王娜，商志偉，趙敏

(1.東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江民族職業(yè)學(xué)院 a.學(xué)生工作處；b.食品工程系，黑龍江 哈爾濱 150066)

混合益生菌對(duì)仔豬生長(zhǎng)及腸道菌群的影響

王娜1,2a，商志偉2b，趙敏1*

(1.東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江民族職業(yè)學(xué)院 a.學(xué)生工作處；b.食品工程系，黑龍江 哈爾濱 150066)

選用50頭體重相近的三元雜交斷奶健康仔豬，隨機(jī)分為5組：對(duì)照組全程飼喂玉米?豆粕型基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)1、2、3、4組在試驗(yàn)第1天到第28天分別飼喂基礎(chǔ)日糧+蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌(質(zhì)量比為1∶1∶1、1∶2∶1、2∶1∶2、1∶1∶2)的混合益生菌制劑，在第29天到第42天飼喂基礎(chǔ)日糧。飼喂28 d后計(jì)算各組仔豬日增重、料重比、腹瀉率。結(jié)果表明：4個(gè)試驗(yàn)組仔豬的日增重均高于對(duì)照組，料重比均低于對(duì)照組，腹瀉率均顯著低于對(duì)照組；試驗(yàn)1、3組仔豬的日增重顯著高于對(duì)照組，且試驗(yàn)1組仔豬的日增重又稍高于試驗(yàn)3組；試驗(yàn)1、3組仔豬的料重比顯著低于對(duì)照組，而試驗(yàn)1組仔豬的料重比又稍低于試驗(yàn)3組；試驗(yàn)1組和3組仔豬的腹瀉率相同，且低于試驗(yàn)2組和4組，表明4種比例混合的益生菌制劑均能促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，且以質(zhì)量比1∶1∶1、2∶1∶2混合的益生菌制劑促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)的效果較好；對(duì)試驗(yàn)1組和對(duì)照組仔豬在試驗(yàn)0、7、14、21、28、42 d腸道內(nèi)菌群的定量PCR結(jié)果表明，試驗(yàn)1組仔豬腸道內(nèi)蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌數(shù)量在飼喂益生菌制劑期間呈現(xiàn)一致的變化趨勢(shì)，即先上升后下降，再上升，而對(duì)照組3種菌的變化趨勢(shì)不一致；在停喂益生菌制劑2周后，3種益生菌仍呈規(guī)律變化，表明飼喂益生菌制劑能夠調(diào)節(jié)仔豬腸道相應(yīng)菌群的生長(zhǎng)；對(duì)仔豬腸道糞樣菌群的 16SrDNA的特異序列的進(jìn)行變性梯度凝膠電泳及摳膠測(cè)序的結(jié)果表明，仔豬在飼喂益生菌制劑7 d后，腸道蠟樣芽孢桿菌、腸球菌、鏈球菌、雙歧桿菌、戊糖乳桿菌、大腸桿菌、鼠李糖乳桿菌菌群數(shù)量均下降，到第 28天時(shí)，各種菌群數(shù)量均上升，表明飼喂益生菌制劑不僅能調(diào)節(jié)仔豬腸道相應(yīng)益生菌的生長(zhǎng)，還能調(diào)節(jié)腸道腸球菌、鏈球菌、大腸桿菌與雙歧桿菌的生長(zhǎng)。

仔豬；微生態(tài)制劑；變性梯度凝膠電泳(DGGE)；腸道菌群

微生態(tài)制劑是一種綠色、無公害的添加劑[1]。合理利用微生態(tài)制劑，可以有效減少仔豬斷奶應(yīng)激的發(fā)生，預(yù)防和治療仔豬腹瀉[2]。

