金培彧關(guān)敬之* 袁少飛

（1 內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科，內(nèi)蒙古 包頭 014030；2 內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院藥劑科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065）

依達(dá)拉奉對(duì)腦缺血-再灌注大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究

金培彧1關(guān)敬之2* 袁少飛1

（1 內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科，內(nèi)蒙古 包頭 014030；2 內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院藥劑科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065）

目的探討分析采用依達(dá)拉奉藥物對(duì)腦缺血-再灌注大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。方法對(duì)12只大鼠，隨機(jī)平分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注組以及依達(dá)拉奉組，分別于再灌注后3 d、7 d，測(cè)定與對(duì)比丙二醛（MDA）含量、腦組織含水量、水通道蛋白4（AQP-4）的表達(dá)水平以及一氧化氮合酶（NOS）活性。結(jié)果再灌注后3 d腦缺血再灌注組MDA含量、腦組織含水量、AQP-4的表達(dá)水平與NOS活性，均高于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而依達(dá)拉奉組與腦缺血再灌注組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；再灌注后7 d，三組在MDA含量、腦組織含水量與NOS活性等指標(biāo)對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而依達(dá)拉奉組AQP-4的表達(dá)水平顯著低于腦缺血再灌注組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論依達(dá)拉奉藥物能夠降低腦缺血-再灌注大鼠NOS活性、MDA含量、腦組織含水量，抑制AQP-4的表達(dá)，從而起到減輕腦水腫，保護(hù)大鼠神經(jīng)的作用。

依達(dá)拉奉；腦缺血-再灌注；神經(jīng)保護(hù)

依達(dá)拉奉對(duì)治療急性腦梗死具有較好的效果，同時(shí)它也是一種新型的腦神經(jīng)保護(hù)藥物，在諸多的動(dòng)物模型試驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，依達(dá)拉奉能夠有效清除自由基，進(jìn)一步抑制大腦神經(jīng)細(xì)胞的死亡[1]，從而改善神經(jīng)缺損癥狀，而AQP-4與腦水腫癥狀具有十分密切的關(guān)系。因此，本研究通過(guò)對(duì)腦缺血-再灌注大鼠模型的相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，觀察AQP-4的表達(dá)水平以及腦含水量等的變化情況，旨在探討分析依達(dá)拉奉對(duì)腦缺血-再灌注大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制，具體過(guò)程匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與模型制備

①選取12只遠(yuǎn)交群（SD）雄性大鼠，隨機(jī)平分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注組以及依達(dá)拉奉注射組等3組，每組均3只。②采用線栓法，制備局灶性腦腦缺血-再灌注大鼠試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，?dāng)動(dòng)物麻醉清醒后，剔除神經(jīng)功能缺陷評(píng)分為0分與4分的，并補(bǔ)充1～3分的大鼠，其中神經(jīng)功能缺陷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)韓秋等[2]的評(píng)定方法進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)藥品與試劑

依達(dá)拉奉注射液規(guī)格為30 mg/20mL（國(guó)瑞藥業(yè)公司生產(chǎn)）；采用南京建成生物工程所究所提供的檢測(cè)試劑盒，包括丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）等；采用武漢博士德生物工程公司生產(chǎn)的SP免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒；兔抗大鼠抗體（美國(guó)ADI公司生產(chǎn)）。

1.3 試驗(yàn)方法

①對(duì)依達(dá)拉奉組大鼠于腹腔部位注射依達(dá)拉奉5 mg/kg，每12 h，行同法、同量給藥，假手術(shù)組大鼠不行藥物給予，腦缺血再灌注組與依達(dá)拉奉同樣劑量，同法注射生理鹽水。②分離3組大鼠腦組織標(biāo)本，制備腦組織勻漿，并行離心后，取上清液，分別于再灌注后3 d、7 d后，采用化學(xué)比色法與測(cè)定NOS活性，按照李高義等[3]的方法，測(cè)定MDA含量，采用干、濕重測(cè)定法測(cè)定腦水含量，對(duì)腦組織切片進(jìn)行常規(guī)步驟制備后，采用免疫組化法以及光學(xué)顯微鏡圖像分析法，檢測(cè)AQP-4的表達(dá)水平。

表1 再灌注后3 d三組大鼠測(cè)定指標(biāo)對(duì)比

表1 再灌注后3 d三組大鼠測(cè)定指標(biāo)對(duì)比

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，與腦缺血再灌注組相比，#P＜0.05

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表2 再灌注后7 d三組大鼠測(cè)定指標(biāo)對(duì)比（

