鄒吉利,徐彬,吳金虎,陳永剛,黃丹丹

(1.武漢市第三醫(yī)院藥學(xué)部,武漢 430060;2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,武漢 430064)

燒傷愈合膏龍腦與異龍腦的含量測(cè)定*

鄒吉利1,徐彬1,吳金虎1,陳永剛1,黃丹丹2

(1.武漢市第三醫(yī)院藥學(xué)部,武漢 430060;2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,武漢 430064)

目的 建立燒傷愈合膏中龍腦、異龍腦的含量測(cè)定方法。方法采用毛細(xì)管氣相色譜法,以聚乙二醇20000為固定液,涂布濃度為100%,氮?dú)鉃檩d氣,氫火焰離子化(FID)檢測(cè)器,用ZB-WAX毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm),程序升溫80℃(5 min)→5℃·min-1→180℃(10 min),分流進(jìn)樣,分流比為10∶1。結(jié)果龍腦在0.487 5～31.25 ng(r=0.999 6,n=6),異龍腦在0.487 5～31.25 ng(r=0.999 7,n=6)線性關(guān)系良好,平均加樣回收率分別為95.95%和96.44%。結(jié)論所建立的方法可同時(shí)對(duì)龍腦、異龍腦的含量進(jìn)行測(cè)定,準(zhǔn)確度高,靈敏性好,可用于燒傷愈合膏的質(zhì)量控制。

龍腦;異龍腦;燒傷愈合膏;色譜法,毛細(xì)管氣相

燒傷愈合膏系武漢市第三醫(yī)院自主研制的系列燒傷制劑之一。根據(jù)燒傷病的特點(diǎn),遵循中醫(yī)對(duì)燒傷“火毒內(nèi)攻”的認(rèn)識(shí)[1-2],按照清熱解毒、化腐生肌、祛瘀生新、活血止痛的原則[3]設(shè)計(jì)制備的軟膏劑。處方中含有黃連、冰片、乳香等,其中冰片作為使藥,具有開竅醒神、清熱解毒止痛、促進(jìn)其他藥物透皮吸收的作用[4]。冰片主要含龍腦和異龍腦,其含量的高低影響著燒傷愈合膏的吸收和療效,因此龍腦、異龍腦含量測(cè)定對(duì)燒傷愈合膏的質(zhì)量控制尤為重要。筆者在本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)[5-7],采用毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定燒傷愈合膏中龍腦、異龍腦的含量,為其質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent GC6890N氣相色譜儀,FID檢測(cè)儀,QL-200型氫氣發(fā)生器,CA型靜音無油空氣泵,電子分析天平,毛細(xì)管色譜柱,KQ-300E型超聲儀, Sartorius十萬分之一分析天平。

1.2 試藥 龍腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110881-201107,供含量測(cè)定用),異龍腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):1512-200201,供含量測(cè)定用),水為超純水,乙酸乙酯為分析純,燒傷愈合膏[醫(yī)院制劑批準(zhǔn)文號(hào):鄂藥制字(2001)第BZ02-047號(hào),批號(hào):20120720,20120730,20120810]。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取龍腦、異龍腦對(duì)照品,精密稱定,分別加乙酸乙酯配制成0.250 mg·mL-1對(duì)照品溶液。取等體積的龍腦、異龍腦對(duì)照品溶液混合均勻,得到濃度均為0.125 mg·mL-1混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 燒傷愈合膏供試品溶液和陰性樣品溶液的制備 取燒傷愈合膏0.5 g,精密稱定,加乙酸乙酯100 mL,精密稱定,超聲30 min,放冷后用乙酸乙酯補(bǔ)足損失的質(zhì)量,濾過,取續(xù)濾液,即得燒傷愈合膏供試品溶液。按處方比例將不含冰片的其他藥材按相關(guān)工藝制成膏劑,得到陰性樣品,再按上述方法制備得到燒傷愈合膏陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 以聚乙二醇20000為固定相,ZB-WAX毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm),涂布濃度為100%,柱流量為1.0 mL·min-1,氮?dú)鉃檩d氣,流速30 mL·min-1。柱溫:程序升溫,初始溫度80℃,保留5 min,以5℃·min-1的速率升至180℃,終溫保持10 min,進(jìn)樣口溫度200℃,檢測(cè)器溫度220℃,分流進(jìn)樣,分流比10∶1。在該條件下將對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液分別進(jìn)樣1 μL,保留時(shí)間為20 min,結(jié)果顯示分離良好,陰性無干擾,結(jié)果見圖1。

A.陰性樣品;B.混合對(duì)照品;C.燒傷愈合膏樣品;1.異龍腦;2.龍腦圖1 燒傷愈合膏氣相圖譜A.Negative controls;B.mixed control;C.shaoshang yuhe gao sample;1.isoborneol;2.campholFig.1 Gas chromatograms of shaoshang yuhe gao