仔豬飼喂微生態(tài)制劑后，制劑中的益生菌可有效定植在仔豬腸道內(nèi)[3]，調(diào)節(jié)腸道菌群，增加有益細(xì)菌的數(shù)量[4]。含多種益生菌的混合菌制劑有益于微生物的互補(bǔ)[5–6]。本研究將蠟樣芽孢桿菌、戊糖乳桿菌和鼠李糖乳桿菌以不同比例配伍，制成益生菌制劑添加到飼料中，飼喂斷奶仔豬，以探討不同比例混合的3種益生菌對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能和腸道菌群的影響，旨在為菌種的合理搭配和復(fù)合微生物制劑的生產(chǎn)應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試豬

選用 28日齡，未接受疫苗免疫接種，初始體重為(9.60±0.42) kg的“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交健康斷奶仔豬50頭。

1.1.2 菌 種

蠟樣芽孢桿菌由東北林業(yè)大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室從健康斷奶仔豬糞便中分離并鑒定；鼠李糖乳桿菌(CICC 6159)、戊糖乳桿菌(CICC 21809)購(gòu)置于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。

1.1.3 培養(yǎng)基

戊糖乳桿菌培養(yǎng)基配方為1%乳糖+1%廢糖蜜+ 0.5%棉粕粉+0.3%磷酸二氫鈉+0.3%磷酸氫二鈉；蠟樣芽孢桿菌培養(yǎng)基配方為 0.5%蔗糖+0.5%廢糖蜜+ 1%棉粕粉+0.3%氯化鈉；鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)基配方為1%乳糖+1%廢糖蜜+0.5%棉粕粉+0.3%磷酸二氫鈉+0.3%磷酸氫二鈉。

1.1.4 飼 料

基礎(chǔ)日糧為玉米–豆粕型粉料，營(yíng)養(yǎng)需要參照英瑞斯企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[7]設(shè)計(jì)。

1.2 方 法

1.2.1 益生菌制劑的制備

分別發(fā)酵戊糖乳桿菌[8]、蠟樣芽孢桿菌[9]、鼠李糖乳桿菌[10]，8 000 g離心10 min，得菌泥。向菌泥中加入5%葡萄糖溶液作為保護(hù)劑，再拌入約3倍菌泥體積的滅菌干燥稻殼粉，10 ℃干燥，得活菌制劑。檢測(cè)3種活菌制劑活菌數(shù)(戊糖乳桿菌、蠟樣芽胞桿菌、鼠李糖乳桿菌的活菌數(shù)分別為2.6×108、1.4×109、3.5×108CFU/g)后備用。將制備好的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌制劑分別以質(zhì)量比為1∶1∶1、1∶2∶1、2∶1∶2、1∶1∶2的比例混合，即得4種混合益生菌制劑。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于大慶市泰康縣康泰公司種豬場(chǎng)進(jìn)行。50頭仔豬隨機(jī)分為5組，每組10頭。對(duì)照組喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1、2、3、4組分別喂基礎(chǔ)日糧+1∶1∶1、1∶2∶1、2∶1∶2、1∶1∶2比例混合的益生菌制劑。試驗(yàn)組喂食益生菌制劑 28 d后改喂基礎(chǔ)日糧14 d。飼喂時(shí)間為每天08:00、13:00、19:00。自由飲水。每次飼喂直至料槽無剩余飼料為止。所有供

試豬均于相同條件的畜舍飼養(yǎng)。室內(nèi)通風(fēng)良好，光線充足，并定期對(duì)畜舍消毒滅菌。

1.2.3 試驗(yàn)記錄及樣品采集

試驗(yàn)期間，每日對(duì)仔豬逐只進(jìn)行空腹稱重，詳細(xì)記錄各組采食量。每日08:00定時(shí)觀察記錄各組仔豬腹瀉情況。計(jì)算各組仔豬的日增重、日采食量、料重比和腹瀉率[7]。分別于第0(飼喂益生菌制劑當(dāng)日空腹取樣)、7、14、21、28、42(停喂益生菌制劑14 d)天取各組仔豬的糞便樣品(約10 g)，置于–80 ℃冰箱保存，備用。