表2 再灌注后7 d三組大鼠測(cè)定指標(biāo)對(duì)比（

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，與腦缺血再灌注組相比，#P＜0.05

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1.4 數(shù)據(jù)處理

本文研究所收集到的相關(guān)資料以及其他記錄數(shù)據(jù)，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0單因素方差分析進(jìn)行分析處理，組間差異采用t檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用（xˉ±s）表示，P＜0.05表示對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 再灌注后3 d三組大鼠測(cè)定指標(biāo)對(duì)比

再灌注后3 d腦缺血再灌注組MDA含量、腦組織含水量、AQP-4的表達(dá)水平與NOS活性，均高于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而依達(dá)拉奉組與腦缺血再灌注組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 再灌注后7d三組大鼠測(cè)定指標(biāo)對(duì)比

再灌注后7 d，三組在MDA含量、腦組織含水量與NOS活性等指標(biāo)對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而依達(dá)拉奉組AQP-4的表達(dá)水平顯著低于腦缺血再灌注組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3 討 論

進(jìn)行腦缺血-再灌注后，往往容易產(chǎn)生大量的氧自由基，進(jìn)而損傷細(xì)胞膜，使得細(xì)胞膜的通透性功能異常[4]，最終導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生毒性水腫。而丙二醛（MDA）是氧自由基通過(guò)引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)后，形成的一種降解產(chǎn)物[5]，有研究[6]指出，通過(guò)測(cè)定MDA的變化，可以反映出腦組織中氧自由基含量的改變情況；一氧化氮合酶（NOS）在調(diào)節(jié)一氧化氮含量的環(huán)節(jié)中，具有十分重要的地位，而一旦發(fā)生腦缺氧，則可增強(qiáng)NOS的活性，生產(chǎn)出大量的一氧化氮，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞線粒體受到損傷，所以測(cè)定NOS的活性，可以在一定程度上評(píng)估腦組織損傷程度；水通道蛋白4（AQP-4）是腦組織中含量最豐富的水孔蛋白物質(zhì)，據(jù)相關(guān)[7]研究資料表明，AQP-4的表達(dá)水平的高低，與腦梗死等疾病引起的腦水腫癥狀有關(guān)。而臨床上使用的依達(dá)拉奉，正好是治療腦水腫癥狀的藥物，因此，在臨床試驗(yàn)研究中，我們通過(guò)測(cè)定動(dòng)物模型的以上相關(guān)指標(biāo)，以尋找出依達(dá)拉奉對(duì)腦缺血-再灌注大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。

已經(jīng)有研究[8]證實(shí)，依達(dá)拉奉可以抑制AQP-4的表達(dá)，降低丙二醛（MDA）含量、大鼠腦組織含水量以及一氧化氮合酶（NOS）活性，而在本次研究中，再灌注后3 d對(duì)依達(dá)拉奉組大鼠的相關(guān)指標(biāo)，進(jìn)行測(cè)定后發(fā)現(xiàn)，MDA含量、NOS活性、腦組織含水量與AQP-4表達(dá)水平分別為：（5.18±0.13）nmol/mg、（40.12±2.12）U/mg、（76.87 ±1.11）%與（86.71±1.17），與腦缺血再灌注組相比，均顯著降低，與相關(guān)研究報(bào)道[9]結(jié)果相似，充分說(shuō)明，依達(dá)拉奉對(duì)降低MDA含量、NOS活性、組織含水量以及抑制AQP-4的表達(dá)，具有顯著性效果。而在再灌注后7 d測(cè)定發(fā)現(xiàn)，以上相關(guān)指標(biāo)的數(shù)值，均在不同程度上恢復(fù)至正常水平，但從AQP-4方面分析，依達(dá)拉奉組的AQP-4表達(dá)水平，仍然顯著低于腦缺血再灌注組，再次證明，依達(dá)拉奉對(duì)抑制AQP-4的表達(dá)的有效性。此外，有研究[10]指出，于再灌注后的6 h、1 d、3 d分別對(duì)以上指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，可以發(fā)現(xiàn)指標(biāo)值在升高，這需要本文進(jìn)一步分次測(cè)定時(shí)間，并擴(kuò)大研究樣本的容量，為臨床試驗(yàn)結(jié)論提供更可靠依據(jù)。

綜上所述，依達(dá)拉奉藥物能夠降低腦缺血-再灌注大鼠NOS活性、MDA含量、腦組織含水量，抑制AQP-4的表達(dá)，從而起到減輕腦水腫，保護(hù)大鼠神經(jīng)的作用。

[1] 侯晞,梁楓,李愛(ài)劍,等.銀杏葉提取物聯(lián)合依達(dá)拉奉對(duì)氣虛血瘀型腦缺血/再灌注大鼠血液學(xué)的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2010,26 (8):1049-1053.

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1671-8194（2014）24-0070-02

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