陳敬　錢振杰　潘亮等

摘要 [目的]建立乳制品中硫氰酸鹽含量測(cè)定的離子色譜方法。[方法]樣品溶液經(jīng)乙酸沉淀，去除蛋白質(zhì)及脂肪的干擾后，過(guò)濾裝瓶。采用Ion Pac AS11HC柱（4 mm×250 mm）對(duì)其進(jìn)行分離。以保留時(shí)間定性，試樣中硫氰酸根峰面積比與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。[結(jié)果]試驗(yàn)表明，硫氰酸鹽在0.1～2.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 6，添加回收率為92.0%～96.6%，變異系數(shù)分別為1.18%～2.28%，定量限為1.0 mg/kg。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)便、快速、可靠，可用于市售乳制品中硫氰酸鹽含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞 硫氰酸鹽；離子色譜；乳制品

中圖分類號(hào) S879.1；O657.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）20-06796-02

乳及乳制品中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如保存不當(dāng)極易滋生細(xì)菌導(dǎo)致酸敗，不但降低了原料乳的整體質(zhì)量，而且也影響了乳品的加工。為了延長(zhǎng)牛乳的保質(zhì)期，硫氰酸鹽作為保鮮劑曾被廣泛應(yīng)用于乳品行業(yè)之中[1]。研究表明，硫氰酸鹽在人體內(nèi)會(huì)釋放氰根離子，并和血液中的細(xì)胞色素氧化酶中的三價(jià)鐵離子結(jié)合，進(jìn)而抑制該酶的活性，使組織發(fā)生缺氧[2]。因此，長(zhǎng)期過(guò)量地?cái)z入硫氰酸鹽會(huì)對(duì)人體造成一定的傷害，近年來(lái)，國(guó)家已禁止其作為食品添加劑使用[3]。對(duì)乳制品中的硫氰酸鹽，目前有報(bào)道的測(cè)定方法主要為分光光度法[4]、氣相色譜法[5]、液相色譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、毛細(xì)管電泳法[8]及離子色譜法[9]等。其中，離子色譜作為新型陰離子檢測(cè)工具，具有靈敏、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，已引起廣泛的重視。筆者擬建立一種快速準(zhǔn)確測(cè)定乳與乳制品中硫氰酸鹽的分析方法，檢出限和穩(wěn)定性均應(yīng)可滿足日常檢驗(yàn)檢疫工作人員實(shí)施有效、快速和準(zhǔn)確監(jiān)管的需求。

1 材料與方法

1.1 材料 供試樣品為市售乳及乳制品。

主要試劑：硫氰酸鈉（CAS No.：540727，純度≥98.0%）、乙酸溶液（3%）、氫氧化鉀淋洗液（100 mmol/L），所有化學(xué)試劑均為分析純級(jí)，所有試驗(yàn)用水均為電阻率為18.2 MΩ·cm的超純水。硫氰酸根（SCN-）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1 000 mg/L）：準(zhǔn)確稱取硫氰酸鈉1.567 9 g，超純水溶解，定容至1 000 ml，于4 ℃冰箱保存；SCN-標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（100 mg/L）：取10.00 ml上述儲(chǔ)備液于100 ml容量瓶，定容搖勻使用。

主要儀器與設(shè)備：ICS1000離子色譜儀，配陰離子抑制器及電導(dǎo)檢測(cè)器，美國(guó)Dionex；MilliQ Advantage A10超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司；分析天平，感量為 0.1 mg和1 mg，德國(guó)Sartorius；3K15臺(tái)式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速≥10 000 r/min，配5 ml或10 ml離心管，德國(guó)sigma；KQ500DE超聲波清洗器，昆山舒美；C18凈化柱，0.22 μm水性濾膜針頭濾器，天津富集。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理。

稱取液體樣品試樣10 g或固體樣品試樣2.5 g（精確至0.01 g），置于100 ml容量瓶中，加水80 ml，搖勻，超聲30 min，加入3%乙酸溶液2 ml，于4 ℃放置20 min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過(guò)濾，取上清液備用。取上述備用的上清液約15 ml，通過(guò)已活化的C18柱和0.22 μm水性濾膜針頭濾器，棄去10 ml初濾液，收集后面洗脫液待測(cè)。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml置于容量瓶中，其他操作同“1.2.1”樣品前處理，按SCN-含量由低到高進(jìn)樣，以SCN-含量為橫坐標(biāo)，以SCN-峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)進(jìn)試樣溶液，根據(jù)保留時(shí)間定性，試樣的SCN-峰面積與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

