高悉航，牟淑敏

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院2011級(jí)碩士研究生，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省中醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東 濟(jì)南 250011）

糖尿病下肢血管病變（vascular disease of lower extremities，VDLE）是2型糖尿?。═2DM）常見并發(fā)癥之一，?？稍斐芍藟木遥?］，有研究表明，ICAM-1及VCAM-1等粘附分子的過度表達(dá)與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展與有關(guān)［2］。我們以辛伐他汀及羅格列酮作為陽性對(duì)照藥物，觀察抵擋湯對(duì)DM大鼠一般狀況、血糖變化、下肢動(dòng)脈VCAM-1、ICAM-1表達(dá)的影響，探討防治T2DM血管病變的作用機(jī)制。

1 藥物與試劑

鏈脲佐菌素（STZ）為美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)，細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）（BA2189）購自武漢博士德公司，血管細(xì)胞間粘附分子1（VCAM-1）（SC-8304）購自Santa Cruz公司，馬來酸羅格列酮（文迪雅）為葛蘭素史克公司生產(chǎn)，辛伐他汀為杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)。抵擋湯（桃仁10g，水蛭10g，虻蟲10g，大黃6g）藥物購于山東中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，按傳統(tǒng)工藝制備水煎劑，減壓濃縮至濃度為1g/mL，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2 動(dòng)物及分組

健康Wistar大鼠100只，雄性，1月齡，質(zhì)量（100.36±2.28）g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK魯2005015）。隨機(jī)抽取20只作為正常對(duì)照組，其余80只作為糖尿病造模組，給予高脂飼料。實(shí)驗(yàn)12周后，糖尿病組大鼠尾靜脈注射小劑量鏈脲佐菌素（STZ）30mg/kg造模，72h后尾靜脈采血測(cè)血糖高于16.7mmol/L確定造模成功。除去造模未成功2只后隨機(jī)分為抵擋湯組19只、辛伐他汀組20只、羅格列酮組19只和模型對(duì)照組20只。

3 實(shí)驗(yàn)方法

藥物干預(yù)方法：抵擋湯組按照大鼠等效劑量予抵擋湯生藥2.30g/（kg·d）灌胃,辛伐他汀組和羅格列酮組分別按1.80mg/（kg·d）和0.36mg/（kg·d）給藥。動(dòng)物自由飲水，繼續(xù)原方法喂養(yǎng)至24周實(shí)驗(yàn)結(jié)束取血取材。

標(biāo)本獲取：實(shí)驗(yàn)于24周時(shí)結(jié)束，各組大鼠股動(dòng)脈放血，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆茫糜谏笜?biāo)測(cè)定。頸椎脫臼處死大鼠并解剖，取放血對(duì)側(cè)股動(dòng)脈，以4%多聚甲醛溶液固定，用于HE染色和免疫組化檢測(cè)。

觀察指標(biāo)：石蠟切片與免疫組化測(cè)定：將留取的股動(dòng)脈以4%多聚甲醛固定，洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、片厚5 um，SP法免疫組化染色，用計(jì)算機(jī)-圖像分析儀將免疫組化載玻片圖像通過圖像采集系統(tǒng)以40×物鏡輸入，采用Image-Pro Plus5.0對(duì)圖象中的陽性反應(yīng)部位進(jìn)行IOD分析。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSSl6.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析，數(shù)據(jù)用樣本均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用方差分析和Dunnet’s T3檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各組血糖比較見表1。

表1 各組大鼠血糖比較 （mmol/L ，）

表1 各組大鼠血糖比較 （mmol/L ，）

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.01；與模型對(duì)照組比較，△P<0.05。

組別 例數(shù) 血糖（mmol/l）第13周 第16周 第24周正常對(duì)照組 20 5.3±1.2 6.0±1.3 5.9±1.1模型對(duì)照組 20 27.9±3.6* 28.3±4.4* 27.7±3.1*抵擋湯組 19 27.3±6.6 25.4±8.3 26.1±8.3辛伐他汀組 20 28.0±2.7 27.3±6.6 26.1±7.3羅格列酮組 19 28.0±3.5* 15.0±3.6*△ 11.0±3.6*△

各組大鼠股動(dòng)脈免疫組化ICAM-1和VCAM-1檢測(cè)結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠股動(dòng)脈VCAM-1、ICAM-1免疫組化IOD值比較（）

表2 各組大鼠股動(dòng)脈VCAM-1、ICAM-1免疫組化IOD值比較（）

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.01；與模型對(duì)照組比較，△P<0.05。

組別 例數(shù) VCAM-1 ICAM-1正常對(duì)照組 20 73.0±5.2 105.5±11.6模型對(duì)照組 20 743.0±53.1* 935.3±58.2*抵擋湯組 19 647.0±47.8*△ 846.8±57.4*△辛伐他汀組 20 650.7±40.9*△ 798.5±48.3*△羅格列酮組 19 637.0±55.6*△ 759.2±51.5*△

5 討 論

VDLD病變特點(diǎn)主要是動(dòng)脈粥樣硬化和中膜鈣化［3］。隨著分子免疫學(xué)的研究進(jìn)展，越來越多的證據(jù)顯示動(dòng)脈粥樣硬化過程是一個(gè)慢性炎癥過程。有研究表明，高血糖可使NF-κB活化促進(jìn)許多炎癥基因（如粘附分子）的表達(dá)增加［4］。細(xì)胞粘附分子（cell adhesion molecule，CAM）是一類調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）間相互結(jié)合、起粘附作用的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白。其中血管細(xì)胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）和細(xì)胞間粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）是研究最多的與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的粘附分子。

糖尿病血管病變臨床常見，其病理基礎(chǔ)是糖尿病的糖脂代謝異常導(dǎo)致的動(dòng)脈粥樣硬化、中小動(dòng)脈硬化狹窄、缺血缺氧所致的微循環(huán)灌注障礙。本病屬中醫(yī)“脈痹”、“無脈證”等范疇。病機(jī)為瘀血阻絡(luò)。治療當(dāng)以活血通絡(luò)法為主。抵擋湯出自東漢張仲景《傷寒雜病論》，由大黃、桃仁、虻蟲、水蛭組成，具有活血通絡(luò)、逐瘀攻下功效。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈高度表達(dá)ICAM-1及VCAM-1，而抵擋湯可以明顯抑制血管ICAM-1及VCAM-1的表達(dá)，通過抑制血管ICAM- 1及VCAM-1的表達(dá)，發(fā)揮防治糖尿病性動(dòng)脈硬化的作用。

［1］Deshpande AD，Harris-Hayes M，Schootman M.Epidemiology of diabetes and diabetes-related complications［J］.Phys Ther，2008，88（11）：1254-1264.

［2］Hwang SJ，Ballantyne CM，Sharrett AR，et al.Circulating adhesion molecules VCAM-1，ICAM-1 and E-selectin in carotid atherosclerosis and incident coronary heart disease：The Atherosclerosis Risk In Communities （AR1C） study ［J］.Circulation，1997，96（12）：4219-4225.

［3］湯紹芳，衛(wèi)紅艷，張鵬.IL-6啟動(dòng)子基因多態(tài)性與2型糖尿病下肢血管病變的關(guān)系［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2010，5（13）：1531-1534.

［4］Fang L，Wei H Mark KH，et al.Marker of low-grade inflammation and soluble cell adhension molecules in Chinese patients with coronary artery disease ［J］.Cardiol，2004，20（14）：1433-1438.