楊靜 陳茂邦

保健食品葛根素提取物中葛根素的含量測(cè)定

楊靜 陳茂邦

目的保健品葛根素軟膠囊產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜法(HPLC)測(cè)葛根素時(shí), 色譜圖基線寬度大、對(duì)照品理論塔板數(shù)低, 峰形差, 欲對(duì)其色譜條件進(jìn)行改進(jìn)。方法流動(dòng)相改為：甲醇-水 (25：75), 檢測(cè)改為250 nm; 流速、進(jìn)樣量不變。結(jié)果色譜圖基線寬度變小, 峰形好, 葛根素在4～50 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系, r=0.9999;平均回收率為99.8%, RSD為1.0%(n=5)。結(jié)論流動(dòng)相改變后的方法能更準(zhǔn)確測(cè)定其含量。

高效液相色譜法；葛根素

葛根素有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和腦血管、抗心率失常、改善微循環(huán)、抑制血小板凝集和降血糖等多方面的作用, 是處方中的主要活性成分, 故選擇葛根素含量作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。原標(biāo)準(zhǔn)參照有關(guān)文獻(xiàn), 建立HPLC測(cè)定本品中葛根素的含量, 但按該標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)方法進(jìn)行操作, 對(duì)照品和樣品的峰形較差, 出現(xiàn)叉峰, 對(duì)照品理論塔板較低等方面的問(wèn)題。為此作者對(duì)其流動(dòng)相進(jìn)行了改進(jìn), 認(rèn)為效果滿意, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與藥品

1.1實(shí)驗(yàn)儀器 電子分析天平(北京賽多利斯) , Agilent1200高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫),C18色譜柱(美國(guó)安捷倫)。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑與藥品 葛根素對(duì)照品(中檢所研究院, 批號(hào)：110752-201313),葛根素提取物軟膠囊(榮成百合生物技術(shù)有限公司),甲醇(色譜純), 其他試劑均為分析純, 水為超純水。

2 實(shí)驗(yàn)：葛根素軟膠囊中葛根素的含量測(cè)定

2.1.含量測(cè)定試驗(yàn)條件的選擇 按文獻(xiàn)［1］的試驗(yàn)方法進(jìn)行操作, 在該試驗(yàn)條件下, 對(duì)照品和樣品的峰形較差, 出現(xiàn)叉峰, 對(duì)照品理論塔板較低, 為不滿意結(jié)果, 為找出更好的試驗(yàn)條件, 作者參照文獻(xiàn)［2］的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn), 得到滿意的結(jié)果。文獻(xiàn)［1］的檢測(cè)波長(zhǎng)為247 nm, 流動(dòng)相為甲醇-水-36%乙酸(25:72:3), 柱溫25℃;柱子為安捷倫, 流速1.0 ml/min;文獻(xiàn)［2］的檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm, 流動(dòng)相為甲醇-水(25:75), 柱溫30℃, 柱子C18柱, 流速1.0 ml/min。

2.2對(duì)照品溶液的制備 取葛根素對(duì)照品0.0100 g, 分別加70%甲醇(A法)和30%乙醇(B法)溶解至10 ml容量瓶中,超聲萃取, 待溶解后用相應(yīng)的溶解定容, 均制成每1 毫升含葛根素0.1 mg的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3供試液制備 取軟膠囊10粒, 傾出內(nèi)容物, 混勻。精密稱取0.5 g, A法：加70%甲醇, 超聲提取20 min后定容至10 ml；B法：精密加入30%乙醇50 ml, 稱定重量, 回流30 min, 冷至室溫, 再稱定重量, 補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 再取2 ml, 加30%乙醇稀釋至50 ml, 即得。

2.4兩種方法測(cè)定結(jié)果 A法：按文獻(xiàn)［1］的色譜條件,對(duì)對(duì)照品和樣品進(jìn)行試驗(yàn), 結(jié)果對(duì)照品和供試品的峰形都較差。對(duì)照品理論塔板數(shù)較低, 方法不適用。B法：按文獻(xiàn)［2］的色譜條件對(duì)對(duì)照品和樣品進(jìn)行試驗(yàn), 結(jié)果, 該方法的出峰時(shí)間均在7 min左右, 葛根素能與其他成分很好地分開(kāi), 并且峰形較好, 故選擇B方法為該保健品的檢測(cè)方法。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍 分別吸取對(duì)照品溶液, 用30%乙醇稀釋并定容的濃度分別為4、10、20、30、40、50 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按上述色譜條件分別進(jìn)樣 10 μ, 以峰面積(A)為縱坐標(biāo)(Y), 進(jìn)樣量(μl)為橫坐標(biāo)(X)繪制工作曲線, 得回歸方程為Y=42.0138X+2.1010, r=0.9998, 線性范圍為4～50 μg/ml,葛根素在此范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。見(jiàn)圖1。

2.6方法學(xué)考察 精密度試驗(yàn):精密吸取葛根素對(duì)照品(10 μg/ml)溶液在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次, 每次進(jìn)樣10 μl,結(jié)果葛根素色譜峰峰面積RSD為0.17%(n=5), 表明:本實(shí)驗(yàn)精密度較好。穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取葛根素對(duì)照品溶液, 于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣, 進(jìn)樣量10 μl, 考察葛根素色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積在12 h內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果葛根素色譜峰峰面積的RSD為1.42%(n=6), 表明對(duì)照品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量同批樣品(批號(hào)：20130526) 5份, 每份0.2000 g, 加30%乙醇溶液定量稀釋成50 ml, 每份精密量取2 ml溶液和葛根素對(duì)照品溶液(200 μg)2 ml, 置同一50 ml容量配制, 用30%乙醇稀釋至刻度, 測(cè)定葛根素含量, 平均回收率為99.80%, RSD為1.0%(n=5)。

圖1 葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7供試品中葛根素含量測(cè)定 按上述色譜條件測(cè)定,以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試品中葛根素含量, 測(cè)定結(jié)果：含量為5.30%(g/100 g), RSD為0.79%。

3 討論

3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取葛根素對(duì)照品溶液, 按照紫外分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版(一部)附錄Ⅴ), 在200～300 nm范圍內(nèi)繪制紫外吸收光譜, 葛根素在250 nm處有最大吸收,結(jié)合藥典方法故選擇250 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2提取方法的確定 分別采取A法和B法進(jìn)行樣品的提取, A法用超聲方式提取,含量低, 峰形差, 采用B法用回流方式, 所得效果為滿意, 故選擇回流提取為供試品制備的條件。葛根提取物軟膠囊中葛根素的含量, 采用改變色譜條件后的HPLC進(jìn)行測(cè)定, 方法學(xué)研究表明, 方法精密度、重現(xiàn)性好, 分離度符合規(guī)定, 方法穩(wěn)定；同時(shí)經(jīng)對(duì)樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)的考察, 確定該含量測(cè)定方法具有可應(yīng)用性, 能夠更有效地控制改保健品的質(zhì)量。

［1］ 劉泰然, 趙珊, 張楠, 等.反相液相色譜法測(cè)定保健食品中葛根素.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005(2):147-148.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).北京：化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:313.

2014-06-25］

678400 云南德宏州食品藥品檢驗(yàn)所