湯建亞等

摘要[目的]研究冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉的抗焦慮作用。[方法]取健康雄性SD大鼠70只，按體重隨機(jī)分為7組，模型對照組，冬蟲夏草低劑量組

關(guān)鍵詞冬蟲夏草水提取物；速溶蘆筍粉；抗焦慮；小鼠

中圖分類號S567文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）14-04224-02

Study on Anxiolytic Activity of Water Extract from Cordyceps sinensis and the Instant Asparagus Powder in Rats

TANG Jianya，SUN Jin et al（State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi，Jiangsu 214122； School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi，Jiangsu 214122）

Abstract[Objective] To study anxiolytic activity of water extract from Cordyceps sinensis and the instant asparagus powder.[Method] 70 healthy SpragueDawley male rats were randomly divided into 7 groups according to their weight for daily intragastric administration of drugs：model control group，water extract from Cordyceps sinensis lowdose （WECSl 8.4mg/kg），highdose （WECSh 16.8 mg/kg），the water extract from Cordyceps sinensis lowdose with the instant asparagus powder （WECSl 8.4 mg/kg + IAP 400 mg/kg），the water extract from Cordyceps sinensis highdose with the instant asparagus powder （WECSh 16.8mg/kg+IAP 400mg/kg），the instant asparagus powder （IAP 400mg/kg） and normal control group.In this test，adopting the model of chronic emotional stress，the effect of antianxiety of the instant asparagus powder on the behavior and endocrine level was observed.[Result] The results of behavior showed the water extract from Cordyceps sinensis highdose with the instant asparagus powder group （WECSh+IAP） attacks were significantly reduced，and WECSl+IAP group the exploration and preening behavior also significantly reduced，but the other groups has no significant differences while compared with the model control group （P>0.05）.The results of endocrine level showed that on the anxiety model，the WECSh+IAP group obviously decreased the concentrations of cortisol，epinephrine and noradrenaline in rats serum （P<0.05），the concentrations of 5HT and dopamine in rats serum was obviously increased at the same time （P<0.05）.[Conclusion] The combined use of the water extract from Cordyceps sinensis and the instant asparagus powder has obvious antianxiety activity.

Key wordsWater extract from Cordyceps sinensis； Instant asparagus powder； Antianxiety； Rats

冬蟲夏草（CORDYCEPS）是麥角菌科真菌冬蟲夏草菌[Cordyceps sinensis（Berk） Sacc]寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的干燥復(fù)合體。目前國內(nèi)研究表明，冬蟲夏草具有提高免疫力[1-2]、抗腫瘤[3]、鎮(zhèn)靜[4-5]等活性功能。蘆筍（asparagus officinalis L.） 又名石刁柏、龍須菜，具有很高的營養(yǎng)保健價(jià)值，是一種食藥兼用的名貴蔬菜[6]。研究表明，蘆筍具有提高免疫力[7]、抗衰老[8]、改善睡眠[9-10]等活性功能。筆者探討冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉以及二者的混合物抗焦慮活性，以期為速溶蘆筍粉復(fù)合功能食品的開發(fā)提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象。冬蟲夏草，購自無錫山禾健康李同豐參藥店，經(jīng)鑒定為CORDYCEPS。

1.1.2試驗(yàn)動物。選用SPF級雄性SD大鼠，體重200±20 g，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號SCXK（滬）20130016，使用許可證普通環(huán)境許可證號：SYXK（蘇）20120001。

1.1.3主要試劑。速溶蘆筍粉（ IAP），購自秦皇島長勝農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司；5羥色氨酸（5HT）、多巴胺（DA）、皮質(zhì)醇（CORT）、腎上腺素（E）和去甲腎上腺素（NA）檢測試劑盒，均購自上海聯(lián)碩生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)。保持溫度為20～25 ℃，相對濕度為40%～70%。試驗(yàn)共分7組：a正常對照組（Control），灌胃生理鹽水；b模型對照組（Model），灌胃生理鹽水c冬蟲夏草水提取物低劑量組（WECSl），灌胃冬蟲夏草水提取物8.4 mg/kg；d冬蟲夏草水提取物高劑量組（WECSh），灌胃冬蟲夏草水提取物16.8 mg/kg；e冬蟲夏草水提取物低劑量+速溶蘆筍粉（WECSl+IAP），灌胃冬蟲夏草水提取物8.4 mg/kg+速溶蘆筍粉400 mg/kg；f冬蟲夏草水提取物高劑量+速溶蘆筍粉（WECSh+IAP），灌胃冬蟲夏草水提取物16.8 mg/kg+速溶蘆筍粉400 mg/kg；g速溶蘆筍粉（IAP），灌胃速溶蘆筍粉400 mg/kg；每組10只，每日灌胃1次，每次4 ml。

