王相忍

（河南省濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 濮陽(yáng) 457000）

馬來酸氯苯那敏是抗組胺類藥，通過對(duì)H1受體的拮抗發(fā)揮抗過敏作用，收載于2010年版《中國(guó)藥典（二部）》，其注射劑采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法控制質(zhì)量，但原料藥尚未將細(xì)菌內(nèi)毒素檢查或熱原檢查項(xiàng)目列入標(biāo)準(zhǔn)中。為了加強(qiáng)藥品質(zhì)量控制，筆者對(duì)馬來酸氯苯那敏原料藥細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性進(jìn)行了研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

TAL－40D型試管恒溫儀(湛江安度斯生物有限公司)；ZH－2型自動(dòng)漩渦混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；CPA225D型電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。馬來酸氯苯那敏(河南九勢(shì)制藥股份有限公司，批號(hào)為120910，121012，121118；上海新華聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)為120802，121101，規(guī)格均為原料藥)；鱟試劑(湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)為1210081，規(guī)格為每支0.1 mL，靈敏度為0.25 EU/mL；湛江博康海洋生物有限公司，批號(hào)為 1201122，規(guī)格為每支 0.1 mL，靈敏度為 0.25 EU/mL)；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為150601－201175，效價(jià)為120 EU/支)；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(簡(jiǎn)稱BET用水，湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)為1205300，規(guī)格為每支50 mL)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑標(biāo)示靈敏度( )的復(fù)核[1]

照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。結(jié)果2批鱟試劑靈敏度測(cè)試值 (λc)均在 0.5 λ ～ 2.0 λ，表明鱟試劑靈敏度符合規(guī)定，可用于試驗(yàn)。

2.2 樣品內(nèi)毒素限值(L)的確定[1]

照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》相關(guān)方法，根據(jù)公式 L＝K/M 計(jì)算，K為每人每千克體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑 K＝5 EU/(kg·h)，M為每人每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量。本品為原料藥，參照該藥品制劑馬來酸氯苯那敏注射液說明書及《臨床用藥須知》，最大使用劑量為20mg/h，成人體重按60 kg、滴注時(shí)間按 1 h 計(jì)算，則 M ＝20/60 ＝0.333mg(kg·h)，則L＝5/0.333＝15.0 EU/mg，高于馬來酸氯苯那敏注射液細(xì)菌內(nèi)毒素限制5.0 EU/mg。根據(jù)同品種的原料藥與不同制劑間的細(xì)菌內(nèi)毒素限值一致性原則，為保證安全用藥，將本品安全系數(shù)（f）定為 3，則 L＝15/3＝5.0 EU/mg。因此馬來酸氯苯那敏原料藥的 L確定為 5.0 EU/mg。

2.3 樣品預(yù)干擾試驗(yàn)

由于干擾試驗(yàn)是在供試品存在的情況下驗(yàn)證內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)是否正常，與所使用鱟試劑的靈敏度無關(guān)，因此在干擾試驗(yàn)中原則上可使用任意靈敏度的鱟試劑，建議使用較低靈敏度（如0.5 EU/mL或 0.25 EU/mL）的鱟試劑，可盡量避免供試品所含內(nèi)毒素對(duì)干擾試驗(yàn)造成的陽(yáng)性影響[2]。本試驗(yàn)將 λ為0.25 EU/mL的鱟試劑作為最高靈敏度，本品為原料藥，樣品最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）取 1，L＝5.0 EU/mg，根據(jù)公式 C ＝ λ /L計(jì)算出供試品的最低有效稀釋質(zhì)量濃度為0.05 g/L。精密稱取供試品64mg，精密加 BET用水，制成質(zhì)量濃度為6.4 g/L的溶液，再用 BET用水稀釋成含馬來酸氯苯那敏 3.2，1.6，0.8，0.4，0.2，0.1，0.05 g/L 的溶液，記為 NPC；另制備同一系列質(zhì)量濃度并含有 2 λ（0.5 EU/mL）細(xì)菌內(nèi)毒素的樣品陽(yáng)性溶液，記為 PPC；用 λ：0.25 EU/mL的2個(gè)廠家的鱟試劑，分別與上述NPC和PPC系列溶液進(jìn)行反應(yīng)，每1個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)2管，并設(shè)陰性對(duì)照（NC）和陽(yáng)性對(duì)照（PC）各2管。結(jié)果見表1?？梢?，當(dāng)樣品稀釋至0.8 g/L質(zhì)量濃度時(shí)對(duì)2個(gè)廠家鱟試劑均不存在干擾作用。

2.4 供試品正式干擾試驗(yàn)

根據(jù)干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，取2個(gè)廠家的樣品，以BET用水稀釋成最終質(zhì)量濃度為0.8 g/L的溶液。以該溶液和BET用水分別將內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成 0.5 EU/mL（2 λ），0.25 EU/mL（1 λ），0.125 EU/mL（0.5 λ），0.062 5 EU/mL（0.25 λ）的系列溶液，然后分別用 λ為0.25 EU/mL的2個(gè)廠家鱟試劑，按2010年版《中國(guó)藥典（二部）》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法項(xiàng)下規(guī)定進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。結(jié)果見表2。內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品水溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Es)為 0.5 ～ 2.0 λ(包括 0.5 λ 和 2.0 λ)，內(nèi)毒素供試品溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Et)為 0.5 ～2.0 Es(包括 0.5 Es和2.0 Es)， Es均在 0.5 λ ～ 2.0 λ 之間， Et均在 0.5 Es～ 2.0 Es范圍內(nèi)。結(jié)果表明，在此試驗(yàn)條件下，樣品對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)素素的反應(yīng)無干擾。

表2 干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

取5批樣品，用BET用水分別溶解稀釋制成質(zhì)量濃度為0.8g/L的溶液，用 λ為0.25 EU/mL的2個(gè)廠家的不同鱟試劑，以 L為5.0 EU/mg作為評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行操作和結(jié)果判斷。結(jié)果見表3，表明5批樣品經(jīng)不同廠家的鱟試劑檢驗(yàn)，均符合規(guī)定。

表3 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

3 討論

為提高藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更有效地控制藥品質(zhì)量，依據(jù)2010年版《中國(guó)藥典（二部）》凡例二十二條“同一原料藥用于不同制劑時(shí)，需根據(jù)臨床用藥要求制訂相應(yīng)的質(zhì)量控制項(xiàng)目”的要求，制訂該原料藥的安全性檢查項(xiàng)目非常必要。將馬來酸氯苯那敏原料藥細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為5.0 EU/mg，與其注射劑限值相同，能保障臨床用藥安全。

采用2批不同廠家的鱟試劑對(duì)3批樣品進(jìn)行干擾試驗(yàn)，以及用不同廠家的鱟試劑對(duì)5批樣品進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明，當(dāng)樣品稀釋至0.8 g/L質(zhì)量濃度時(shí)對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)無干擾作用，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果也符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法有效性的規(guī)定。因此，馬來酸氯苯那敏原料藥采用內(nèi)毒素檢查法（凝膠法）是可行的，建議注射劑生產(chǎn)廠家可用此方法控制采購(gòu)原料藥質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄88－附錄91.

[2] 中國(guó)藥品生物制品檢定所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：322.