白小寧 熊 燕

（1.鳳翔縣水利局 陜西 寶雞 721400）（2.云南省漁業(yè)科學(xué)研究院 云南 昆明 650111）

彩鯽（Color Crucian carp），在分類學(xué)上屬于鯉形目、鯉科、鯉亞科、鯽屬。人工養(yǎng)殖品種，其形態(tài)特征與普通鯽魚(yú)相似，個(gè)體較小，可食用，體形側(cè)扁，高且厚，腹部圓；頭短小，吻鈍；口端位，無(wú)口須；背鰭和臀鰭最后的不分枝鰭條是后緣有鋸齒的硬刺，背鰭基較長(zhǎng)，尾鰭叉型或燕尾型；體色鮮艷美麗，有全身純白、純紅、純黑、金黃，黑紫或一身五色俱全，具有較強(qiáng)的觀賞性。為更有效地開(kāi)發(fā)這一名優(yōu)新品種，我們對(duì)其胚胎發(fā)育和仔魚(yú)前期發(fā)育作了初步研究與探討。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)的時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2013年7月份到2014年5月份在上述試驗(yàn)基地結(jié)合生產(chǎn)進(jìn)行。

1.2 親魚(yú)選擇

選擇體質(zhì)健壯的1﹢到2﹢，體重在250g以上的體形、體色正常的成年彩鯽雌、雄親魚(yú)。即雌魚(yú)腹部柔軟，有卵巢輪廓，泄殖孔紅腫充血，稍壓下腹即有成熟卵粒流出；雄魚(yú)輕壓下腹有乳白色精液流出，流出精液遇水即散。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 受精卵孵化方法

本實(shí)驗(yàn)采用人工催產(chǎn)親魚(yú)和自然授精、自然孵化方法。催產(chǎn)劑為促黃體釋放激素（LRH），規(guī)格0.1mg/支，共用25支，注入500mL中，用量為每kg注射LRH0.005mg，即每條親魚(yú)注射1mL藥液，雌雄魚(yú)同時(shí)一針注射，采用腹腔注射。注射后放回產(chǎn)卵池中，待其自然產(chǎn)卵，置于孵化池中孵化；產(chǎn)卵前在魚(yú)池中架設(shè)魚(yú)巢（魚(yú)巢使用柳樹(shù)根），使親魚(yú)產(chǎn)卵于其上。

1.3.2 胚胎發(fā)育及仔魚(yú)發(fā)育觀察方法

胚胎發(fā)育各期的劃分參照李璞關(guān)于鯽魚(yú)和金魚(yú)胚胎發(fā)育的分期。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，囊胚期之前每隔0.5h、從囊胚期開(kāi)始每隔2h取同一組親魚(yú)產(chǎn)的同一批卵1次，用解剖鏡觀察胚胎發(fā)育狀況。每個(gè)實(shí)驗(yàn)單元每次隨機(jī)取樣10粒卵。以觀察數(shù)的50%個(gè)體達(dá)到相應(yīng)的發(fā)育程度來(lái)確定胚胎發(fā)育各期時(shí)間，所有死卵取出計(jì)數(shù)。仔魚(yú)出膜后統(tǒng)計(jì)各單元的出膜個(gè)體數(shù)并累加死亡卵總數(shù)。出膜后每4h左右觀察1次。每次觀察做詳細(xì)記錄，選取典型時(shí)期的胚胎拍照、繪圖和固定。采用0.8﹪固定各期標(biāo)本10個(gè)，24h后用水沖洗，逐級(jí)保存于70%乙醇中以備復(fù)核胚胎細(xì)微結(jié)構(gòu)。觀察期間每?jī)蓚€(gè)小時(shí)測(cè)一次催產(chǎn)池中水溫，溶氧并做記錄（見(jiàn)表1）。