1.2.4 糞便DNA樣品的制備

第0天糞便樣品DNA的制備：從試驗(yàn)組(生長(zhǎng)性能最佳的試驗(yàn)組)和對(duì)照組每只仔豬糞便樣品中各取2 g，按組將糞便樣品充分混合后，各組取2 g混合糞樣，分別放入組織粉碎機(jī)中磨碎，分別加入8 mL無菌磷酸緩沖液稀釋，充分混勻后取200 μL勻漿，用QIAamp DNA試劑盒(Qiagen)逐一提取樣品基因組DNA。第7、14、21、28、42天糞便樣品DNA的制備方法同上。

1.2.5 定量PCR檢測(cè)

1) 引物。根據(jù)GenBank中蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌、戊糖乳桿菌菌株的16SrDNA 序列，利用NDAman軟件比對(duì)出種內(nèi)保守區(qū)域，用Primer 5設(shè)計(jì)特異性引物(表1)。

表1 蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌特異性引物Table 1 Primers for detecting B acillus cereus, Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus pentosus

2) 蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌的定量 PCR檢測(cè)。利用 PCR檢測(cè)系統(tǒng)(Bio–Rad, CFX96 Touch)進(jìn)行定量分析。分別取200 μL蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌培養(yǎng)液，進(jìn)行l(wèi)0倍系列稀釋(濃度范圍107～102CFU/μL)，以稀釋的菌為模板，根據(jù)定量試劑盒(SYBR Premix Ex Taq? II，TAKARA)說明書進(jìn)行定量PCR，反應(yīng)體系為50 μL：SYBR Premix Ex Taq II 25 μL，0.2 mmol/L上、下游引物(F1和R1、F2和R2或F3和R3) 各1 μL，模板1 μL，ROX Reference Dye(50×) 1 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性40 s，61 ℃退火25 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)。制定3種菌定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得循環(huán)閾值(Ct)對(duì)菌液濃度的對(duì)數(shù)方程。

對(duì)糞便DNA樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，反應(yīng)體系與反應(yīng)條件同上。將檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線在同一系統(tǒng)中進(jìn)行分析，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線的Ct值進(jìn)行比較，得到糞便樣品中3種益生菌的數(shù)量。

1.2.6 變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析

1) PCR反應(yīng)。用細(xì)菌16S rDNA的V6–V8 區(qū)特異引物F933–954(5′–CGCCCGCCGCGCGCGGC GGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGGCACAAG CGGTGGAGCATGTGG–3′)和 R1369–1388(5′–GC CCGGGAACGTATTCACCG–3′)[11]對(duì)糞便DNA樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增細(xì)菌的特異性片段。

2) DGGE。以上PCR產(chǎn)物用DGGE 進(jìn)行分析。DGGE用8%聚丙烯酰胺凝膠，尿素濃度梯度30%～50%，電泳緩沖液為0.5×TAE，先200 V恒壓預(yù)電泳10 min，隨后在85 V電壓電泳10～12 h。電泳結(jié)束后，用銀染法進(jìn)行染色。顯色定影后干燥過夜，觀察染色效果并照相。

3) 特殊條帶的序列測(cè)定和分析。將DGGE凝膠圖譜上的特殊條帶進(jìn)行回收，用引物8f 和 1510r[12]擴(kuò)增回收產(chǎn)物中細(xì)菌16S rDNA的全序列，然后將PCR產(chǎn)物進(jìn)行膠回收，與pMD–18T載體(TAKARA)連接，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)中。將轉(zhuǎn)化成功的質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序，用GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)獲得的序列進(jìn)行同源性比較。

1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種混合益生菌制劑對(duì)仔豬日增重、料重比及腹瀉率的影響