1.2.2冬蟲夏草水提取物（WECS）。取冬蟲夏草子實(shí)體經(jīng)高速組織搗碎機(jī)處理后，放于蒸餾水中低溫浸提3次，每次24 h。每次浸提結(jié)束后，離心處理（3 000 r/min，4 ℃，10 min），再重新浸取。最后合并3次浸取上清，干燥，制得冬蟲夏草水提取物；速溶蘆筍粉為白色粉末，該樣品是以蘆筍副產(chǎn)物為原料，經(jīng)過水浸提、脫色、脫重金屬、過濾、濃縮和干燥工藝制備得到，即蘆筍水提取物。

1.2.3慢性情緒應(yīng)激模型。按照Nicolas V、王延麗等建立的模型研究慢性情緒應(yīng)激[11-12]，并進(jìn)行適當(dāng)修改。大鼠經(jīng)1周適應(yīng)期后隨機(jī)分組，除正常組外，模型組單籠飼養(yǎng)且接受不確定性空瓶飲水刺激建立焦慮應(yīng)激模型。具體方法如下：定時(shí)喂水訓(xùn)練7 d，即每天早9：00～9：10和晚17：00～17：10給動物飲水10 min，其余時(shí)間撤去水瓶不給水。定時(shí)喂水期結(jié)束后開始應(yīng)激試驗(yàn)，在上述2個(gè)時(shí)間段內(nèi)給予不確定空瓶刺激，維持每天2次，持續(xù)2周。正常組不接受任何處理，自由飲水和攝食。行為學(xué)觀察包括攻擊（咬或攻擊空瓶和籠子）、探究（前后左右運(yùn)動和光顧水瓶所在位置）及修飾行為（梳理皮毛和洗臉）。具體方法是：將空瓶應(yīng)激的10 min等分10個(gè)時(shí)間段，在每個(gè)時(shí)間段內(nèi)記錄每只大鼠上述3種行為，行為出現(xiàn)即為1，否則為0。10 min內(nèi)觀察的總分為0～10。得分基于2名觀察者的觀察結(jié)果平均而得，其中一人為雙盲控制。14個(gè)觀察日的前3 d和最后3 d的平均分用于統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)采集標(biāo)本，檢測神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)。

1.2.4試驗(yàn)指標(biāo)的測定。行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)束后立即斷頭取血， 置于離心管內(nèi)，在4 ℃溫度下3 000 r/min離心15 min，取上清液-20 ℃保存待測。以ELISA 法按照試劑盒的操作步驟分別進(jìn)行檢測血清中皮質(zhì)酮、5羥色氨酸、多巴胺、皮質(zhì)醇、腎上腺素和去甲腎上腺素含量的測定。

1.2.5數(shù)據(jù)處理。采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和多重比較，顯著水平為P<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉對慢性情緒應(yīng)激模型小鼠行為學(xué)的影響由表1可知，冬蟲夏草水提取物和速溶蘆筍粉在給藥劑量下可以減少焦慮動物的攻擊、探究和修飾行為的動作次數(shù)。其中，WECSh+IAP劑量組的攻擊行為顯著低于模型對照組（P<0.05），WECSl+IAP劑量組的探究行為和修飾行為顯著低于模型對照組（P<0.05），其他各個(gè)處理組與模型對照組比較統(tǒng)計(jì)結(jié)果均沒有顯著差異（P>0.05）。

