馮 利， 趙 歡

（河北工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 環(huán)境與化學(xué)工程系，河北 石家莊 050091）

乙型病毒性肝炎，是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，縮寫(xiě)為HBV）引發(fā)的世界分布性傳染疾病，目前尚無(wú)治愈此病的特效藥物.接種乙肝疫苗是預(yù)防和阻斷HBV感染的重要措施.

目前普遍推行的乙肝疫苗主要是由重組的釀酒酵母、漢遜酵母或中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（chinese hamster overy，縮寫(xiě)為CHO）細(xì)胞表達(dá)的乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen，縮寫(xiě)為 HBsAg）［1］添加到氫氧化鋁或磷酸鋁佐劑中制備而成.全程免疫后，95%的免疫人群均可產(chǎn)生TH2型體液免疫應(yīng)答，從而起到抗感染的保護(hù)作用［2］.然而，它對(duì)于早期細(xì)胞免疫，阻斷病毒母嬰傳播并不能發(fā)揮有效作用，對(duì)于肝細(xì)胞內(nèi)寄生的HBV，亦不能發(fā)揮細(xì)胞免疫作用，也不能有效清除病毒.此外，仍有4%的健康人接種后體內(nèi)無(wú)法達(dá)到保護(hù)性抗體水平（抗體滴度≤10mIU／mL），一些特定人群如老人、體胖者、煙民、免疫缺陷病人、慢性腎病或血液透析病人、肝移植患者、腹瀉病人、糖尿病患者等接種疫苗后仍表現(xiàn)為低應(yīng)答或無(wú)應(yīng)答［3－6］.現(xiàn)行乙肝疫苗全程免疫一般需要多次注射，不斷加強(qiáng)免疫效果，才能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生長(zhǎng)效的免疫應(yīng)答.但是對(duì)于一些發(fā)展中國(guó)家或地區(qū)，由于條件所限，很難保證全程免疫三針.我國(guó)自2002年開(kāi)展乙肝疫苗計(jì)劃免疫以來(lái)，雖然乙肝病毒感染率從1992年的9.75%下降到2006年的7.2%，但仍未實(shí)現(xiàn)全程覆蓋的全面疫苗接種，在中東部發(fā)達(dá)地區(qū)三針全程覆蓋率為80%～90%，而在西部貧困地區(qū)甚至要低于40%［7－8］.因此，簡(jiǎn)化免疫程序，發(fā)展更有免疫效果，甚至具有一定治療作用的新型乙肝疫苗，已成為各國(guó)近年來(lái)關(guān)注的主題之一.本文針對(duì)乙肝疫苗存在的問(wèn)題，就乙肝疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述.

1 1018ISS佐劑疫苗

1018免疫刺激序列（1018immunostimulatory sequence，縮寫(xiě)為1018ISS）是采用標(biāo)準(zhǔn)的固相化學(xué)技術(shù)制備的Toll樣9受體激動(dòng)劑，由22個(gè)堿基組成 （5′－TGACTGTGAACGTTCGAGGATGA－3′），屬于單鏈的硫代磷酸寡脫氧核苷酸.免疫刺激序列作為信號(hào)分子對(duì)機(jī)體的重要生理功能產(chǎn)生調(diào)控作用.1018ISS與HBsAg混合同時(shí)接種，能發(fā)揮較好的佐劑效能，增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答水平.特別是對(duì)于低應(yīng)答或無(wú)應(yīng)答的特定人群，能顯示出快速免疫應(yīng)答和較高的免疫保護(hù)作用.作為一種新疫苗，除具有很好的免疫原性外，安全性和反應(yīng)原性也是重要的評(píng)價(jià)參數(shù).在Ⅱ期和Ⅲ期臨床試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，注射部位的痛感和紅腫程度與對(duì)照的上市疫苗無(wú)顯著差異，除有易疲勞、腹瀉、頭痛、上呼吸道感染、鼻咽炎等個(gè)例外，不良反應(yīng)均比較溫和，發(fā)生的頻次和嚴(yán)重程度與對(duì)照的上市疫苗相比無(wú)顯著差異，亦無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)產(chǎn)生.它具有很好的市場(chǎng)前景［9－11］.

