張繁榮，胡志輝，周世力，孫齊英，許國權(quán)，王兆霖

（江漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖北武漢430056）

CTP-5對食用菌種植基質(zhì)的消毒種植試驗

張繁榮，胡志輝，周世力，孫齊英，許國權(quán)，王兆霖

（江漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖北武漢430056）

試驗選取CTP-5和多菌靈兩種消毒劑，設(shè)計了0～20 000mg/L 7種濃度梯度組，對食用菌培養(yǎng)料進行處理后接種平菇菌種進行培養(yǎng)，通過觀察食用菌菌絲的生長情況以及雜菌的生長情況，以研究CTP-5消毒滅菌效果。結(jié)果表明：CTP-5和多菌靈兩種藥劑處理培養(yǎng)料都具有明顯的防污染效果，CTP-5和多菌靈的有效消毒滅菌濃度分別是10 000mg/L、8 000mg/L。但藥物處理組與高溫滅菌組對照比較，其菌絲生長較慢，CTP-5與多菌靈處理組比較，消毒效果和菌絲生長差異不明顯。CTP-5是無毒無殘留的新型消毒劑，可代替多菌靈在食用菌培養(yǎng)料中進行輔助消毒，防治污染。

食用菌；CTP-5；多菌靈；消毒滅菌；棉籽殼培養(yǎng)料

隨著食用菌種植的發(fā)展，人們對食用菌的質(zhì)量要求越來越高，更偏向于追求無公害的綠色食品。消毒劑要向高效、低毒、無公害方向發(fā)展。就目前來看，現(xiàn)在的消毒劑還存在很多不足之處。夏志蘭等［1］采用食用菌專用消毒劑與甲醛，對食用菌的幾種雜菌和病菌進行了室內(nèi)平板熏蒸測定和菇房消毒比較試驗。結(jié)果表明：專用消毒劑殺菌力比甲醛強，它對常見的食用菌雜菌和病菌具有很強的殺滅作用；使用量少，熏蒸時間短，滅菌效果高；試驗使用劑量2 g/m3，經(jīng)熏蒸半小時滅菌效果達100%；使用方便，無強烈的刺激異味，成本也比甲醛低。廣譜、高效、低毒及無交互抗性是發(fā)展新型消毒劑的必然趨勢，由于目前殺菌劑的品種作用機制比較單一，病原菌的繁殖速度較快，抗性也產(chǎn)生較快。因此，必須提高殺菌劑的合成和篩選效率［2］。為減少高效氧化性消毒劑毒副作用和抗藥菌出現(xiàn)，應(yīng)避免長期使用同一種消毒劑，而要以不同消毒劑搭配（或交叉）使用［3］。生物技術(shù)是當今發(fā)展最快的一種技術(shù)領(lǐng)域，生物農(nóng)藥的研究也正逐漸趨向成熟，這些因素使得生物農(nóng)藥的發(fā)展越來越迅速，其在農(nóng)藥中所占比重將會越來越大。人們在追求高效的同時，也開始研究環(huán)保、健康、綠色的消毒劑來取代化學(xué)試劑。在將來，生物消毒劑必將成為消毒劑中不可或缺的組成部分［4-6］。本研究通過一種新型環(huán)保型消毒劑CTP-5對食用菌種植基質(zhì)的消毒種植試驗觀察，來檢測這種消毒劑的消毒效果。試驗選用棉籽殼作為主要培養(yǎng)料，棉籽殼所含營養(yǎng)比較全面，吸水性強，透氣性好，便于發(fā)菌、出菇。探索一種綠色環(huán)保的新型食用菌培養(yǎng)料的化學(xué)消毒滅菌劑是發(fā)展食用菌產(chǎn)業(yè)的一種有益嘗試，為此我們試驗了CTP-5消毒劑對食用菌培養(yǎng)料的消毒滅菌效果。

1 材料與方法

1.1 材料

材料：棉籽殼、石灰、平菇菌種（蘇平，引自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)）、CTP-5（深圳三星實業(yè)有限公司）、多菌靈。

儀器：高溫蒸汽滅菌鍋、無菌操作臺、培養(yǎng)箱、電子天平。

食用菌培養(yǎng)料配方：棉籽殼500 g+石灰5 g。

CTP-5藥劑的制備：稱取20 g CTP-5，加入1 000m L蒸餾水攪拌均勻，配置成濃度20 000.0 mg/L藥劑，取500mL加蒸餾水至1 000m L，配置成濃度10 000.0mg/L藥劑，按此方法依次稀釋制備濃度為10.0、50.0、100.0、1 000.0mg/L藥劑。