1.3.3 器材及設(shè)施

催產(chǎn)劑：LRH-A激素；便攜式測(cè)氧儀（YSI.Incorporateol Yellow Spring;ohio.45387 USA），連續(xù)變倍解剖鏡（XTZ-E），顯微鏡（YSI.55.DISSOLVEO.OXYGEN Model#55112FT.SW:03A0858.AV） 和數(shù)碼攝象系統(tǒng)（Nikon E4500）。

2 結(jié)果分析

2.1 胚胎發(fā)育

彩鯽的胚胎發(fā)育從受精卵到孵化出膜期，根據(jù)形態(tài)及生理變化特征共分為6期，每期及其特征記述如下（以同組內(nèi)1/3以上個(gè)體顯出某期特征作為該期開(kāi)始，平均水溫20.5℃）：

受精卵：彩鯽成熟卵子呈黃色，圓形，有粘性，卵徑為2.0mm，卵質(zhì)分布均勻。受精后的卵子卵膜吸水膨脹，晶瑩透亮，卵間隙增大。受精后40min，卵子細(xì)胞質(zhì)開(kāi)始向動(dòng)物極集中并逐漸隆起，形成胚盤，黏附于異物上開(kāi)始發(fā)育。

卵裂期：在平均水溫為20℃時(shí)，受精后1.0h，卵子動(dòng)物極出現(xiàn)裂紋，胚盤縱向分裂成兩個(gè)相似的分裂球，進(jìn)入2細(xì)胞期。1.5h后，胚盤沿第一次分裂垂直的方向進(jìn)行第二次縱裂，此為4細(xì)胞期。受精后3.0h，開(kāi)始發(fā)現(xiàn)有多細(xì)胞期胚胎，大部分胚胎處于64細(xì)胞期。3.7h后，胚胎大多已進(jìn)入多細(xì)胞期，少數(shù)已進(jìn)入囊胚早期。（圖版Ⅰ-2）

囊胚期：受精后4.3h，細(xì)胞繼續(xù)分裂，數(shù)量不斷增多，細(xì)胞的大小也相應(yīng)變小，細(xì)胞界限已不很清楚，整個(gè)胚體細(xì)胞高舉于卵黃上，逐步過(guò)渡到囊胚期胚胎。至6.0h，開(kāi)始有少部分胚胎死亡。7.5h后，囊胚細(xì)胞覆蓋于卵黃的面積擴(kuò)大，囊胚層上細(xì)胞平展于卵黃上方，細(xì)胞體積更小。有超過(guò)半數(shù)的胚胎到達(dá)囊胚晚期。（圖版Ⅰ-3）

原腸期：受精后10.0h，胚層開(kāi)始外包，慢慢進(jìn)入原腸期，早期囊胚層細(xì)胞擴(kuò)展于卵黃上部，其邊緣上沿細(xì)胞堆集加厚形成胚環(huán)。胚環(huán)基區(qū)上特別加厚部分形成胚盾。12.3h后，發(fā)育至原腸中期，囊胚層繼續(xù)擴(kuò)展，包圍了一半卵黃，胚環(huán)向下方移動(dòng)。原腸胚晚期囊胚層包圍了卵黃大部，胚盾繼續(xù)伸長(zhǎng)變窄形成中樞神經(jīng)系統(tǒng)原基。（圖版Ⅰ-4）

神經(jīng)胚期：受精后15.5h，胚胎進(jìn)入神經(jīng)胚早期，卵黃栓尚未完全包被。17.3h后，卵黃被完全包被，卵黃栓消失胚體前端膨大部分形成腦，出現(xiàn)柱狀脊索。（圖版Ⅰ-5）。