由表2可知，4個(gè)試驗(yàn)組仔豬的日增重均高于對(duì)照組，且試驗(yàn)1組和3組的日增重顯著高于對(duì)照組；4個(gè)試驗(yàn)組仔豬的料重比均低于對(duì)照組，且試驗(yàn)1組和3組的料重比顯著低于對(duì)照組；4個(gè)試驗(yàn)組仔豬的腹瀉率均顯著低于對(duì)照組，且試驗(yàn)1組和3組仔豬的腹瀉率低于試驗(yàn)2組和4組。與對(duì)照組仔豬相比，試驗(yàn)1組仔豬的日增重提高了18.42%，料重比降低了15%，腹瀉率降低了50%(P ＜0.05)；試驗(yàn)2組仔豬日增重提高了7.89%，料重比降低了8.5%，腹瀉率降低了42.86%(P＜0.05)；試驗(yàn)3組仔豬日增重提高了15.79%，料重比降低了17%，腹瀉率降低了50%( P ＜0.05)；試驗(yàn)4組仔豬日增重提高了 7.89%，料重比降低了 8.5%，腹瀉率降低了35.71%?？梢姡陲暳现刑砑右?∶1∶1、1∶2∶1、2∶1∶2、1∶1∶2混合的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌的混合益生菌制劑均可以促進(jìn)斷奶仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育，提高抗病力，其中以1∶1∶1、2∶1∶2比例混合的3種有益菌的制劑(試驗(yàn)1、3組)的效果較好。

表2 益生菌制劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of probiotics on growth performance of weaned piglets

2.2 益生菌的定量檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 3種益生菌定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線

對(duì)蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌培養(yǎng)液l0倍系列稀釋樣品進(jìn)行定量PCR，獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為y = –3.131 4x+36.525，r2=0.987 5；y= –3.12 x + 35.24，r2=0.994 7；y= –3.034 3x +34.988，r2=0.990 5，其中y為 Ct值；x為菌落數(shù)的對(duì)數(shù)；r為相關(guān)系數(shù)。

2.2.2 糞樣中3種益生菌的定量PCR檢測(cè)

用建立的定量PCR對(duì)試驗(yàn)1組和對(duì)照組仔豬糞樣中的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表3。在第0天，從試驗(yàn)1組和對(duì)照組中均檢測(cè)到蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌，且試驗(yàn)1組中3種桿菌的量均高于對(duì)照組，說明在飼喂益生菌制劑前仔豬腸道內(nèi)存在3種桿菌，且對(duì)照1組與試驗(yàn)組存在差異。在第7天，試驗(yàn)1組的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌均高于對(duì)照組，且試驗(yàn)1組的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌在試驗(yàn)第7天的增幅(相對(duì)于第0天)(53.07%、28.57%、25.69%)均高于對(duì)照組的增幅(5.70%、25.32%、–5.95%)，說明飼喂蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌混合益生菌制劑后，3種菌在豬腸道的數(shù)量明顯上升。從0～28 d，試驗(yàn)1組仔豬腸道的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌和戊糖乳桿菌均出現(xiàn)上升(0～7 d)、下降(7～21 d)、再上升(21～28 d)的趨勢(shì)，而對(duì)照組仔豬腸道3種菌的變化趨勢(shì)不一致。說明飼喂的益生菌制劑使仔豬腸道相應(yīng)的益生菌在短時(shí)間內(nèi)快速上調(diào)，繼而進(jìn)入自然下調(diào)與上升的模式。在第42天，即停喂益生菌制劑后，試驗(yàn)1組仔豬腸道的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌均呈下降趨勢(shì)，這應(yīng)該是在第28天時(shí)，其數(shù)量已經(jīng)達(dá)到峰值，而趨向于自然下降。戊糖乳桿菌在第42天的數(shù)量高于第28天的，應(yīng)該是在第28天時(shí)還沒有達(dá)到峰值，而呈現(xiàn)出的自然上升，這提示益生菌制劑連續(xù)飼喂7 d即可達(dá)到調(diào)節(jié)腸道菌群的效果。2.3 制劑對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

表3 微生態(tài)制劑對(duì)仔豬體內(nèi)菌群的影響Table 3 Effects of probiotics on flora in weaned piglets CFU/g