多菌靈藥劑的制備：稱取8 g多菌靈加入1 000m L蒸餾水攪拌均勻，配置成8 g/L藥劑，用配置CTP-5的方法依次稀釋制備4、2 g/L多菌靈藥劑。

1.2 培養(yǎng)料的處理

培養(yǎng)料處理方法如表1所示，A1～A6為CTP-5處理組，B1～B3為多菌靈處理組，CK1為高溫滅菌空白對照組，CK2為空白對照組。平菇菌絲生長階段最適宜的培養(yǎng)料含水量為60%～65%，即料水比1：（1.2～1.4）（w/v）。將配置的藥劑分別與培養(yǎng)料混合拌料均勻，拌好后放置48 h，等消毒劑揮發(fā)后裝袋，將CK1處理組的培養(yǎng)料裝袋后放入高溫蒸汽滅菌鍋，常壓100℃滅菌8 h，將CK1處理組的培養(yǎng)料直接加自來水700m L，拌料均勻，拌好后放置48 h后裝袋。將各處理后裝袋的培養(yǎng)料在無菌操作室內(nèi)進行接種約10 g。將接種后的培養(yǎng)料放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，在25℃下培養(yǎng)。

表1 培養(yǎng)基的處理方法Tab.1 The differentm ethodsof dealing w ith the cu ltu rem ed ium

1.3 結(jié)果觀察與測定

每5 d定期觀察培養(yǎng)袋內(nèi)培養(yǎng)物的污染情況并作記錄，同時觀察菌絲生長細弱。每10 d測定菌絲的生長速度。測定菌絲生長速度具體方法是測定菌絲向培養(yǎng)袋底部移動生長的距離。每次測定時在菌絲生長的最前沿劃線。記錄菌絲長滿培養(yǎng)袋天數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)料不同處理方法的防雜效果與菌絲成長情況測定

不同處理組的雜菌污染情況如表2所示，其中CK1高溫滅菌組消毒滅菌徹底，至30 d時仍未生長雜菌，CK2為空白對照組，出現(xiàn)雜菌最早，第15天即開始出現(xiàn)雜菌，CTP-5的10～1 000mg/L處理組在25 d出現(xiàn)肉眼可見的雜菌，至培養(yǎng)第30 d時，低濃度處理組全部培養(yǎng)袋均出現(xiàn)了肉眼可見的雜菌，但A4處理組僅1袋出現(xiàn)雜菌，出現(xiàn)雜菌呈現(xiàn)處理濃度梯度差異，CTP-5濃度越高，出現(xiàn)雜菌的天數(shù)愈遲，雜菌的袋數(shù)越少。濃度為10 000 mg/L以上的A5和A6處理組至培養(yǎng)的第30 d還未出現(xiàn)雜菌。多菌靈濃度為2 000～4 000 mg/L的B1和B2處理組，也在第25 d出現(xiàn)了雜菌，多菌靈濃度為8 000mg/L的B3處理組至30 d仍未出現(xiàn)雜菌。從表2分析可以看出，CTP-5的有效消毒滅菌濃度為1 000～10 000mg/L之間，與多菌靈的消毒滅菌有效濃度8 000mg/L相當或略低。

表2 不同處理組的雜菌污染情況Tab.2 The living contam inants in the different treatm ent group

2.2 菌絲生長速度

不同處理后的培養(yǎng)料，接種平菇菌種，在20～25℃溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)3 d畫起始線，第13天畫第一次生長終止線，并測定生長距離，第23天畫第二次生長終止線，并測定生長距離，第33天畫第二次生長終止線并測量菌絲生長距離，各次所測得的生長距離按平行試驗作算術(shù)平均處理。記錄見表3。

各處理組的菌絲生長速度如表3所示，接種第10天（初期），各處理組菌絲10 d生長僅為2.3～2.8 cm，而高溫滅菌的對照組（CK1）則達到了5.1 cm，無論是CTP-5或多菌靈的處理都抑制了食用菌菌絲的生長，CTP-5處理組菌絲生長略慢于多菌靈處理組，藥物處理組菌絲生長略快于空白對照組CK2。接種第23天（中期），各處理組菌絲生長速度趨于緩慢，僅為1.1～2.3 cm，而空白對照CK2組菌絲生長速度不減，第17天則長滿了全袋，各藥物處理組以CTP-5濃度為1 000 mg/L的A4組的菌絲生長最好，達到了2.3 cm，但仍落后高溫滅菌的對照組CK1對照組，藥物處理組菌絲生長略快于空白對照組CK2。接種第33天（后期），未經(jīng)藥物和高溫處理的空白組CK2和CTP-5的A1、A2以及多菌靈的B3處理組的菌絲生長完全停止，A4組菌絲仍以2.1cm/10 d的速度緩慢生長。A5、A6、B1、B2則生長更緩慢。因此無論是CTP-5或多菌靈的處理都抑制了食用菌菌絲的生長，CTP-5處理組菌絲生長略慢于多菌靈處理組，藥物處理組菌絲生長略快于空白對照組CK2。

表3 菌絲生長速度Tab.3 The different grow th rate ofm ycelium /cm

2.3 不同處理組培養(yǎng)料菌絲滿袋的時間

不同處理后的培養(yǎng)料，接種平菇菌種，在20～25℃溫度下培養(yǎng)，觀測菌絲生長情況（能否長滿袋，長滿袋所需時間），結(jié)果見表4。

表4 各處理組菌絲滿袋的時間Tab.4 Daysofm ushroom m ycelium grow th to whole bag/d

各處理組菌絲滿袋的時間見表4，高溫蒸汽滅菌的空白對照組在第17天就長滿了全袋。而空白對照組和各藥物處理組至第33天時還仍未長滿全袋，但至第33天時，CK2、A1、A2及B3等處理組停止生長，A4、A5、A6、B1、B2仍在緩慢生長。