器官形成期：受精后19.50h，胚胎進(jìn)入器官形成期；20.0h后，頭部?jī)蓚?cè)膨大形成視泡，21.5h后，肌節(jié)出現(xiàn)。22.5h后，在眼原基上方腦泡分化成前、中、后腦三部分，胚體出現(xiàn)3～14對(duì)體節(jié)，出現(xiàn)尾芽，隨著尾芽不斷發(fā)展延伸，卵黃囊由圓變長(zhǎng)。28.0h后，出現(xiàn)胚動(dòng)，進(jìn)入肌肉效應(yīng)期，開(kāi)始胚動(dòng)的頻率很低，隨時(shí)間的推移逐漸加快。31.0h后，胚胎卷曲延長(zhǎng)，卵黃減少。而后3.0h，始見(jiàn)有心臟搏動(dòng)，平均頻率39次/分鐘，后逐漸增加到70次/分鐘。47.3h見(jiàn)有血液流動(dòng)，再過(guò)2.0h，所有胚胎都開(kāi)始血液循環(huán)（圖版Ⅰ-6）。

孵化期：受精后60.0~72.0h，胚胎尾部劇烈扭動(dòng)從而沖出卵膜。但剛出膜的幼魚(yú)還帶有很多卵黃，只能在水中做折線游動(dòng)（圖版Ⅰ-7）。

圖版Ⅰ 彩鯽胚胎發(fā)育圖

2.2 仔魚(yú)發(fā)育

剛出卵膜的仔魚(yú)，全長(zhǎng)4.4±0.2mm，有肌節(jié)25～27對(duì)，卵黃囊呈橢圓形，卵黃囊長(zhǎng)徑為1.1±0.1mm，卵黃囊短徑為0.8±0.1mm；剛出膜的仔魚(yú)游動(dòng)能力差，靠油球作用浮在水中，時(shí)常作間隙性“竄動(dòng)”。油球位于卵黃囊的后下方。（圖版Ⅱ-1）

孵化出第1d仔魚(yú)，全長(zhǎng)5.6±0.2mm，卵黃囊長(zhǎng)徑為1.0±0.1mm，卵黃囊短徑為0.6±0.2mm，消化道直管狀。其他同初孵仔魚(yú)。（圖版Ⅱ-2）

孵化出第2d仔魚(yú)，全長(zhǎng)5.9±0.1mm，卵黃囊明顯縮小，卵黃囊長(zhǎng)徑為0.7±0.2mm，卵黃囊短徑為0.4±0.1mm，視囊周圍黑色素增多，其他同前?？诎汲霈F(xiàn)，消化管變粗，末端出現(xiàn)彎曲，肛門未開(kāi)。脊索末端出現(xiàn)放射絲。背鰭?cǎi)拊龈?，在尾鰭?cǎi)奚铣霈F(xiàn)一條明亮的弧形曲線，曲線的兩端分別與背、腹鰭?cǎi)薜暮蠖讼噙B接。在第3～4對(duì)肌節(jié)上方的背鰭?cǎi)尢?，出現(xiàn)一個(gè)無(wú)色的圓形亮點(diǎn)，直徑32～40μm，從圓形亮點(diǎn)向四周伸出4～5條有光澤的輻射線，其中一條稍粗，且另一端固定在左側(cè)背部第4肌節(jié)處，其余幾條呈游離狀。此時(shí)的仔魚(yú)對(duì)光反映不敏感，在水體中分布均勻，靠尾部作間歇性擺動(dòng)。（圖版Ⅱ-3）

孵化出第3d仔魚(yú)，全長(zhǎng)6.1±0.1mm，卵黃囊長(zhǎng)徑為0.5±0.2mm，卵黃囊短徑為0.3±0.1mm，仔魚(yú)口膜破裂，口徑0.25±0.03mm，肛門開(kāi)口于體外，消化管產(chǎn)生一道彎曲，仔魚(yú)仍未開(kāi)始攝食。原始胸鰭形成，鰾已出現(xiàn)。視囊內(nèi)黑色素加深，晶體內(nèi)出現(xiàn)黑色素。這時(shí)的仔魚(yú)常傾斜或倒豎水中，有時(shí)作短距離游動(dòng)。（圖版Ⅱ-4）

