張 棟 李云崗 蘭鄒然 胡麗萍 馬慧玲 楚遵鋒（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250022）

規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟免疫效果評(píng)估及綜合防治措施

張 棟 李云崗 蘭鄒然 胡麗萍 馬慧玲 楚遵鋒（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250022）

為摸清部分規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)的健康情況和豬瘟抗體水平，利用IDEXX公司的豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)2014年1～6月份山東省8個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)2580份免疫血清進(jìn)行了抗體水平檢測(cè)，結(jié)果顯示抗體陽(yáng)性率為39.2%～94.7%不等，說(shuō)明所監(jiān)測(cè)的山東部分地區(qū)豬瘟免疫水平參差不齊，部分豬場(chǎng)免疫效果較差，未達(dá)到良好的保護(hù)率。結(jié)合豬瘟免疫效果評(píng)估結(jié)果，探討豬瘟綜合防治措施。

規(guī)?；i場(chǎng) 豬瘟 抗體 防治措施

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種急性或慢性、熱性和高度接觸性傳染病，臨床主要以高熱稽留、皮膚和黏膜出現(xiàn)大量出血點(diǎn)為特征[1]，是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病，且是我國(guó)中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病控制規(guī)劃中計(jì)劃要消滅的重大動(dòng)物疫病之一[2]，該病流行廣泛，發(fā)病率和死亡率高。但是隨著我國(guó)強(qiáng)制免疫政策的持續(xù)推進(jìn)，近年來(lái)，豬瘟在我國(guó)的流行規(guī)律已經(jīng)發(fā)生了較大變化，由過(guò)去的大規(guī)模流行逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)規(guī)律性的散發(fā)和小規(guī)模的地方性流行，且持續(xù)性感染病例報(bào)道較常見(jiàn)。

豬瘟抗體水平的高低直接反映了豬群免疫接種效果，同時(shí)也反映出豬群免疫系統(tǒng)的健康程度以及飼養(yǎng)管理情況，是豬群抵抗豬瘟病毒入侵的關(guān)鍵因素。而目前豬瘟危害又嚴(yán)重制約著規(guī)?；i場(chǎng)的發(fā)展，因此豬瘟免疫效果評(píng)估在規(guī)?；i場(chǎng)的應(yīng)用具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清 2014年1月～6月來(lái)自山東省不同地區(qū)8個(gè)豬場(chǎng)的共2580份血清，這些豬群臨床上均表現(xiàn)正常，無(wú)明顯發(fā)病癥狀。

1.1.2 試劑 豬瘟抗體檢測(cè)ELISA試劑盒，購(gòu)自IDEXX公司。

1.2 方法

1.2.1 豬瘟抗體的檢測(cè) 在使用前，所有的試劑盒組分都必須平衡到室溫(18～25℃)。試劑應(yīng)通過(guò)輕輕漩渦，旋轉(zhuǎn)混合均勻。（1）分別將50μl樣品稀釋液加入每個(gè)檢測(cè)孔和對(duì)照孔中。（2）分別將50μl的陽(yáng)性對(duì)照加入到相應(yīng)的對(duì)照孔中，注意不同對(duì)照的吸頭需要更換。（3）分別將50μl的被檢樣品加入到剩下的檢測(cè)孔中，注意每個(gè)樣本都使用不同吸頭。（4）輕彈微量反應(yīng)板或用振蕩器震蕩，將反應(yīng)板中的溶液混勻。（5）在室溫下(18～25℃)孵育2h或過(guò)夜孵育12～18h。無(wú)論選擇哪種孵育方式，都要將微量反應(yīng)板用封條封閉或于濕箱中室溫孵育，避免液體揮發(fā)。（6）用300μl左右的洗滌液洗滌每個(gè)板孔3次。在每1次洗滌后，甩去每個(gè)板孔中的液體，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液體。在加入下一個(gè)試劑前，避免孔壁變干。（7）加入100μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記(HRPO)的抗豬瘟病毒的酶標(biāo)抗體(即取即用)加入反應(yīng)孔中，用封條封閉或濕盒中室溫下孵育30min。（8）重復(fù)步驟6。（9）每個(gè)反應(yīng)空中加入100μl的底物溶液到反應(yīng)孔中，并于避光、室溫條件下放置10min。加完第一孔后即可計(jì)時(shí)。（10）在每個(gè)反應(yīng)孔中加入100μl的終止液終止反應(yīng)。加終止液的順序同步驟9，與底物的加入順序相同。（11）在450nm處測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光度值，也可用雙波長(zhǎng)(450nm和650nm)測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光度值，空氣調(diào)零。

1.2.2 計(jì)算與判斷 計(jì)算樣本和對(duì)照的平均吸光度值(計(jì)算方法如下）。陰性對(duì)照平均值：NCX=(NC1 A450+NC2 A450)/2；陽(yáng)性對(duì)照平均值：PCX=(PC1 A450 +PC2 A450)/2；樣本的計(jì)算：Blocking%=(NCX-sample A450)/ NCX×100%。只有陰性對(duì)照的平均OD450大于0.500，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率大于50%，該檢測(cè)結(jié)果才能有效。若實(shí)驗(yàn)不成立，有可能是實(shí)驗(yàn)操作失誤造成，應(yīng)重讀說(shuō)明書(shū)，再操作一次。如果被檢樣品的阻斷率大于或等于40%，該樣品可判為陽(yáng)性(有CSFV抗體存在)；如果被檢樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本可判為陰性(無(wú)CSFV抗體存在)；如果被檢樣本的阻斷率在30%～40%之間，該樣本可判為可疑，應(yīng)在數(shù)日后再對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行重測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

8個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果和2014年1～6月份每月所檢測(cè)的豬瘟抗體結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