仔豬腸道細(xì)菌16S rDNA PCR檢測(cè)產(chǎn)物的DGGE電泳結(jié)果見圖4。摳膠測(cè)序結(jié)果表明，箭頭1～3所指的條帶的序列與蠟樣芽胞桿菌、腸球菌、鏈球菌16S rDNA的序列的同源性分別為98%、97%、98%，箭頭4、5所指條帶的序列與雙歧桿菌16S rDNA的序列的同源性為98%；箭頭6～8所指的條帶的序列與戊糖乳桿菌、大腸桿菌、鼠李糖乳桿菌16S rDNA的序列的同源性為99%、98%、100%，因此，在試驗(yàn)第0天，從試驗(yàn)1組仔豬腸道除檢測(cè)到蠟樣芽胞桿菌(箭頭1所示)、鏈球菌(箭頭3所示)、戊糖乳桿菌(箭頭6所示)、大腸桿菌(箭頭7所示)、鼠李糖乳桿菌(箭頭8所示)，還檢測(cè)到對(duì)照組仔豬腸道未檢出的腸球菌(箭頭2所示)和雙歧桿菌(箭頭5、6所示)。試驗(yàn)14、21 d，對(duì)照組檢測(cè)到蠟樣芽胞桿菌、腸球菌、鏈球菌及、雙歧桿菌、戊糖乳桿菌、大腸桿菌、鼠李糖乳桿菌，其中腸球菌和雙歧桿菌均為新檢測(cè)到的細(xì)菌，且其他細(xì)菌的檢測(cè)條帶均比第0天明顯，說明對(duì)照組仔豬腸道中，除了有益生菌的增長(zhǎng)，還有非益生菌的大量增長(zhǎng)。試驗(yàn)1組在試驗(yàn)14、21 d，未檢測(cè)到腸球菌和雙歧桿菌，且其他各種菌的檢測(cè)條帶的信號(hào)均較弱，說明在這段時(shí)間，整個(gè)腸道細(xì)菌的生長(zhǎng)都下調(diào)，且有害菌(腸球菌)的生長(zhǎng)下調(diào)最大。試驗(yàn)第28、42天，對(duì)照組能檢測(cè)出蠟樣芽胞桿菌、鏈球菌、戊糖乳桿菌、大腸桿菌、鼠李糖乳桿菌，且各種菌的檢測(cè)條帶的信號(hào)均較弱，說明在這段時(shí)間整個(gè)腸道細(xì)菌的數(shù)量下降，且腸球菌與雙歧桿菌的下降最明顯；試驗(yàn)組則相反，各種菌的檢測(cè)條帶的信號(hào)增強(qiáng)，且重新出現(xiàn)腸球菌和雙歧桿菌。

圖4 仔豬糞樣細(xì)菌16S rDNA的V6至V8區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物的DGGE圖譜Fig.4 Bacterial DGGE p rofiles generated from V6–V8 16S rDNA fragments of piglet fecal samples

3 討 論

本研究通過給斷奶仔豬飼喂益生菌制劑，發(fā)現(xiàn)以1∶1∶1、1∶2∶1、2∶1∶2、1∶1∶2比例配制的蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌、戊糖乳桿菌混合益生菌制劑均能促進(jìn)仔豬的生長(zhǎng)，降低仔豬的腹瀉率。這可能是由于制劑中的菌體本身含有大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如B族維生素、泛酸、葉酸、類胡蘿卜素、鈣、磷和多種微量元素等[13–14]，可為動(dòng)物補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)；益生菌在發(fā)酵或代謝過程中可以產(chǎn)生各種酶類，有助于食物的消化吸收，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育[15–16]；益生菌可以維持消化道中有益菌的優(yōu)勢(shì)，并與有害菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來維持微生物區(qū)系的平衡，提高機(jī)體的抗應(yīng)激能力[17]。4種混合比例中，以1∶1∶1、2∶1∶2比例配制的3種菌的混合制劑的效果較好。