2.2冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉對小鼠血漿中內(nèi)分泌水平的影響由表2可知，WECSh+IAP與WECSh在給藥劑量下可以改變焦慮動物的血清中主要神經(jīng)遞質(zhì)的含量，與模型對照組比較，顯著降低血清皮質(zhì)醇、腎上腺素和去甲腎上腺素濃度，顯著升高血清中5羥色氨酸和多巴胺的濃度 （P<0.05），且WECSh+IAP的抗焦慮效果優(yōu)于WECSh。WECSl+IAP與模型對照組比較，顯著降低血清中皮質(zhì)醇、去甲腎上腺素的含量，顯著升高血清中5羥色氨酸和多巴胺的含量（P<0.05）。WECSl與模型對照組比較，顯著降低血清中皮質(zhì)醇含量（P<0.05），顯著提高血清中5羥色氨酸含量（P<0.05），其他檢測指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果均沒有顯著差異（P>0.05）。IAP與模型對照組比較，顯著升高血清中多巴胺和5羥色氨酸的含量（P<0.05），其他檢測指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果均沒有顯著差異（P>0.05）。結(jié)果表明，冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉的聯(lián)用能顯著提高抗焦慮作用。

3結(jié)論

試驗(yàn)中空白對照組的5-HT含量明顯高于模型對照組，而其他各個(gè)處理組的的5HT含量均高于模型對照組，表明5HT缺乏導(dǎo)致了焦慮。冬蟲夏草水提取物高劑量與速溶蘆筍粉（WECSh+IAP）處理組的攻擊行為顯著低于模型對照組（P<0.05），能減少小鼠自主活動次數(shù)，對陌生環(huán)境下中樞神經(jīng)系統(tǒng)過度活動有一定抑制作用，顯著降低應(yīng)急狀態(tài)下血清皮質(zhì)醇濃度（壓力狀態(tài)的重要生化指標(biāo)）（P<0.05），并能顯著升高血清中5羥色胺酸和多巴胺水平（P<0.05）。WECSh也具有顯著的抗焦慮作用，但是冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉的混合物（WECSh+IAP）抗焦慮作用均高于WECSh、IAP處理組，表明冬蟲夏草水提取物與速溶蘆筍粉聯(lián)用可增強(qiáng)抗焦慮作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 顧國勝，任建安，李寧，等.冬蟲夏草對大鼠腸黏膜屏障免疫功能影響的研究[J].腸外與腸內(nèi)營養(yǎng)，2008，15（6）：326-328.

[2] 袁建國，程顯好，侯永勤.冬蟲夏草多糖組分研究及藥理實(shí)驗(yàn)[J].食品與藥品，2005，7（1）：45-48.

[3] 章力建，張紅城，董捷，等.冬蟲夏草輔助蜂膠抗腫瘤及其體外免疫作用研究初報(bào)[J].中國蜂業(yè)，2010，61（5）：7-10.

[4] 盧玉蘭，翁開敏.冬蟲夏草的藥理作用研究[J].中國藥師，2003，6（6）：371-372.

[5] 石巖，魏鋒，馬雙成，等.冬蟲夏草及其菌絲體藥理作用研究概況[J].中國藥事，2013，27（8）：847-849.

[6] 胡立勇，余德謙.蘆筍栽培與加工[M].北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1998：1-10.

[7] 張志遠(yuǎn).蘆筍粗多糖對正常小鼠免疫功能的影響[J].鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2003，23（2）：83-84.

[8] 苗明三，顧麗亞，方嘵燕，等.蘆筍多糖對衰老模型小鼠的影響[J].中國中藥雜志，2004，29（7）：673- 675.

[9] 馬淑鳳，王芳，李漢臣，等.速溶蘆筍粉改善睡眠功能的研究[J].食品工業(yè)科技，2012，33（18）：359-362.

[10] 馬淑鳳，王芳，李漢臣，等.不同皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)速溶蘆筍粉改善睡眠作用[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2013，32（8）：793-798.

[11] NICOLAS V，MICHAL M，CATHERINE L M.Ethological comparison of the effects of a bovine αs1casein tryptic hydrolysate and diazepam on the behaviour of rats in two models of anxiety[J].Pha，Biochemistry and Behavior，2006，84：517-523.

[12] 王延麗，劉勇，石晉麗.纈草素抗焦慮作用及其機(jī)制的初探[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2011，27（4）：501-504.