薛愛國(guó) 李海燕 宋冬 丁偉

嬰幼兒腹瀉病原菌分布特點(diǎn)及藥敏分析

薛愛國(guó) 李海燕 宋冬 丁偉

目的研究青島市2013年兒童感染性腹瀉的病原菌的分布、流行病學(xué)特征及對(duì)抗菌藥物的敏感情況, 為臨床預(yù)防以及合理用藥提供參考依據(jù)。方法對(duì)2013年1月～2013年12月臨床初步診斷為感染性腹瀉患兒的新鮮糞便標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)和血清分型鑒定, 采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn), 并以免疫層析雙抗體夾心法定性檢測(cè)A群輪狀病毒抗原。結(jié)果526份糞便培養(yǎng)共檢出病原菌6種80株, 檢出率為15.2%(80/526)。檢出沙門菌38株(47.5%), 志賀菌8株(10.0%), 致瀉性大腸桿菌8株(10.0%), 金黃色葡萄球菌4株(5.0%), 銅綠假單胞菌19株(23.7%), 白假絲酵母菌3株(3.75%)。8株志賀菌7株為福氏志賀菌, 1株鮑氏志賀菌。沙門菌和志賀菌的耐藥率分別為氨芐西林(68.7%、76.9%)、復(fù)方新諾明(21.1%、38.5%)、環(huán)丙沙星(15.8%、15.4%)、頭孢曲松(6.25%、15.3%)。526份標(biāo)本中A群輪狀病毒陽(yáng)性107份。結(jié)論2013年青島市兒童細(xì)菌性腹瀉的病原菌以沙門菌為主, 易感人群以2歲以下嬰幼兒為主；而金黃色葡萄球菌感染以1歲以下嬰兒為主；銅綠假單胞菌和白假絲酵母菌引起的腹瀉主要是由于長(zhǎng)期應(yīng)用廣譜抗生素使腸道菌群失調(diào)所導(dǎo)致；A群輪狀病毒是引起嬰幼兒秋冬季腹瀉的主要病原。應(yīng)規(guī)范臨床用藥, 加強(qiáng)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)。

兒童；感染性腹瀉；病原學(xué)；耐藥性；輪狀病毒

兒童感染性腹瀉是嬰幼兒時(shí)期的常見病, 主要是由于嬰幼兒時(shí)期消化系統(tǒng)發(fā)育還不完善, 并且機(jī)體的防御功能較差,該病對(duì)兒童的健康危害嚴(yán)重, 治療不及時(shí)或不恰當(dāng)可導(dǎo)致死亡, 故加強(qiáng)對(duì)其的防治具有重要意義。為明確青島市兒童感染性腹瀉的病原學(xué)分布特點(diǎn)及耐藥性情況, 本研究對(duì)2013年青島兒童醫(yī)院腸道門診就診的急性感染性腹瀉患兒糞便標(biāo)本的細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏結(jié)果進(jìn)行分析, 以期為臨床的預(yù)防治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 采集2013年1月～2013年12月本院腸道門診中糞便常規(guī)鏡檢顯示W(wǎng)BC≥10/HPF、RBC≥0/HPF, 臨床初步診斷為急性腹瀉病患兒的新鮮糞便標(biāo)本526份, 置Carry-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基, 立即做細(xì)菌培養(yǎng), 檢測(cè)沙門菌、志賀菌、致瀉性大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等；同時(shí)做快速A群輪狀病毒(RV)抗原檢測(cè)。

1.2試劑來源 菌株鑒定使用法國(guó)梅里埃API鑒定試條；沙門菌、志賀菌、致瀉性大腸桿菌診斷血清由寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司提供；藥敏紙片使用英國(guó)Oxoid公司產(chǎn)品, 藥敏培養(yǎng)基使用英國(guó)Oxoid生產(chǎn)的MH瓊脂；標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923作為質(zhì)控菌株,由衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心提供。A群RV抗原檢測(cè)試劑盒由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn) 細(xì)菌培養(yǎng)按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》操作。糞便標(biāo)本分別接種于血平板、麥康凱(MAC) 、SS平板(沙門菌和志賀菌瓊脂平板)、35℃培養(yǎng)18～24 h后觀察, 可疑菌落接種克氏雙糖鐵瓊脂(KIA), 35℃培養(yǎng)過夜后, 進(jìn)一步做血清分型鑒定。藥敏試驗(yàn)使用紙片擴(kuò)散法, 結(jié)果按臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)制訂的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。

