管建云李軍擴

PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌中的表達及其臨床意義

管建云①李軍擴②

目的：探討PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌中的表達與其發(fā)生﹑發(fā)展的關(guān)系及其臨床意義。方法：應(yīng)用免疫組化法檢測62例膀胱尿路上皮細胞癌和23例正常膀胱黏膜標本中PTEN的表達情況，分析其表達與膀胱癌的發(fā)生，病理分級及臨床分期的關(guān)系。結(jié)果：PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌組織和正常膀胱黏膜組織中的陽性表達率分別是100%和46.77%，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且膀胱癌細胞分化越差，臨床分期越高，PTEN陽性表達率越低，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論：膀胱尿路上皮細胞癌的發(fā)生﹑發(fā)展與PTEN的表達缺失有關(guān)。檢測其表達情況對膀胱癌的預(yù)后判斷及治療選擇可能具有重要價值。

膀胱； 尿路上皮細胞癌； PTEN蛋白； 臨床意義

膀胱癌是泌尿外科中最常見的腫瘤，發(fā)病率逐年升高，其中90%以上為移行細胞癌，其特點為多中心性﹑易復(fù)發(fā)性及復(fù)發(fā)后惡性程度增加。從分子水平進行研究其特性，有可能對其臨床治療發(fā)揮積極作用。本研究采用免疫組化方法分別檢測膀胱尿路上皮細胞癌和正常膀胱黏膜組織中PTEN蛋白的表達，分析其與膀胱癌發(fā)生發(fā)展及臨床病理之間的關(guān)系，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組膀胱尿路上皮細胞癌62例，包括男48例，女14例，年齡34～78歲，平均（57.8±6.1）歲。按WHO病理分級分期標準，Ⅲ級16例，Ⅱ級24例，Ⅰ級22例。Ta～T1期37例，T2～T4期25例。23例正常膀胱組織取自其他膀胱手術(shù)患者，包括男17例，女6例；年齡26～72歲，平均（55.3±7.5）歲。

1.2 試劑及方法 即用型兔抗人PTEN多克隆抗體，DAB顯色試劑盒及SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。所有標本經(jīng)4%福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm薄切片，分別作HE及免疫組化染色。采用免疫組織化學SP法，操作按試劑盒說明書進行。用已知陽性片作陽性對照；用PBS代替一抗，作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 PTEN陽性細胞為胞漿或細胞核著色，呈橘黃色或棕黃色，根據(jù)視野中陽性細胞占全部同類細胞總數(shù)的比例及染色強度綜合判定。按著色強度分：不著色計為0分，淺黃色計為1分，棕黃色計為2分，棕褐色計為3分。再將陽性細胞按比例評定：陽性細胞數(shù)＜10%計為0分；10%～40%計為1分；41%～70%計為2分；＞70%計為3分。將兩種評分相加，3～6分為陽性（+）；0～2分為陰性（-）。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，率的比較采用 χ2檢驗，小樣本資料采用Fisher精確概率檢驗法，α=0.05為檢驗水準。

2 結(jié)果

2.1 PTEN蛋白在膀胱癌組織和正常膀胱黏膜組織中的表達 PTEN蛋白表達主要于細胞質(zhì)中，陽性為黃色﹑棕黃色顆粒，胞核可見少量表達。在62例膀胱癌組織標本中有29例呈PTEN蛋白陽性表達，陽性表達率為46.7%；在23例正常膀胱組織中PTEN蛋白均為陽性表達，陽性表達率為100%。PTEN蛋白的陽性表達率在膀胱癌組織中明顯低于正常膀胱組織，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 PTEN蛋白的陽性表達與膀胱癌臨床病理特征之間的關(guān)系 16例Ⅲ級膀胱移行細胞癌標本中PTEN蛋白陽性表達率為25.00%（4例），24例Ⅱ級膀胱移行細胞癌標本中PTEN蛋白陽性表達率為37.50%（9例），22例Ⅰ級膀胱移行細胞癌標本中PTEN蛋白陽性表達率為72.73%（16例），比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Ta～T1中PTEN蛋白的陽性表達率為64.86%（24例），T2～T4中PTEN蛋白的陽性表達率為20.00%（5例），比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3 討論

PTEN基因是一個高度保守的抑癌基因，在人類位于10號染色體q23.3區(qū)，有9個外顯子和8個內(nèi)含子。其編碼產(chǎn)物為一個含有403個氨基酸的多肽鏈。PTEN蛋白具有雙特異性磷酸酶（酪氨酸磷酸酶和脂質(zhì)磷酸酶）活性，通過作用于細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中多種信號分子[1]，脫去PI3K/PIP2/PIP3/AKT﹑MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）﹑FAK（聚集粘連激酶）等多種關(guān)鍵激酶的磷酸根，降低其磷酸化水平，使其活性減弱，阻斷細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。參與調(diào)節(jié)細胞的正常生長和發(fā)育，抑制細胞轉(zhuǎn)化，并作用于細胞周期蛋白參與細胞周期的調(diào)控，促進細胞凋亡，從而負性調(diào)控腫瘤發(fā)生﹑發(fā)展，侵襲和轉(zhuǎn)移[2-4]。PTEN基因突變或表達缺失導(dǎo)致其雙特異性磷酸酶失去活性，失去對細胞周期的負性調(diào)控作用，細胞將不依賴細胞周期蛋白的調(diào)控而無限增殖，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

