照品儲備液1、3、5、10、15、25 mL，置25 mL 容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm 微孔濾膜過濾.精密吸取上述續(xù)濾液各20 μL，依次注入高效液相色譜儀，測得峰面積.以峰面積(A)為縱坐標，其質量濃度(C)為橫坐標，得蛇床子素線性回歸方程:A=32 999C －4 632.7，R2=0.999 4，表明蛇床子素在質量濃度0.8 ～20.0 μg/mL 范圍內有良好的線性關系，見圖1、2.

圖1 蛇床子素標準品峰

圖2 蛇床子素樣品峰

2.3 精密度試驗

精密吸取蛇床子干乳劑供試品溶液20 μL，在上述色譜條件下重復進樣6次，RSD為1.45%，.結果表明精密度較好.

2.4 穩(wěn)定性試驗

精密吸取蛇床子干乳劑供試品溶液20 μL，在0、6、12、18、24 h 進行測定，RSD 為0.64%.結果表明對照品溶液在24 h內穩(wěn)定.

2.5 回收率試驗

精密稱取的蛇床子素對照品溶液0.5、1.0、1.5 mL，加入到已知質量濃度的蛇床子提取物溶液中，在上述色譜條件下進行測定.結果測得蛇床子素的平均回收率為99.86%，RSD為1.59%.結果表明該方法的準確性高，符合測定要求.

2.6 供試品的制備

稱取蛇床子干乳劑20 mg，溶于10倍量注射用水中，振蕩，使其復溶為蛇床子乳劑.置50 mL量瓶中甲醇定容，超聲15 min破乳，使乳劑呈透明液體，靜置15 min直至冷卻，再用甲醇補充至刻度.再將其在5 000 r/min下離心5 min.取上清液，用0.22 μm 微孔濾膜過濾，即得供試品溶液[4].

3 蛇床子干乳劑的制備

精密稱取經超聲提取的蛇床子提取物5.00 g，加至大豆油20 mL，水浴加熱，攪拌均勻.傾入溶有3 g PEG400的300 mL蒸餾水中.置于剪切式乳勻機攪拌15 min，形成初乳，向其加入蒸餾水1 L進行稀釋，將稀釋的初乳傾入高壓乳勻機中，乳化3次，乳化壓力為150 kPa，即得蛇床子O/W型乳劑.向所制乳劑中加入10%的蔗糖作為凍干保護劑，溶解均勻后，經0.45 μm微孔濾膜過濾，置西林瓶中滅菌，放入冷凍干燥機中冷凍干燥，即得蛇床子干乳劑[5].

4 穩(wěn)定性試驗

根據(jù)2010版中國藥典[6]，對蛇床子干乳劑的3批供試品進行穩(wěn)定性考察，以確定各穩(wěn)定因素對蛇床子干乳劑的影響程度.同時根據(jù)新藥穩(wěn)定性試驗的要求，確定其有效期.

4.1 高溫試驗

分別稱取蛇床子干乳劑3份，每份1.00 g，置于藥物穩(wěn)定性檢查儀中，溫度為60℃，相對濕度為55%于0、3、5、10 d 觀察干乳劑外觀，復溶性，稱重并測其質量分數(shù).見表1.

表1 蛇床子干乳劑高溫試驗

由表1可見，樣品質量、溶解度、質量分數(shù)均無較大差異，第10天顏色稍有加深，說明高溫對蛇床子干乳劑無較大影響.

4.2 高濕試驗

分別稱取蛇床子干乳劑3份，每份1.00 g，置于藥物穩(wěn)定性檢查儀中，溫度為25℃，相對濕度為95%，于0、3、5、10 天觀察干乳劑外觀，復溶性，稱重并測其質量分數(shù).

由表2可知，蛇床子干乳劑外觀形狀、質量和溶解度均無較大變化，其質量分數(shù)變化也不明顯，吸濕率分別為 0.79%、0.85%、0.86%，吸濕性較低.

表2 蛇床子干乳劑高濕試驗

4.3 強光照試驗

分別稱取蛇床子干乳劑3份，每份1.00 g，置強光照射試驗箱中，于照度為4 000 lx下放置10 d，于第 0、1、3、5、10 天取樣檢測，同時記錄樣品的外觀變化，結果見表3.

表3 蛇床子干乳劑強光照試驗

由表3可知，蛇床子干乳劑外觀有明顯改變，且長時間強光照射可使表面出現(xiàn)滲油現(xiàn)象，質量減少較多，質量分數(shù)變化稍大，說明其在強光照條件下不穩(wěn)定，需避光保存.

4.4 有效期考察

采用初勻速法預測有效期[7]，將蛇床子干乳劑按供試品溶液進行處理，測定初質量濃度后，分成 7 組，分別置于 60、65、70、75、80、85、90 ℃恒溫水浴鍋中，分別加熱 11、10、9、8、7、6、5 h，立即取出，迅速冷卻，終止分解，用水稀釋，測定，結果見表4.

表4 蛇床子干乳劑有效期考察結果

蛇床子的回歸方程:lgV0=17.643－6 773.4/T，R2=0.991，按蛇床子室溫(25℃)推算貯存期為2.10 a，因此可將蛇床子干乳劑室溫的貯存期定為2 a.

5 討論

在影響因素的高溫、高濕試驗中，蛇床子干乳劑均呈黃綠色，只在第10天稍微有變化，質量、溶解度、質量分數(shù)均較平穩(wěn)，由此可見干乳劑中輔料可保護蛇床子提取物不受高溫、高濕影響，保持良好的穩(wěn)定性.但在強光照試驗中，干乳劑顏色明顯加深，指標含量明顯降低，質量、溶解度也有較大改變.說明蛇床子干乳劑易受強光影響，其有效成分隨之分解，使質量分數(shù)降低.

干乳劑輔料將蛇床子提取物包裹其中，降低其藥物的不穩(wěn)定性.根據(jù)中藥新藥穩(wěn)定性試驗要求，應達到1.5 a的室溫保存時間，經有效期考察試驗可推算本劑型多于2 a，符合標準.應在避光陰涼處保存，具體時間仍需將樣品在室溫下進行長期試驗考察.

蛇床子中脂溶性成分多數(shù)為總香豆素類，主要成分為蛇床子素，并以此作為指標進行考察.在多批干乳劑中，指標物含量無明顯差異，說明工藝較穩(wěn)定成熟.而且干乳溶于少量水中便可形成初乳，在沒有改變使用蛇床子乳劑這個初衷的前提下，使劑型的穩(wěn)定性和貯存更加完善.這將為蛇床子藥物大量生產并廣泛應用于臨床提供基礎.

[1]曹 暉，蔡金娜，劉玉萍，等.蛇床子地理分布與葉綠體matK基因序列的相關性分析[J].中國藥學雜志，2001，36(6):373－376.

[2]楊 婧，姜霽洺，王 銳.蛇床子乳劑的制備及體外抗陰道滴蟲考察[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18(23):31－33.

[3]張小麗，王 鴻.藥物干乳劑的研究進展[J].中國藥業(yè)，2008，17(20):62 －63.

[4]朱愛軍，王周麗，貝永燕，等.蛇床子素β－環(huán)糊精包合物分散片的制備及大鼠體內藥動學研究[J].中成藥，2012，34(10):1890－1890.

[5]賈東明，朱校勇.美洛昔康干乳的制備及其穩(wěn)定性考察[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2008，28(20):1793－1795.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業(yè)社，2010:199.

[7]柏干榮，韋 宏.氟哌酸滴眼液穩(wěn)定性的研究[J].中國醫(yī)院藥學雜志，1993，13(5):196－198.