1.4A群RV抗原檢測(cè) 采用免疫層析雙抗體夾心法(膠體金法)快速定性檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1病原菌檢出率及構(gòu)成 526份糞便培養(yǎng)標(biāo)本共檢出病原菌6種80株, 檢出率15.2%(80/526)。病原菌檢出率及構(gòu)成比見表1。

表180株腹瀉病原菌檢出率及構(gòu)成比

2.238株沙門菌陽(yáng)性檢出率 檢出非傷寒沙門菌O4群18株, 占沙門菌檢出總株數(shù)的47.3%；沙門菌O9群17株, 占44.7%；O7群、O8群、O12群各1株, 占2.6%。

2.38株志賀菌陽(yáng)性檢出率 檢出B群(福氏志賀菌)7株,鮑氏志賀菌1株。

2.4藥敏結(jié)果 沙門菌和志賀菌的藥敏結(jié)果見表2。

表2沙門菌和志賀菌的藥敏情況

2.5A群RV感染 在526份臨床初步診斷為感染性腹瀉病患兒的糞便標(biāo)本中, A群RV抗原檢測(cè)陽(yáng)性107份, 占20.3%。細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性者另有銅綠假單胞菌19株, 金黃色葡萄球菌4株, 白假絲酵母菌3株。

3 討論

小兒腹瀉是一組由多病原、多因素引起的, 以腹瀉為主要癥狀的疾病, 是嬰幼兒時(shí)期的常見病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道, 每年至少350萬(wàn)5歲以下兒童因腹瀉而死亡, 其中細(xì)菌性痢疾60萬(wàn)人［1］。本組調(diào)查中, 526份糞便標(biāo)本檢出病原菌6種80株,檢出率為15.2%(80/526)。其中80株病原菌中, 非傷寒沙門菌38株, 占總陽(yáng)性菌株的47.5%, 其中沙門菌O4群鼠傷寒沙門菌檢出率最高, 共18株, 占沙門菌的47.4%。O9群共檢出17株, 占沙門菌的44.7%, 另外還檢出O7、O8和O12群3株非傷寒沙門菌, 提示2013年青島市嬰幼兒細(xì)菌性腹瀉以沙門菌為主要病原菌, 其中以非傷寒沙門菌O4群鼠傷寒沙門菌為主要流行株。這一結(jié)果與近年來報(bào)道的非傷寒沙門菌的發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì), 引起人類沙門菌感染的菌種亦逐年增多一致［2］。鼠傷寒沙門菌引起的小兒腹瀉是小兒沙門菌感染中最常見者, 全年均有發(fā)生, 以6～9月發(fā)病率最高。絕大多數(shù)患兒為2歲以下的嬰幼兒, ＜1歲者占1/2～1/3, 自然疫源廣泛, 常由被污染的水, 牛奶和食物經(jīng)口感染。本研究中志賀菌檢出8株, 占總陽(yáng)性菌株的1.52%, 其中痢疾志賀菌未檢出, 福氏志賀菌檢出7株, 鮑氏志賀菌1株。本組調(diào)查提示2013年青島市細(xì)菌性腹瀉中沙門菌的感染占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),而由志賀菌感染引起的腹瀉較少見。福氏志賀菌共檢出7株,而鮑氏志賀菌只有1株, 這與國(guó)內(nèi)其他城市的報(bào)道不一致［3,4］。福氏志賀菌群侵襲力強(qiáng), 對(duì)抗生素易產(chǎn)生耐藥性, 流行菌型的不斷變遷是腹瀉病難以控制的原因之一, 菌型的變化趨勢(shì)及規(guī)律值得關(guān)注。

本研究顯示A群RV抗原檢測(cè)陽(yáng)性107份(107/526), A群輪狀病毒是秋冬季小兒腹瀉最常見的病原。本病多見于6～24個(gè)月的嬰幼兒, ＞4歲者少見, 起病急, 常伴有發(fā)熱和上呼吸道感染癥狀, 一般無(wú)明顯中毒癥狀?；純捍蟊愦螖?shù)增多,大便呈水樣或蛋花樣, 無(wú)腥臭味。與細(xì)菌性腹瀉癥狀明顯不同?？勺鳛榕R床鑒別診斷的依據(jù)。病毒致瀉和細(xì)菌致瀉的治療方案也有所不同, 因此查明病原尤為重要, 這同時(shí)也提示大便常規(guī)檢查已不能滿足病原學(xué)變遷趨勢(shì)的需求, 本院臨床上近幾年除明顯的水樣便和蛋花樣便外, 其余含水分較多的黏液便或膿血便標(biāo)本, 也已開始同時(shí)檢測(cè)A群RV抗原, 特別是在RV流行季節(jié)已將RV抗原作為常規(guī)檢查項(xiàng)目。