目前研究已證明PTEN具有明確的抑癌作用，它在多種人類腫瘤組織中表達減少或缺失[5]。PTEN的低表達或表達缺失在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展過程中也普遍存在[6]，不但PTEN基因的丟失或滅活與膀胱癌的發(fā)生，膀胱癌的病理級別明顯相關(guān)，而且與膀胱癌的進展和預(yù)后不良呈負相關(guān)[6]。檢測PTEN蛋白的表達可以作為觀察膀胱癌發(fā)生及預(yù)后的客觀指標之一[7-8]。本研究顯示，PTEN蛋白在膀胱尿路上皮細胞癌和正常膀胱組織的表達率分別為46.7%和100%，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而且隨著腫瘤細胞分化程度的降低和臨床分期的增高，PTEN的陽性表達也逐漸降低，其差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），本研究結(jié)果與文獻報道相類似。由此表明，PTEN蛋白表達降低或缺失在膀胱尿路上皮細胞癌的發(fā)生﹑發(fā)展過程中起重要的作用。

臨床上，膀胱腫瘤的特點是中心性﹑易復(fù)發(fā)性，對放化療不敏感，效果差，表淺膀胱癌治療方法主要是膀胱部分切除術(shù)，術(shù)后局部膀胱灌注，術(shù)后易復(fù)發(fā)且惡性程度增加，浸潤性癌的治療方法主要是全膀胱切除術(shù)輔以術(shù)后放療或化療。對于出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者則無有效治療法方。近年來從分子水平對腫瘤的發(fā)病機制已有了進一步認識，對多種腫瘤已成功開始實施靶向治療。其特點是靶向藥物特異性地選擇細胞內(nèi)與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)部的一個基因片段或蛋白分子，調(diào)節(jié)細胞的生長﹑增值﹑調(diào)亡，使特異的腫瘤細胞死亡，而正常組織細胞不被會波及，具有定向性好﹑毒副作用小﹑無需最大耐受劑量即可獲得較佳的臨床療效等特點，所以又被稱為“生物導(dǎo)彈”。藥物靶向治療在一些腫瘤的治療方面已取得了一定的療效，然而在膀胱癌的治療方面卻無明顯進展，近年來已成為廣大學者研究熱點之一。

研究發(fā)現(xiàn)，在膀胱癌中PTEN蛋白的表達缺失普遍存在，而PTEN蛋白在多條細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起重要作用。因此，它有可能成為治療膀胱癌的重要靶點，許多學者已在致力于這方面的探索，可以相信臨床上有可能通過上調(diào)PTEN蛋白的表達來治療膀胱癌，抑制其發(fā)生﹑發(fā)展。有文獻報道，甘草苷﹑姜黃素﹑吲哚美辛等均可以上調(diào)人細胞PTEN的表達[9-11]，相信隨著研究的不斷深入，PTEN有望成為治療膀胱癌的靶點，更多的膀胱腫瘤患者將會從中受益。

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Expression and Significance of PTEN in Human Bladder Urothelial Cell Carcinoma/

GUAN J ian-yun， LI J un-kuo.//Medical Innovation of China，2014，11（19）：133-135

Objective： To investigate the expression of PTEN in bladder urothelial cell carcinoma， the relationship of its genesis， development and its clinical significance. Method： Expression of PTEN protein in 62 bladder urothelial cell carcinoma and 23 normal bladder tissues was analyzed by using SP immuno-histochemistry. The relationship between the expression of PTEN and the occurrence， pathologic grade and clinical stage of bladder cancer was analyzed. Result： The positive expression rate of PTEN in bladder urothelial cell carcinoma and normal bladder tissues was 100% and 46.77% respectively， the difference was statistically significant （P＜0.05）， with lower differentiation and higher stage， expression rate of PTEN run low， the differences was statistically significant （P＜0.05）. Conclusion： The expression of PTEN deficiency may be involved in the occurrence and development of the human bladder urothelial cell carcinoma. It may have significant value to test the expression of PTEN on prognosis and treatment options for bladder cancer.

Bladder； Urothelial cell carcinoma； PTEN protein； Clinical significance

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.19.046

2014-03-06） （本文編輯：王宇）

①河南省安陽市腫瘤醫(yī)院 河南科技大學四附院 河南 安陽455000

②河南省安陽市腫瘤醫(yī)院

管建云

First-author’s address： Anyang Tumor Hospital， the Fourth Affiliated Hospital of He’nan University of Science and Technology， Anyang 455000， China