1.2.3 儀器分析條件。

色譜柱：Ion Pac AS11HC色譜柱（4 mm×250 mm）及配套保護(hù)柱；流動(dòng)相：100 mmol/L氫氧化鉀溶液；進(jìn)樣量：20 μl；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；抑制器：ASRS300連續(xù)自動(dòng)再生膜陰離子抑制器；抑制電流：250 mA；檢測(cè)器溫度：35 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理?xiàng)l件的選擇

乳與乳制品中含有大量的油脂及蛋白質(zhì)，如果處理不好這些雜質(zhì)可能會(huì)對(duì)色譜柱造成很大的影響，導(dǎo)致柱效降低、色譜峰拖尾等現(xiàn)象發(fā)生，因此前處理手段顯得尤為重要。離子色譜法測(cè)定陰離子時(shí)，蛋白質(zhì)和脂肪的沉淀常采用2種方式進(jìn)行，其優(yōu)缺點(diǎn)如表1所示。該研究最終采用加入3%乙酸溶液2 ml來(lái)進(jìn)行蛋白質(zhì)的沉淀。

2.2 淋洗液濃度的選擇

試驗(yàn)分析了不同淋洗液濃度下SCN-的分離情況，如圖1所示。如果使用較低的淋洗液強(qiáng)度，雖然可以得到很好的分離效果，但是SCN-保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，峰形變差、分析時(shí)間也成倍增加；如果使用較高的淋洗液強(qiáng)度，則可以降低分析時(shí)間并仍具有滿意的分離效果。

圖1 不同淋洗液濃度下SCN-標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜

該研究最終選用淋洗液濃度為100 mmol/L的氫氧化鈉溶液為淋洗液，目標(biāo)物質(zhì)與乙酸沉淀劑可達(dá)到基線分離，硫氰酸鹽的保留時(shí)間為11.3 min，牛乳空白樣品色譜圖如圖2所示。

圖2 牛乳空白樣品溶液中SCN-色譜

2.3 干擾物質(zhì)的影響

考慮到除鮮乳外，可能還會(huì)涉及到其他類別的樣品測(cè)試，尤其是含乳飲料等，其基體復(fù)雜，可能含有多種陰離子及有機(jī)酸，該試驗(yàn)考察了濃度為10 mg/L的乙酸、乳酸、氯離子、硝酸根、硫酸根、磷酸根、檸檬酸7種常見(jiàn)陰離子及有機(jī)酸對(duì)SCN-檢測(cè)的影響。在所確定的試驗(yàn)條件下，以上幾種物質(zhì)不會(huì)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)測(cè)定造成干擾，色譜圖見(jiàn)圖3。

圖3 幾種常見(jiàn)陰離子及有機(jī)酸混合物色譜

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低檢出限

在規(guī)定色譜條件下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測(cè)定。在0.1～2.0 mg/L硫氰酸根含量范圍內(nèi)，回歸方程為y=7.396 4x+0.066 5，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6。按信噪比S/N=10計(jì)算，當(dāng)取樣量為10 g時(shí)，該方法的最低定量限為1.0 mg/kg。

2.5 精密度與添加回收試驗(yàn)

由于SCN-在牛乳中具有一定的本底值，故該試驗(yàn)以新鮮牛乳作為基質(zhì)，參考其本底值對(duì)SCN-標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行2.0、4.0、8.0 mg/kg 3個(gè)濃度水平的添加回收試驗(yàn)，每個(gè)添加水平重復(fù)測(cè)定3次，扣除樣品基體所含SCN-平均濃度計(jì)算添加回收率，回收率與精密度見(jiàn)表2。

3 結(jié)論

該研究建立了離子色譜測(cè)定乳制品中硫氰酸根的檢測(cè)方法，對(duì)檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。該方法快速、簡(jiǎn)便、選擇性和準(zhǔn)確性高，靈敏度和精密度也滿足實(shí)際工作需要，適用于乳與乳制品中硫氰酸鹽含量的測(cè)定。

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