孵化出第4d仔魚(yú)，全長(zhǎng)6.2±0.1mm，口徑0.35±0.02mm，仔魚(yú)口張合明顯，腸蠕動(dòng)明顯，腸管中部膨大，仔魚(yú)開(kāi)始攝食，所食輪蟲(chóng)清晰可見(jiàn)。眼球黑色素增加，仔魚(yú)胸鰭明顯，呈扇形。仔魚(yú)游動(dòng)能力增強(qiáng)，對(duì)光反映開(kāi)始敏感，白天出現(xiàn)集群現(xiàn)象。（圖版Ⅱ-5）

孵化出第5d仔魚(yú)，全長(zhǎng)6.5±0.2mm，口徑0.41±0.05mm，頭部明顯增大，眼球已完全變黑。有肌節(jié)25對(duì)，脊椎骨25節(jié)。消化道變粗，出現(xiàn)2個(gè)彎曲。在第3～4對(duì)肌節(jié)上方背鰭?cǎi)尢幍臒o(wú)色圓形亮點(diǎn)及尾鰭?cǎi)奚系幕⌒吻€均消失。此時(shí)，油球有提供能量的作用第5d出現(xiàn)體色，呈粉紅色，胸鰭擴(kuò)大，輻射狀鰭條明顯，仔魚(yú)作水平游泳，活動(dòng)迅速，視覺(jué)敏銳，出現(xiàn)垂直遷移運(yùn)動(dòng)的習(xí)性，可攝食。彩鯽仔魚(yú)在孵化后第7d左右卵黃囊消失，此時(shí)如沒(méi)有餌料投喂，仔魚(yú)即進(jìn)入饑餓期，該時(shí)期可維持1～2d左右。（圖版Ⅱ-6）

圖版Ⅱ 彩鯽的仔魚(yú)的初期發(fā)育

3 討論

表1 溶解氧、溫度和鹽度的在24h的變化圖

彩鯽親魚(yú)的性腺發(fā)育程度、卵成熟度會(huì)對(duì)彩鯽胚胎發(fā)育發(fā)生影響。在觀察彩鯽胚胎發(fā)育過(guò)程中，會(huì)看到去粘性、受精質(zhì)量不高的卵，它們?cè)诎l(fā)育過(guò)程中往往會(huì)出現(xiàn)遲滯發(fā)育甚至夭折死亡的情況，一些卵即便孵出仔魚(yú)來(lái)也是尾鰭彎曲，心臟跳動(dòng)微弱，不久即死去。所以，在進(jìn)行彩鯽人工繁殖初期建議采用人工催產(chǎn)、自然受精的繁殖方法可以獲得較理想的受精率和孵化率。

此外，在17～24℃的水溫條件下，彩鯽從受精卵到孵化出膜期全部發(fā)育過(guò)程需68～75h。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)卵受精后1h開(kāi)始第1次分裂，6h結(jié)束卵裂，10h結(jié)束囊胚發(fā)育而出現(xiàn)胚環(huán)，22h開(kāi)始腦的分化，34h開(kāi)始心跳，72h孵化出膜。從表1中顯示整個(gè)孵化期間水溫變幅較小，且每日溫差也不大，這樣的水溫更有利于胚胎的發(fā)育。這是因?yàn)榉趸傅姆置诤妥饔弥饕軠囟鹊挠绊?。魚(yú)類胚胎的孵化出膜主要靠?jī)煞矫娴淖饔茫号唧w的機(jī)械性收縮運(yùn)動(dòng)和孵化酶的作用。大多數(shù)魚(yú)類的胚胎具有起源于外胚層的單細(xì)胞孵化腺，由其分泌孵化酶，使卵膜變薄。孵化酶的分泌和作用受溫度的影響，隨溫度升高，酶的作用加強(qiáng)，但是溫度也有一定的范圍：如果低于下限溫度，則酶的活性受到抑制；高于上限溫度，則酶的活性被破壞。而鹽度雖然對(duì)卵的滲透壓有影響，但是魚(yú)胚胎有滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)能，有防止在低滲條件下不再吸收水分而在高滲條件下失水干燥的功能。因此，鹽度沒(méi)有溫度影響胚胎發(fā)育速度的作用顯著。