耿奇 李秀萍 張平

【摘 要】目的：探討DC-CIK聯(lián)合培養(yǎng)治療不能手術(shù)、不能化療的老年晚期惡性腫瘤患者的臨床療效觀(guān)察。方法：觀(guān)察148例臨床確診為惡性腫瘤的老年患者的腫瘤標(biāo)記物、免疫指標(biāo)和KPS評(píng)分的變化。 結(jié)果：DC-CIK治療后，腫瘤標(biāo)記物CEA和CA125 降低，CD3+、 CD4+、CD8+的指標(biāo)都有顯著提高（P<0.05），KPS評(píng)分不同程度的提高。結(jié)論：DC-CIK細(xì)胞治療不能手術(shù)、化療的老年晚期惡性腫瘤患者臨床療效好，改善患者的生活質(zhì)量，提高患者的生存期。

【關(guān)鍵字】免疫治療；樹(shù)突狀細(xì)胞；CIK；老年人；惡性腫瘤；療效

【中圖分類(lèi)號(hào)】R73 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）02-0565-01

隨著我國(guó)人口的老年化，老年惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率逐年上升。大部分老年患者由于年紀(jì)、身體狀況和合并各種基礎(chǔ)病等原因而不能化療、手術(shù)等治療。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞免疫學(xué)的發(fā)展，生物免疫療法已成為腫瘤治療的重要方法[1]，其中，CIK細(xì)胞聯(lián)合DC細(xì)胞治療惡性腫瘤，提高患者免疫功能的同時(shí)，有協(xié)同抗腫瘤的作用[2]。2011年12月～2012年10月148例晚期惡性腫瘤老年患者在我院接受DC-CIK治療，報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1臨床材料

經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診的癌癥患者148例，男性92例，女性56例。肺癌60例，乳腺癌20例，結(jié)腸癌15例，膀胱癌10例，前列腺癌8例，胃癌6例，肝癌5例，食道癌5例，胰腺癌5例，宮頸癌5例，卵巢癌3例，腎癌3例，黑色素瘤3例?；颊呷脒x標(biāo)準(zhǔn)：年齡大于60歲； 病理組織學(xué)、影像學(xué)或細(xì)胞學(xué)等檢查確診為腫瘤患者；生活自理，KPS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)50分以上；預(yù)計(jì)生存期至少大于3個(gè)月；簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

采外周血：采血前對(duì)患者進(jìn)行血常規(guī)檢查，淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞的總數(shù)≥1×109/L。如不符合此標(biāo)準(zhǔn)，需采用GM-CSF進(jìn)行刺激造血系統(tǒng)后，采血量為50-60ml，采血前晚患者進(jìn)食清淡飲食。

DC-CIK分離與體外誘導(dǎo)：將采集的外周血加入葡聚糖梯度離心進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞分離，采用虹吸的方式吸出單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞，用含有自體血清、細(xì)胞因子和硫酸慶大霉素的1640培養(yǎng)基懸浮，并轉(zhuǎn)移至75ml的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置于37℃的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2天半量換培養(yǎng)液和觀(guān)察生長(zhǎng)情況，并取培養(yǎng)液送到檢驗(yàn)科微生物是進(jìn)行微生物檢測(cè)，若發(fā)現(xiàn)污染立即停止細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞的CD3+、CD4+、CD8+、分子標(biāo)記表達(dá)水平，要求CD3陽(yáng)性率大于90% ，CD3/CD8大于 60%，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)算細(xì)胞活力大于85% ； 收集DC-CIK 細(xì)胞，注入100ml生理鹽水輸液袋中。

DC-CIK回輸：一般采血后的8～14天開(kāi)始首次回輸，間隔一天，分4次靜脈回輸完畢?；剌斶^(guò)程如有不適，及時(shí)處理癥狀。

觀(guān)察指標(biāo)：由于部分患者因個(gè)人原因致無(wú)法了解腫瘤體積變化，主要通過(guò)觀(guān)察患者的腫瘤標(biāo)志物、免疫指標(biāo)、生存質(zhì)量、不良反應(yīng)、臨床癥狀、食欲、體重等判斷療效。其中臨床癥狀、生存質(zhì)量、不良反應(yīng)以患者主訴為依據(jù)。

1.3 免疫學(xué)相關(guān)指標(biāo)及腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)

抽取患者治療前1周和治療結(jié)束3天后的外周血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群（包括CD3+、CD4+、CD8+、 CD4+/CD8+），治療前1周、治療后1月檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物。

1.4 療效判定

生活質(zhì)量：采用Karnofsky評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，提高20分以上為顯效；提高10-20 分為有效；提高10分以下至下降10分以?xún)?nèi)為穩(wěn)定；下降10分以上為惡化。

療效評(píng)價(jià)：病灶完全緩解（CR），病灶部分緩解（PR），病灶穩(wěn)定（SD），病灶進(jìn)展（PD）

毒副作用：根據(jù)《急性和亞急性毒性反應(yīng)的表現(xiàn)和分度標(biāo)（ WHO標(biāo)準(zhǔn)） 評(píng)價(jià)化療毒副反應(yīng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均值±方差表示，采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行均值比較的方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，概率的比較采用 x2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義。

2 結(jié)果

2.1 DC-CIK細(xì)胞治療前后腫瘤標(biāo)記物的檢測(cè)

檢測(cè)148例患者的DC-CIK細(xì)胞治療前后的腫瘤標(biāo)記物癌胚抗原（CEA）和CA125的改變情況：148例中96例下降；39例無(wú)變化；13例升高。下降率64.9%