另外, 本研究中報(bào)道有銅綠假單胞菌19株, 金黃色葡萄球菌4株, 白假絲酵母菌3株。

此類患兒的腹瀉多是由于長(zhǎng)期應(yīng)用廣譜抗生素, 導(dǎo)致的腸道菌群失調(diào), 使腸道內(nèi)耐藥的金黃色葡萄球菌, 綠膿桿菌,變形桿菌以及白色念珠菌等大量繁殖引起腸炎。停用抗生素后可很快痊愈。

由于抗菌藥物的使用日益增多, 細(xì)菌耐藥已成為世界性問題, 對(duì)人體健康的威脅越來越嚴(yán)重。沙門菌是公認(rèn)的食源性疾病最常見的細(xì)菌, 食物是沙門菌的傳染源［5］。本組的藥敏結(jié)果表明, 志賀菌屬對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明的耐藥率較高, 對(duì)頭孢三代和亞胺培南, 哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率低。沙門菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、頭孢三代和喹諾酮類藥的耐藥率均明顯低于志賀菌屬, 這與國(guó)外報(bào)道相同［6］,對(duì)亞胺培南, 厄他培南和哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為0。目前認(rèn)為志賀菌與沙門菌的耐藥性主要是由耐藥質(zhì)粒所控制, 質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥性使耐藥菌株迅速擴(kuò)散蔓延［7］, 導(dǎo)致對(duì)其防治困難, 因此細(xì)菌的高耐藥率亟待解決。及時(shí)監(jiān)測(cè)病原菌、遏制盲目濫用抗生素、加強(qiáng)用藥的嚴(yán)謹(jǐn)性和科學(xué)性, 無(wú)疑是減少細(xì)菌多重耐藥的方法。

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Distribution characteristics of pathogens associated with infectious diarrhea in children from Qingdao district in 2012 and its sensitivity analysis

XUE Ai-guo, LI Hai-yan, SONG Dong, et al.
Department of Clinical Laboratory, Qingdao Women and Children Hospital, Qingdao 266012, China

ObjectiveTo investigate the distribution of pathogens causing infectious diarrhea in children from Qingdao district in 2013 and analyze epidemiological characteristics and corresponding drugsensitivity, in order to guide clinical prevention and treatment.MethodsPathogens were isolated and identified from fresh faeces of children preliminarily diagnosed with infectious diarrhea from January 2013 to December 2013.Drug-sensitivity testing was performed using paper disc diffusion method, and rotaviruses of A group were identified qualitatively with double antibody sandwich method to detect viral antigen.Results80 strains of pathogens belonging to six species were isolated from 526 samples of faeces with the detection rate of 15.2% (80／526), including 38 strains of Salmonella (47.5%), 8 strains of Shigella (10.0%), 8 strains of diarrheogenic Escherichia coli (10.0%), 4 strains of Staphylococcus aureus (5.0%), 19 strains of Pseudomonas aeruginosa (23.7%) and 3 strains of Candidid albicans (3.75%).7 strains of Shigella belonged to S.flexneri, 1 strain of Shigella belonged to S.boydii.Drug-sensitivity testing showed that for Salmonella and Shigella, the rates of drug resistance are as follows, to ampicillin, 60.5% and 87.5%, to SMZ-TMP, 21.1% and 37.5%, to Ciprofloxacin, 15.8% and 25%, to Ceftriaxone, 21.1% and 25%, respectively.A total of 107 samples were positive for rotavirus of group A.ConclusionThe main pathogens causing bacterial diarrhea in children from Qingdao distrinct in 2012 are Shigella, mainly infecting infants below two years old, while Staphylococcus aureus prefer to infect infants below one year old.And bacterial diarrhea caused by Pseudomonas aeruginosa and Candidid albicans are induced mostly by enteric dysbacteriosis owing to long-term use of broad-spectrum antibiotics.Rotavirus of group A is the most common pathogen causing diarrhea of infants in autumn and winter.Therefore, clinical usage of antibotics should be regulated towards standardization and drug resistance should be monitored regularly.

Children; Infectious diarrhea; Pathogens; Drug-resistance; Rotavirus

266012 青島市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科(薛愛國(guó) 丁偉),呼吸科( 李海燕), 中心注射室(宋冬)

丁偉