3 討論

CTP-5和多菌靈兩種藥劑處理培養(yǎng)料都具有明顯的防污染效果，CTP-5濃度為0～100 mg/L的處理組，各培養(yǎng)袋均出現(xiàn)雜菌，CTP-5濃度達到1 000mg/L時，只在菌袋底部出現(xiàn)很少的雜菌，濃度達到10 000mg/L以上的處理組，肉眼不能分辨雜菌生長。平菇的菌絲在所有的處理組培養(yǎng)料中均能生長，但其菌絲生長與高壓高溫滅菌對照組比較，菌絲細弱，生長速度緩慢。CTP-5 10.0、50.0、100.0mg/L處理組菌絲生長初期生長較濃密，生長速度較快，但到23 d生長極為緩慢，至33 d CTP-5 10.0、50.0mg/L處理組菌絲完全停止生長。CTP-5 1 000.0 mg/L處理組，菌絲生長在所有處理組中速度最快，但比高溫蒸汽組慢。以CTP-5 10 000.0～20 000 mg/L處理組菌絲較快，但不及CTP-5 1 000.0mg/L處理組。多菌靈2 g/L處理組，菌絲生長速度較快，但出現(xiàn)了肉眼可見的雜菌，多菌靈4 g/L處理組菌絲生長比多菌靈2 g/L處理組稍慢，但沒有出現(xiàn)肉眼可見的雜菌，多菌靈4 g/L處理組雖然沒有出現(xiàn)肉眼可見的雜菌，但菌絲生長最慢，且后期停止生長。綜上所述，CTP-5和多菌靈都有一定的消毒效果，但不能單獨用于食用菌培養(yǎng)料的消毒滅菌，只能作為培養(yǎng)料消毒滅菌的輔助性藥物。

CTP-5與多菌靈的消毒滅菌效果相差沒有明顯的區(qū)別，與考慮到CTP-5是一種新型的綠色環(huán)保消毒劑，在消毒滅菌過程中，只產(chǎn)生氧氣、二氧化碳和水，無污染，無殘留，相比農(nóng)藥多菌靈防霉劑有諸多優(yōu)點，CTP-5是替代多菌靈的消毒藥劑。CTP-5雖然不能對食用菌培養(yǎng)料進行徹底滅菌，但從藥物消毒試驗和本次的培養(yǎng)料種值試驗來看，均顯示了較好的消毒效果，可作為消毒劑在食用菌培養(yǎng)料進行輔助消毒滅菌。

［1］夏志蘭，姜性堅，劉明月，等.食用菌專用消毒劑對雜茵殺傷力的測定［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報：農(nóng)學(xué)版，2003，23（3）：18-20.

［2］古一雯，李臨生，羅琥捷.消毒劑研究新發(fā)展［J］.中國消毒學(xué)雜志，2008，25（1）：72.

［3］陸婉英，黃青山，勵俊.生物消毒劑研究發(fā)展[J].中國消毒學(xué)雜志,2003，20(3):231.

［4］康占海，蒲麗，吳學(xué)民.新型殺菌劑的應(yīng)用現(xiàn)狀及發(fā)展展望［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2005，33（增刊）：233-236.

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［6］RICHARD J.Formulating new options［J］.American FruitGrower，2000，120（5）：11-14.

Planting Experim ents of CTP-5 Disinfection to M ushroom G row ing Substrate

ZHANG Fan-rong，HU Zhi-hui，ZHOU Shi-li，SUN Qi-ying，XUGuo-quan，WANG Zhao-lin
（Schoolof Life Science，Jianghan University，Wuhan 43056，Hubei，China）

Chooses two disinfectant，CTP-5 and carbendazim designs seven concentration gra?dient between 0～20 000 mg/L，after mushroom culture material handling，Inoculatesmush-room strains and cultures.Researches the sterilizing effect of CTP-5 by observing the growth of mush-room mycelium and the growth ofbacteria.The results show thatCTP-5 and carbendazim both have obvious disinfection effect tomushroom culturematerial，the valid disinfection concentration of CTP-5 and carbendazim are respectively 10 000mg/L and 8 000mg/L.compared with high temper?ature sterilization group，the growth ofmushroom mycelium is slower in medicone group.Compared with carbendazim group，the difference of disinfection effect and mycelium growth is not obvious in CTP-5 group.CTP-5 is a kind of new disinfectantwhich is innoxious and noresidue，can substitute for carbendazim to complementary disinfection and pollution prevention inmushroom culturemateri?al.

mushroom；CTP-5；carbendazim；disinfection；cotton seed hulls culturemedium

S646

A

1673-0143（2014）01-0068-04

（責任編輯：陳曠）

2013-12-23

武漢市科學(xué)計劃項目（201220837304-2）

張繁榮（1963—），男，副教授，研究方向：生物學(xué)。