劉平平 （山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局 262200）

敵百蟲定性檢測方法的比較

劉平平 （山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局 262200）

本試驗(yàn)通過對(duì)敵百蟲的定性檢測，觀察其性質(zhì)，將敵百蟲和敵百蟲的純?nèi)芤悍謩e稀釋50、100、200、500、1000倍采用圓形濾紙法、硅膠層析法對(duì)比的試驗(yàn)方法，比較出兩種方法的靈敏度，結(jié)果證明硅膠層析法靈敏度高于圓形濾紙法。

有機(jī)磷殺蟲藥(organophosphorous insecticides)對(duì)人畜的毒性主要是對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制，引起乙酰膽堿蓄積，使膽堿能神經(jīng)受到持續(xù)沖動(dòng)，導(dǎo)致先興奮后衰竭的一系列的毒蕈堿樣、煙堿樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等癥狀；嚴(yán)重患者可因昏迷和呼吸衰竭而死亡，有機(jī)磷殺蟲藥大都呈油狀或結(jié)晶狀，色澤由淡黃至棕色，稍有揮發(fā)性，且有蒜味。除敵百蟲外，一般難溶于水，不易溶于多種有機(jī)溶劑，在堿性條件下易分解失效。常用的劑型有乳劑、油劑和粉劑等。下面是對(duì)敵百蟲進(jìn)行的試驗(yàn)，觀察其性質(zhì)及其方法的靈敏度。

1 材料和方法

1.1 材料

中毒試驗(yàn)動(dòng)物兔子胃內(nèi)容物、敵百蟲藥品、硅膠、甲醇、乙醇、丙酮、苯、間苯二酚、氫氧化鈉、10個(gè)燒杯、1個(gè)玻璃棒、5個(gè)滴管、2個(gè)吹管、1盒濾紙、2個(gè)量筒、藥匙、電子天平、水浴鍋、活化箱、層析缸。

1.1.1 樣品采集 采取因飼喂添加有敵百蟲的飼料引起的中毒死亡兔子胃內(nèi)容物。

1.1.2 樣品處理 將胃內(nèi)容物放入密閉的試劑瓶中，加入95%的乙醇100ml，在水浴鍋中50～60℃水浸2h，過濾，濾液自然揮發(fā)干，將殘?jiān)帽交蚵确戮埔淮?，備用?/p>

1.1.3 檢液的配制 取敵百蟲純品0.5、0.25、0.125、0.05、0.025g溶解于25ml的蒸餾水配制成檢液I，稀釋后備用。采用稀釋50、100、200、500、1000倍的方法進(jìn)行檢測，為了精確的觀察和計(jì)算。同樣的方法取中毒兔子胃內(nèi)容物精制的殘?jiān)?.5、0.25、0.125、0.05、0.025g溶解于蒸餾水中配制成檢液II，備用。

1.2 方法

1.2.1 圓形濾紙法 （1）原理：敵百蟲水解后，產(chǎn)生的醛類物質(zhì)和間苯二酚反應(yīng)，生成粉紅色的化合物。（2）試劑1%間苯二酚酒精溶液、5%NaoH酒精溶液（3）操作方法：在定性濾紙中心滴加5%NaoH酒精溶液一滴，1%間苯二酚酒精溶液一滴，稍干，滴檢液I數(shù)滴，在烘箱中微微加熱片刻，若出現(xiàn)粉紅色，說明有敵百蟲的存在，此操作重復(fù)3次。同樣的方法來檢驗(yàn)檢液II，重復(fù)3次。

1.2.2 硅膠層析法 （1）原理：敵百蟲水解后，產(chǎn)生的醛類物質(zhì)和間苯二酚反應(yīng)，生成粉紅色的化合物。（2）試劑硅膠、甲醇、乙醇、丙酮。（3）硅膠板的制作：在燒杯中放入適量的水，加適量的硅膠使?jié)舛冗m中，倒在準(zhǔn)備好的玻片上，盡量的速度均勻使其平面整潔利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，放置幾分鐘使其成型然后小心的放入烤箱中溫度適中1～2h，充分的活化。（4）試驗(yàn)步驟及方法：將制作好的硅膠板放入層析缸中，層析缸中間橫一玻璃棒固定好，放入前硅膠板的靠邊緣的1cm的地方滴加檢液I，在盤子中添加配制的甲醇、乙醇、丙酮1:1:3的混合液使其飽和10min左右，然后將硅膠板靠在橫著的玻璃棒上，添加混合液靠近此邊緣，使其充分的擴(kuò)散，過數(shù)分鐘后拿出來用1%間苯二酚酒精溶液、5%NaoH酒精溶液噴加可以看到有粉紅色的顯示，此操作重復(fù)3次。同樣的方法檢驗(yàn)檢液II，重復(fù)3次。