2.2 分析

從表1、表2可以看出，山東省不同地區(qū)的8個(gè)免疫豬場(chǎng)中在豬瘟弱毒苗免疫之后的抗體水平參差不齊，其中抗體陽(yáng)性率最高的為94.7%，最低的僅為39.2%；同時(shí)，從每個(gè)月份所檢測(cè)的豬瘟抗體結(jié)果來(lái)看，陽(yáng)性率最高的為80.5%，最低的為50.1%，說(shuō)明山東地區(qū)豬瘟免疫抗體水平不一致，部分免疫豬群免疫效果較差，豬群存在免疫失敗現(xiàn)象，需要引起重視，做好豬場(chǎng)豬瘟免疫程序的調(diào)整和豬瘟疫苗的補(bǔ)免工作。

表1 8個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 2014年1～6月份每月所檢豬瘟抗體結(jié)果

通過(guò)本次豬瘟監(jiān)測(cè)，可以看出山東部分地區(qū)豬群豬瘟免疫狀況參差不齊，部分豬場(chǎng)豬瘟免疫水平較低，存在豬瘟免疫失敗現(xiàn)象，因此，豬瘟仍然是當(dāng)前需要重點(diǎn)防范的豬傳染病，加強(qiáng)種豬場(chǎng)監(jiān)管和監(jiān)測(cè)力度[3]尤為重要，在種豬調(diào)運(yùn)時(shí)應(yīng)重視豬瘟的檢疫監(jiān)測(cè)，防止豬瘟帶毒豬和免疫水平低下的豬只外調(diào)，有效控制豬瘟病毒的傳播和豬瘟疫情的發(fā)生，養(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)對(duì)豬瘟免疫效果定期進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)免疫抗體的實(shí)際水平，確定免疫時(shí)間，以實(shí)現(xiàn)科學(xué)免疫[4]。

3 綜合防治措施

3.1 加強(qiáng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理

豬場(chǎng)管理要盡量做到科學(xué)化、規(guī)范化，及時(shí)清糞，搞好豬舍環(huán)境衛(wèi)生，定期消毒，最大限度地減少病原微生物對(duì)豬場(chǎng)的污染，防止疫病的擴(kuò)大傳播。同時(shí)應(yīng)降低各種應(yīng)激因素對(duì)豬群的影響，以避免應(yīng)激給豬瘟的發(fā)生帶來(lái)有利條件。

3.2 實(shí)行“全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)制度

豬場(chǎng)要堅(jiān)持采用“自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出”的原則，同時(shí)要避免不同日齡和不同生長(zhǎng)階段的豬只混群飼養(yǎng)，以減少交叉感染和持續(xù)性感染的發(fā)生[5]。

3.3 做好免疫程序，加強(qiáng)疫病監(jiān)測(cè)

制定科學(xué)、合理的免疫程序，是豬場(chǎng)預(yù)防疾病最基本也是最重要的手段。同時(shí)要加強(qiáng)對(duì)豬瘟抗原抗體的監(jiān)測(cè)，以了解豬瘟群體的免疫水平高低和抗體水平的整齊度，進(jìn)而評(píng)估疫苗的免疫效果和輔助診斷。檢出CSFV陽(yáng)性豬(帶豬瘟病毒豬)，應(yīng)立即淘汰，清圈消毒，最大限度地降低環(huán)境中的豬瘟病毒對(duì)豬群的潛在威脅。

3.4 保健預(yù)防性投藥

有選擇性地使用對(duì)免疫有促進(jìn)作用的藥物或添加劑(黃芪多糖粉劑、荊防敗毒散等)，提高豬群的非特異性抗病力。

3.5 豬場(chǎng)疫病凈化

加強(qiáng)以種公、母豬及后備種豬為主的凈化措施，及時(shí)淘汰帶毒種豬，鏟除持續(xù)感染的根源，建立健康種群，繁育健康后代[6]。

3.6 疾病要早發(fā)現(xiàn)，早防治

加強(qiáng)對(duì)其他疫病的協(xié)同防制，如確診有其他疫病存在，則還需同時(shí)采取其他疫病的綜合防制措施。

3.7 建立健全生物安全體系

建立獸醫(yī)衛(wèi)生防疫與消毒制度，嚴(yán)格控制傳染源，病死豬及產(chǎn)出的死胎、胎衣等，應(yīng)深埋做無(wú)害化處理[7]。

[1] 陳溥言, 王川慶. 獸醫(yī)傳染病學(xué)(第5版)[M]. 北京∶ 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2006∶ 210-216.

[2] Barbara E. straw. 豬病學(xué)(第9版)[M]. 趙德明等, 譯. 北京∶ 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社, 2008∶ 325-331.

[3] 謝移權(quán), 李進(jìn)鋒. 規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體水平監(jiān)測(cè)的應(yīng)用[J]. 中國(guó)畜禽種業(yè)[J]. 2011(4)∶ 21-22.

[4] 蘇晨, 李香, 趙仙苗等. 陜西省重大動(dòng)物疫病秋防免疫抗體的檢測(cè)與分析[J]. 畜禽業(yè). 2011(4)∶ 24-25.

[5] 萬(wàn)遂如. 對(duì)豬瘟危害的再認(rèn)識(shí)與防控對(duì)策[J]. 養(yǎng)豬. 2008(1)∶ 41-44.

[6] 張宗軍, 楊瑛, 孫偉. 慢型及非典型豬瘟污染豬場(chǎng)的凈化方法[J].畜牧與獸醫(yī), 2003(3)∶ 30-31.

[7] 侯明權(quán). 完善防治措施, 有效控制豬瘟[J]. 生豬產(chǎn)銷信息. 2011(2)∶58.

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