斷奶仔豬日糧中添加益生菌可改善仔豬腸道微生物菌群[17]，對(duì)斷奶仔豬腸道糞樣中蠟樣芽孢桿菌，鼠李糖乳桿菌、戊糖乳桿菌的定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，飼喂益生菌制劑能在短時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)斷奶仔豬腸道3種菌的數(shù)量。對(duì)斷奶仔豬腸道糞樣所有細(xì)菌的16SrDNA序列的DGGE電泳及測(cè)序分析表明，蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖乳桿菌、戊糖乳桿菌3種菌的益生菌制劑不僅能調(diào)節(jié)斷奶仔豬腸道內(nèi)相應(yīng)菌群的生長(zhǎng)，還能調(diào)節(jié)其他菌群如腸球菌、鏈球菌、大腸桿菌與雙歧桿菌的生長(zhǎng)。

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責(zé)任編輯：羅 維

英文編輯：羅 維

Effect of probiotics on growth and intestinal flora of piglet

WANG Na1,2a，SHANG Zhi-wei2b，ZHAO Min1*
(1.College of Life Science, Northeast Forestry University, Harbin, Heilongjiang 150040, China; 2.a.Heilongjiang Vocational College for Nationalities, Department of Student Affairs; b.Heilongjiang Department of Food Engineering, Vocational College for Nationalities, Harbin, Heilongjiang 150066, China)

Fifty weaned healthy piglets with similar weight were randomly assigned to five groups: control group fed with corn-soybean meal diets during all the process; test group 1, 2, 4 and 4 first fed with basal diet added with probiotics containing Bacillus cereus, Lactobacillus rhamnosus, and Lactobacillus pentosus mixed in ratio of 1∶1∶1, 1∶2∶1, 2∶1∶2 and 1∶1∶2, respectively from the 1stto the 28thday of the experiment, then with basal diet from the 29thday to the 42ndday. Daily gain, feed/weight ratio, diarrhea rate were calculated after 28 days of feeding. The results showed that daily gain was higher, feed/weight ratio was lower and diarrhea rate was significantly lower in piglets of test groups compared to the control. Daily gain of piglets in test group 1 and 3 was significantly higher than that in the control and in test group 1 was slightly higher than in group 3. Feed/weight ratio of piglets in test group 1 and 3 was significantly lowerthan that in the control and in test group 1 was slightly lower than in group 3. Piglets in test group 1 and 3 showed the same diarrhea rate which was lower compared to test group 2 and 4. These results indicate probiotics with mixing ratio of 1∶1∶1 and 2∶1∶2 have better growth promoting effect for piglets. Quantitative PCR was applied on samples of test group 1 and control group collected after 0, 7, 14, 21, 28, 42 d from the beginning of the experiment, the results showed Bacillus cereus, Lactobacillus rhamnosus, and Lactobacillus pentosus in intestine of piglets in test group 1 exhibited the same growth tendency during feeding the probiotics, which increased and then decreased and increased again, while the 3 strains in intestine of piglets of control group didn’t show such same tendency. The 3 strains still showed regular changes 2 weeks after ceased feeding the probiotics, indicating probiotics could regulate the growth of the correspond bacteria in intestine of the piglets. Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and sequencing of 16SrDNA showed that Bacillus cereus, Enterococcus, Streptococcus, Bifidobacterium, Lactobacillus pentosus, Escherichia coli and Lactobacillus rhamnosus decreased 7 days after feeding probiotics, and increased 28 days after feeding probiotics, showing probiotics could not only regulate the growth of the correspond strain, but also the growth of Enterococcus, Streptococcus, Escherichia coli and Bifidobacterium in the intestine.

piglets; probiotics; denatured gradient gel electrophoresis (DGGE); intestinal flora

S816.3；S828

A

1007?1032(2014)03?0305?06

10.13331/j.cnki.jhau.2014.03.016

投稿網(wǎng)址：http://www.hunau.net/qks

2013–09–15

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31170553；30671702)

王娜(1979—)，女，蒙古族，博士研究生，副教授，主要從事微生態(tài)制劑的研究，wangna7830@sohu.com；*通信作者，13104510480@163.com