2 YIC治療疫苗

重組酵母表達(dá)的HBsAg與其相應(yīng)的高滴度人特異性抗－HBs免疫球蛋白（human high－titer anti－HBs immunoglobin，縮寫(xiě)為HBIG）的Fab段結(jié)合，組成免疫復(fù)合物，在鋁佐劑輔佐下制備成YIC治療疫苗（yeast－derived recombinant HBsAg complexed with human anti－HBs immunoglobulin immunogenic complex，縮寫(xiě)為YIC）.此治療疫苗抗體分子的Fc段可與抗原提呈細(xì)胞（Antigen presenting cells，縮寫(xiě)為APCs）表面的Fc段受體結(jié)合，促使HBsAg易被巨噬細(xì)胞或樹(shù)突狀細(xì)胞等的APCs攝取，進(jìn)而有效激活T細(xì)胞，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答.臨床試驗(yàn)過(guò)程中，YIC治療疫苗可誘使慢性乙肝患者產(chǎn)生高效價(jià)的乙型肝炎病毒表面抗體（抗－HBs）、細(xì)胞因子干擾素－γ（interferon－gamma，縮寫(xiě)為IFN－γ）與白細(xì)胞介素（interlukin，縮寫(xiě)為IL－2），并清除機(jī)體內(nèi)一定的HBsAg，使患者血清中HBV的DNA有所降低，因此，它具有一定的免疫保護(hù)和清除病毒的治療作用.患者的乙型肝炎e抗原（Hepatitis B e antigen，縮寫(xiě)為HBeAg）轉(zhuǎn)陰和產(chǎn)生抗－HBe抗體是評(píng)價(jià)疫苗是否具有治療效果的重要指標(biāo).YIC治療疫苗在臨床試驗(yàn)中的患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率和產(chǎn)生抗－HBe抗體水平雖高于患者自發(fā)的轉(zhuǎn)陰率和抗－HBe抗體水平，但低于鋁佐劑的實(shí)驗(yàn)對(duì)照組水平.因此，YIC治療疫苗雖表現(xiàn)了一定的預(yù)防和治療效果，但在免疫、治療方案以及免疫學(xué)評(píng)價(jià)方面尚需一定的上市前臨床研究工作［12－15］.

3 單劑緩控釋微球

單劑緩控釋微球是將HBsAg 溶解或分散在可生物降解的高分子聚酯材料基質(zhì)中而形成的微小球狀實(shí)體.這些聚酯材料如聚乳酸（Poly lactic acid，縮寫(xiě)為PLA）、聚乳酸／乙醇酸共聚物（Poly lactic co glycolic acid，縮寫(xiě)為PLGA）、聚己內(nèi)酯（Polycaprolactone，縮寫(xiě)為PCL）等是經(jīng)FDA批準(zhǔn)的可生物降解材料，有很好的生物兼容性和非毒性，在體內(nèi)的降解為非酶水解過(guò)程.降解過(guò)程為：水?dāng)U散進(jìn)入高分子材料（最先進(jìn)入比較無(wú)定型的區(qū)域），自由水解，高分子材料溶蝕，經(jīng)過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞、代謝，高分子材料骨架解體，水解的產(chǎn)物——乳酸進(jìn)入體內(nèi)代謝的三羧酸循環(huán)，最終降解成二氧化碳、水或乙醇酸直接排泄或被酶解為其他代謝產(chǎn)物.通過(guò)選擇不同聚酯材料的分子量大小、分子量分布、含親水性基團(tuán)的多少以及單體材料的旋光性來(lái)控制微球的大小和體內(nèi)降解速度，進(jìn)而控制微球疫苗釋放HBsAg，誘發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生預(yù)期的免疫效果.一般選擇制備粒徑小于10μm的微球疫苗，以利于APCs有效攝取鋁吸附抗原，誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生TH2型體液免疫應(yīng)答.HBsAg微球單劑免疫小鼠時(shí)，相對(duì)速釋的微球能夠在免疫早期于小鼠體內(nèi)誘發(fā)產(chǎn)生較高的抗體應(yīng)答，起到“primingdose”作用.而在后續(xù)的時(shí)間，相對(duì)緩釋的微球在體內(nèi)緩慢降解，持續(xù)釋放HBsAg，成為很好的“booster－dose”，形成對(duì)小鼠持續(xù)有效的免疫刺激.這種具有“Autobooster”性質(zhì)的投遞系統(tǒng)，很好地模擬了現(xiàn)行鋁佐劑疫苗在體內(nèi)的免疫行為，有效地簡(jiǎn)化了免疫方式，為開(kāi)發(fā)可以替代傳統(tǒng)的需要全程免疫三針的鋁佐劑疫苗奠定了基礎(chǔ)［16－19］.

4 結(jié)束語(yǔ)

乙型肝炎病毒感染是嚴(yán)重危害我國(guó)乃至全球的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，目前尚無(wú)有效的方法治愈.推行乙肝疫苗接種是預(yù)防和阻斷HBV傳播的有效方法.提高乙肝疫苗的免疫原性，增強(qiáng)各人群對(duì)疫苗的應(yīng)答水平，簡(jiǎn)化免疫程序，改變給藥方式，既能發(fā)揮免疫預(yù)防作用，又可以有效清除病毒并達(dá)到治療效果，是有效遏制乙型肝炎的發(fā)展趨勢(shì).

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