2.2 DC-CIK細(xì)胞治療前后免疫系統(tǒng)的影響

148例患者平均接受了細(xì)胞回輸，治療后均表現(xiàn)精神狀態(tài)良好，治療前后前后患者免疫系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)如表2所示，治療前后患者的外周血中CD3 +、CD4+、 CD8+細(xì)胞均有明顯的上升（P<0.05）

2.3 治療前后患者療效評(píng)估

對(duì)148例患者進(jìn)行回訪(fǎng)，治療后有110例卡式評(píng)分提高10-30分，有29例無(wú)變化，有9例下降。92例體重增加，占62.2%。說(shuō)明治療后患者的生活質(zhì)量得以提高和改善，其中，病情部分緩解的有（PR）82例，影像學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)病灶縮小明顯，情況，病情平穩(wěn)（SD）的有42例，沒(méi)有新的病灶轉(zhuǎn)移，病情進(jìn)展（PD）有24例。

2.4生存期： 例患者DC-CIK細(xì)胞治療后1年生存期為，2年為。隨訪(fǎng)2年的生存期見(jiàn)表3.

2.5 不良反應(yīng)：148例患者中有18例出現(xiàn)發(fā)熱均在輸后1小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)，持續(xù)不超過(guò)3小時(shí)，除有3例體溫達(dá)38℃，退熱處理后緩解。其余患者回輸后無(wú)不良反應(yīng)。

3 討論

老年腫瘤患者身體機(jī)能差、器官功能退化、免疫功能下降，常常同事合并多個(gè)系統(tǒng)基礎(chǔ)疾病，導(dǎo)致對(duì)手術(shù)、化療等的耐受性差。CIK細(xì)胞是細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的T淋巴細(xì)胞，具有在體外快速增殖、非MHC限制的殺瘤活性，廣泛用于各種抗腫瘤治療[3]。DC細(xì)胞是人體功能強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，在機(jī)體預(yù)防外來(lái)病原均感染和腫瘤發(fā)生起重要作用。腫瘤患者體內(nèi)的DC細(xì)胞未能發(fā)育成熟能識(shí)別抗原但不具有遞呈能力的細(xì)胞，所以在體外誘導(dǎo)成熟后回輸給患者，從而啟動(dòng)抗原遞呈而發(fā)揮免疫效應(yīng)，以防腫瘤細(xì)胞的逃逸。

有文獻(xiàn)報(bào)道[4] DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)比CIK單獨(dú)培養(yǎng)殺瘤活性更強(qiáng)，且大大縮短培養(yǎng)時(shí)間。本研究采用DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞聯(lián)合細(xì)胞治療148例老年晚期惡性腫瘤患者，并觀(guān)察患者治療前后的腫瘤標(biāo)記物和免疫系統(tǒng)的變化規(guī)律，分析治療效果，評(píng)估期安全性。

從 DC-CIK細(xì)胞治療對(duì)患者的腫瘤標(biāo)記物和免疫系統(tǒng)的影響來(lái)看，治療前后腫瘤標(biāo)志物下降64.9%，免疫細(xì)胞數(shù)量提高明顯（P<0.05）。免疫球蛋白和相關(guān)細(xì)胞因子在免疫系統(tǒng)中也起著重要作用，在免功能變化評(píng)估中，本研究沒(méi)有進(jìn)行免疫球蛋白和相關(guān)細(xì)胞因子的檢測(cè)，在以后的工作中會(huì)逐步開(kāi)展。

通過(guò)療效觀(guān)察，回訪(fǎng)時(shí)患者治療后精神狀態(tài)佳，自我感覺(jué)良好。DC-CIK細(xì)胞治療后KPS評(píng)分提高的患者達(dá)到84.3%。綜上所述，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合治療惡性腫瘤具有廣泛的應(yīng)用前景，目前，DC-CIK細(xì)胞治療已經(jīng)取得較好的臨床治療效果，毒副作用低，安全性好，預(yù)防和減少惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，為一些對(duì)手術(shù)、放療、化療已無(wú)適應(yīng)癥的患者提供了一種提高免疫功能，緩解和減輕臨床癥狀，改善生活質(zhì)量和延長(zhǎng)患者生命的新途徑 [5]。

參考文獻(xiàn)：

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[2] Sangiolo D， Mesiano G， Carneval E-Schianca F， et al . Cytokine induced killer cells as adoptive immunotherapy strategy to augment graft versus tumor after hematopoietic cell transplantation. Expert Opin Biol Ther， 2009， 9： 831–840.

[3] Olioso P， GiancolA R， Di Riti M， et al . Immunotherapy with cytokine induced killer cells in solid and hematopoietic tumours： a pilot clinical trial. Hematol Oncol， 2009， 27： 130–139.

[4] Tao Yang， Ying Xiang， Yucheng Li，et al. Clinical study of co-treatment with DC-CIK cells for advanced solid carcinomas*. J Clinical Oncology（Chinese-German）2011， 10：354–359

[5] Zhong GC， Zhang XY， SunY，et al.Autologous tumor antibody-pulsed dendritic cells combined with cytokine -induced killer cells in the clini-cal treatment of lung adenocarcinoma. Tumor （Chinese）， 2010， 5： 395–400.