徐 暘，何滟澦，閆 靜

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040)

虎眼萬(wàn)年青(Ornithogalum caudatum Ait)為百合科虎眼萬(wàn)年青屬常綠多年生草本植物的干燥全草，又名胡連萬(wàn)年青、海蔥、葫蘆蘭、珍珠草、鳥(niǎo)乳花，屬常見(jiàn)的觀賞花卉，原產(chǎn)于非洲南部，我國(guó)各地廣泛栽培[1－2].虎眼萬(wàn)年青味甘、性微寒，歸肝、脾經(jīng)，具有清熱解毒，消堅(jiān)散結(jié)的功能，是民間常用中藥材，將其莖葉搗碎外敷可以消除疔瘡癰癤、無(wú)名腫痛，內(nèi)服則能化瘀解毒，治療肝硬化、肝炎等疾病[3]，近年研究發(fā)現(xiàn)其有很強(qiáng)的抗癌活性[4－6]，目前對(duì)于虎眼萬(wàn)年青的研究主要集中在抗腫瘤及其對(duì)機(jī)體調(diào)節(jié)免疫方向和化學(xué)成分方向，對(duì)于其抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究尚未見(jiàn)報(bào)道.因此，本文用虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物中粗總皂苷對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化功能進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步深入探討虎眼萬(wàn)年青具有抗癌、鎮(zhèn)痛抗炎和提高免疫力等生物活性提供理論和技術(shù)支持.

1 材料和方法

1.1 儀器

R－202旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司);JY系列藥物電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);UV160型紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(島津公司).

1.2 材料

虎眼萬(wàn)年青購(gòu)買于吉林省白山市長(zhǎng)白縣;昆明種小鼠購(gòu)買于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心;SOD、MDA試劑盒購(gòu)于南京建成生物試劑公司.

1.3 方法

1.3.1 藥物的提取與分離

稱取虎眼萬(wàn)年青干燥粗粉適量，用70%乙醇加熱回流提取，提取3次，合并提取液，抽濾后55℃低壓濃縮，得到虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物的水溶液依次用乙醚和水飽和的正丁醇萃取，正丁醇層進(jìn)行濃縮、烘干，得虎眼萬(wàn)年青粗總皂苷浸膏，放置4℃冰箱中備用.

1.3.2 動(dòng)物處理

取昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18～22 g，在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，隨機(jī)分成5組，每組10只，灌胃給藥，灌胃前小鼠禁食不禁水12 h.

第一組空白對(duì)照組給予蒸餾水(10 mL/kg)，第二組陽(yáng)性對(duì)照組(Vc組)給予Vc水溶液(10 mL/kg、15 mg/kg)，現(xiàn)用現(xiàn)配;第三組高劑量組給予虎眼萬(wàn)年青總皂苷(20 mL/kg、30 mg/kg)，第四組中劑量組給予虎眼萬(wàn)年青總皂苷(10 mL/kg、15 mg/kg)，第五組低劑量組給予虎眼萬(wàn)年青總皂苷(5 mL/kg、7.5 mg/kg).

1.3.3 SOD和MDA的含量測(cè)定

每天灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃14 d，最后一次灌胃后30 min后摘眼球取血，血液凝固后，4℃，3 000 r/min離心10 min，制成血清待用.將采完血的小鼠頸椎脫臼法處死，取出肝臟，用冰冷的生理鹽水洗滌數(shù)次，濾紙吸干水分，稱取1 g放入小燒杯中剪碎，轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器中，用0.86%的生理鹽水配成10%的肝組織勻漿，充分研磨數(shù)次后使組織勻漿化后以4 000 r/min離心10 min，收集上清液待用.

SOD活性檢測(cè):分別輕取血清10 μL和10%的肝組織勻漿液30 μL，按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，依次加入各種試劑，混勻，置37℃恒溫水浴鍋加熱40 min后，加入顯色劑，混勻，室溫放置10 min，于550 nm波長(zhǎng)處，1 cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色，測(cè)定測(cè)試管及對(duì)照管的吸光度值.

血清中總SOD活力(U/mL)=[(對(duì)照管吸光度值一測(cè)定管吸光度值)/對(duì)照管吸光度值]/50%×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣本測(cè)試前的稀釋倍數(shù)

組織勻漿中SOD活力(U/mL)=[(對(duì)照管吸光度值一測(cè)定管吸光度值)/對(duì)照管吸光度值]/50% ×反應(yīng)液總體積/取樣量(mL)/待測(cè)樣本蛋白濃度(mgproL/mL)

MDA含量檢測(cè):分別輕取血清10 μL和10%的肝組織勻漿液10 μL，按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書，將試劑依次加入各個(gè)試管，渦旋混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺一小孔，95℃水浴40 min，取出后流水冷卻，532 nm波長(zhǎng)處，l cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色，測(cè)定各管的吸光度.

血清中MDA含量=[(測(cè)定管吸光度值－測(cè)定空白管吸光度值)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度值－標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度值)]×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)

組織中MDA含量=[(測(cè)定管吸光度值－測(cè)定空白管吸光度值)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度值－標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度值)]×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)/待測(cè)樣品蛋白濃度(mgproL/mL)

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果分析

虎眼萬(wàn)年青粗總皂苷濃度為高、中、低(30、15、7.5 mg/kg)時(shí)小鼠血清中SOD的活力均顯著高于空白組中SOD的活力;小鼠血中MDA的含量極顯著的低于空白組(P＜0.01).與空白組相比，高、中、低各劑量組中MDA的含量均存在顯著性差異，高、中劑量組中SOD的活力存在顯著性差異(P＜0.01)，低劑量組中SOD的活力存在顯著性差異(P ＜0.05);與 Vc對(duì)照組(15 mg/kg)相比，高劑量組血中SOD的活力顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，高劑量組血中MDA的含量無(wú)顯著性差異.實(shí)驗(yàn)組血中SOD的活力隨著濃度的增高而提高，MDA的含量也隨著濃度的增高而降低.

虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物中粗總皂苷濃度的高、中、低(30、15、7.5 mg/kg)在小鼠肝組織中 MDA的含量極顯著的低于空白組(P＜0.01)，SOD的活力均顯著高于空白組中的SOD的活力(P＜0.01).與空白組相比，高劑量組中MDA的含量與SOD的活力均有顯著性差異(P＜0.01)，中、低劑量組中MDA的含量存在顯著性差異(P＜0.05);與Vc對(duì)照組(15 mg/kg)相比，高劑量組中MDA的含量顯著低于Vc對(duì)照組(P＜0.05)，SOD的活力無(wú)顯著性差異.虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物可以顯著的提高小鼠體內(nèi)SOD的活力和顯著的降低體內(nèi)MDA的含量，尤其是高劑量組中SOD的活力顯著高于空白組(P＜0.01)，MDA的含量極顯著的低于空白組(P＜0.01).實(shí)驗(yàn)中肝組織中SOD的活力隨著濃度的增高而提高，MDA的含量也隨著濃度的增高而降低.

表1 虎眼萬(wàn)年青提取物對(duì)小鼠血清和肝組織MDA含量的影響±S，n=10)

表1 虎眼萬(wàn)年青提取物對(duì)小鼠血清和肝組織MDA含量的影響±S，n=10)

4.062 8 ±0.549 0 3.646 9 ±0.609 3 Vc對(duì)照組 2.229 8 ±0.814 9 2.814 1 ±0.580 4高劑量組 2.087 3 ±0.553 3 2.557 2 ±0.119 1中劑量組 2.353 6 ±0.589 6 2.896 1 ±0.479 6低劑量組/%空白組血中MDA的含量/% 肝組織中MDA的含量2.604 2 ±0.436 5 2.937 9 ±0.464 6

表2 虎眼萬(wàn)年青提取物對(duì)小鼠血清和肝組織SOD活力的影響(±S，n=10)

表2 虎眼萬(wàn)年青提取物對(duì)小鼠血清和肝組織SOD活力的影響(±S，n=10)

血中SOD的活力/(U·mL－1)肝組織中SOD的活力/(U·mL－1)99.171 ±10.399 4 85.039 8 ±3.989 4 Vc對(duì)照組 294.407 ±11.298 0 101.478 6 ±3.431 1高劑量組 314.534 0 ±19.288 3 102.976 0 ±3.336 0中劑量組 190.583 ±15.590 5 87.423 0 ±4.562 7低劑量組空白組113.58 ±16.013 2 85.735 0 ±5.248 6

3 討論

丙二醛(MDA)是動(dòng)物體內(nèi)多元不飽和脂質(zhì)氧化的終產(chǎn)物之一，其含量的高低可以反映體內(nèi)不飽和脂質(zhì)的過(guò)氧化程度，間接地反映出細(xì)胞膜的損傷程度.從表1可以看出，虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物中粗總皂苷可以有效的降低MDA在血液和肝臟中的數(shù)量，降低機(jī)體被脂質(zhì)過(guò)氧化，減輕機(jī)體被自由基損壞的程度.超氧化物歧化酶(SOD)是體內(nèi)一種重要的氧自由基清除劑，能夠平衡機(jī)體的氧自由基，從而避免當(dāng)體內(nèi)超氧陰離子自由基濃度過(guò)高時(shí)引起的不良反應(yīng)，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡有著重要的作用.當(dāng)體內(nèi)自由基水平失衡時(shí)會(huì)導(dǎo)致各種疾病(腫瘤、衰老、炎癥等)，SOD能清除超氧離子自由基O2

－·，保護(hù)細(xì)胞免受損傷.因此SOD活力的高低與衰老、腫瘤、炎癥等有著密切的關(guān)系.如表2可以看出虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物可以顯著的增加體內(nèi)SOD的數(shù)量，提高體內(nèi)SOD的活力，其高劑量組(30 mg/kg)的抗氧化能力可以與Vc(15 mg/kg)對(duì)照組抗氧化的能力相仿，隨著藥物濃度的增高，體內(nèi)的SOD的活力也隨之增大.

虎眼萬(wàn)年青乙醇提取物中含有皂苷、生物堿、黃酮、香豆素類等多種成分，本實(shí)驗(yàn)采用70%乙醇加熱回流提取虎眼萬(wàn)年青總皂苷進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，高劑量組(30 mg/kg)的抗氧化能力可以與Vc(15 mg/kg)對(duì)照組抗氧化的能力相近，通過(guò)SOD和MDA的結(jié)果分析得知虎眼萬(wàn)年青總皂苷成分具有一定的抗氧化效果，可以有效的提高體內(nèi)清除超氧陰離子自由基的能力和降低MDA在血液和肝臟中的數(shù)量，有助于增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，具有一定的抗氧化作用，這對(duì)保護(hù)細(xì)胞，延緩衰老具有重要意義，但其作用機(jī)理和有效活性成分則有待于進(jìn)一步研究.

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