2.3 線性關(guān)系考察 以濃度均為0.125 mg·mL-1的龍腦、異龍腦混合對(duì)照品溶液為母液,精密吸取母液0.039,0.078,0.156,0.312,0.625,1.250,2.50 mL,分別加乙酸乙酯定容到10 mL量瓶,得到龍腦、異龍腦系列濃度分別為0.487 5,0.975 0,1.950 0,3.900 0, 7.812 5,15.625,31.250 μg·mL-1溶液,分別精密吸取1 μL,注入氣相色譜儀測(cè)量,分別以龍腦、異龍腦含量為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸處理,得到龍腦回歸方程:Y=457.5X+0.433 3,r= 0.999 6(n=6),線性范圍:0.487 5～31.25 ng;異龍腦回歸方程:Y=536.7X+0.487 5,r=0.999 7(n=6),線性范圍:0.487 5～31.25 ng。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液1 μL,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄其峰面積,計(jì)算得龍腦、異龍腦峰面積RSD分別為1.30%和0.9%。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取燒傷愈合膏供試品溶液1 μL,分別在第2,4,6,8,10,12小時(shí)進(jìn)樣,記錄其峰面積,計(jì)算得龍腦、異龍腦峰面積RSD分別為1.4%和1.2%。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一批號(hào)的6份燒傷愈合膏樣品溶液,分別進(jìn)樣,每次1 μL,記錄其峰面積,計(jì)算得龍腦、異龍腦的含量RSD分別為0.98%和1.32%。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取燒傷愈合膏樣品6份,各約0.25 g,含龍腦約4.904 mg·g-1,異龍腦約4.032 mg·g-1,精密稱定,分別精密加入龍腦對(duì)照品1.10 mg和異龍腦對(duì)照品0.95 mg,制備成供試品溶液,測(cè)定樣品中龍腦和異龍腦的含量,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果得到龍腦的平均加樣回收率為95.95%,RSD為1.1%,異龍腦的平均加樣回收率為96.44%,RSD為1.96%,見表1。

表1 龍腦和異龍腦的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery of camphol and isoborneol

2.8 樣品含量測(cè)定 取本品約0.5 g,精密稱定,制備成燒傷愈合膏供試品溶液,取1 μL注入氣相色譜儀進(jìn)行色譜分析,測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果龍腦含量分別為4.850,4.972,4.892 mg·g-1,平均4.905 mg·g-1;異龍腦含量分別為3.982,4.124,3.988 mg·g-1,平均4.031 mg·g-1。

3 討論

龍腦和異龍腦作為冰片的主要成分,在本法的實(shí)驗(yàn)條件下,兩峰理論板數(shù)高,峰形好,分離效果好,可作為燒傷愈合膏質(zhì)量控制中冰片含量的測(cè)定方法。

本實(shí)驗(yàn)利用氣相色譜法確定了燒傷愈合膏中冰片的主要化學(xué)成分的含量,這為后期的指紋圖譜研究奠定了基礎(chǔ)。還考察了氣相色譜法測(cè)定龍腦、異龍腦含量的方法學(xué),對(duì)其含量進(jìn)行了測(cè)定,這對(duì)制劑的質(zhì)量控制提供了支持,為提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和后期體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定了基礎(chǔ)[8-11]。

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DOI 10.3870/yydb.2014.07.029

Determination of Camphol and Isoborneol in Shaoshang Yuhe Gao

ZOU Ji-li1,XU Bin1,WU Jin-hu1,CHEN Yong-gang1,HUANG Dan-dan2
(1.Department of Pharmacy,the Third Hospital of Wuhan,Wuhan 430060,China;2.Hubei Provincial Institute for Food and Drug Control, Wuhan 430064,China)

ObjectiveTo establish a capillary gas chromatography method for determination of camphol and isoborneol inShaoshang yuhe gao(burn healing cream).MethodsThe capillary gas chromatography was adopted under the following conditions:use PEG-2000 as the stationary liquid,nitrogen as carrier gas,ZB-WAX(30 m×0.25 mm,0.25 μm)as the chromatographic column,and the flame ionization detector.The column temperature was programmed at 80℃for 5 min as the initial temperature,then raised to 180℃at the rate of 5℃·min-1and kept for 10 min.The shunt ratio was 10∶1.ResultsThe liner range for camphol was 0.487 5-31.25 μg(r=0.999 6),and the average recovery was 95.95%(n=6).The liner range for isoborneol was 0.487 5-31.25 μg(r=0.999 7),and the average recovery was 96.44%(n=6).ConclusionThe method is accurate,sensitive,and can be applied to quality control ofshaoshang yuhe gao.

Camphol;Isoborneol;Shaoshang yuhe gao;Chromatography,capillary gas

T286;TQ460.1

A

1004-0781(2014)07-0944-03

2013-06-17

2013-07-15

*湖北省科技計(jì)劃自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2011CDB298)

鄒吉利(1986-),女,四川資陽人,藥師,碩士,主要研究方向:藥物分析。E-mail:zjlily86@163.com。

吳金虎(1962-),男,湖北十堰人,主任藥師,博士,主要從事臨床藥學(xué)及藥理學(xué)研究。E-mail:75301082@qq. com。