2 試驗(yàn)結(jié)果

表1 敵百蟲純品不同濃度兩種檢測方法靈敏度比較(顯色情況)

表2 胃內(nèi)容物中兩種檢測方法靈敏度比較(顯色情況)

在試結(jié)果中檢液都有不同程度的顯色，高濃度的顯色較明顯，低濃度的顯色效果較差，同種條件下，2種試驗(yàn)方法的效果有很大的不同，硅膠層析法的效果好些。

3 討論

（1）在中毒兔子的胃內(nèi)容物的萃取后要注意除去內(nèi)容物中的色素，以免影響顏色的產(chǎn)生。敵百蟲為極性強(qiáng)的有機(jī)溶劑，必須用強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑浸提，比如甲醇、乙醇等。另外，萃取過程中試驗(yàn)要求必須在自然的條件下?lián)]干殘?jiān)?，溫度控制適中，萃取后要密封、低溫放入冰箱中保存，以備使用。（2）對(duì)于檢液II：圓形濾紙法和硅膠層析法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果明顯，在稀釋了50、100、200、500倍的情況下都出現(xiàn)了粉紅色的顯色帶，但是在稀釋了1000倍后沒有顯色。與此同時(shí)圓形濾紙法對(duì)于硅膠層析法來說顯色更加明顯，效果更好，更能體現(xiàn)試驗(yàn)的精確性，說明了硅膠層析法更適合此試驗(yàn)，精確度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)。（3）對(duì)于檢液I：采用的圓形濾紙法和硅膠層析法的試驗(yàn)結(jié)果中，在稀釋了50、100、200、500、1000倍的情況下都出現(xiàn)了粉紅色的顯色帶，說明了敵百蟲的濃度對(duì)于試驗(yàn)來說具有很重要的意義，濃度低的效果差，濃度高的效果明顯。與此同時(shí)圓形濾紙法和硅膠層析法后者的顯色效果的比前者明顯，說明硅膠層析法更精確，更能夠體現(xiàn)出試驗(yàn)的要求。（4）綜合比較圓形濾紙法和硅膠層析法各自的優(yōu)缺點(diǎn)：①圓形濾紙法方法簡單快捷，材料要求低，成本低，操作簡單易行，可以很快的掌握試驗(yàn)要領(lǐng)。②硅膠層析法方法復(fù)雜，從制作開始到使用花費(fèi)的時(shí)間較長，材料多，成本較高，在操作過程中技術(shù)含量高要求能夠熟練的掌握硅膠板的制作，而且硅膠板的板面要求光滑平整利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。③硅膠層析法比圓形濾紙法實(shí)驗(yàn)效果明顯，精確度高，準(zhǔn)確強(qiáng)度好。（5）綜合比較檢液I和檢液II：①在同稀釋濃度的、同樣的實(shí)驗(yàn)方法情況下，兩者的顯色效果不一樣，后者比前者的顯色明顯，效果更好。②同樣的稀釋濃度、不同的試驗(yàn)方法下效果也不一樣，后者還是比前者顯色明顯，效果更好。③說明了經(jīng)過動(dòng)物的消化和吸收敵百蟲的毒性有了明顯的下降，萃取過程中難免有雜質(zhì)的成分，使精確度下降，顯色效果降低。

4 小結(jié)

圓形濾紙法和硅膠層析法均可用于敵百蟲的定性檢測，但是在相同的條件下，硅膠層析法的靈敏度更高，準(zhǔn)確度也高。

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1007-1733(2014)10-0034-02

2014–07–11）