陳妍純，尹煥苗，吳巖平

(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司，廣東 廣州510450)

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HPLC法測(cè)定保濟(jì)口服液浸膏二中厚樸酚、和厚樸酚含量研究

陳妍純，尹煥苗，吳巖平

(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司，廣東 廣州510450)

目的：建立HPLC法測(cè)定保濟(jì)口服液浸膏二中厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定方法。方法：色譜條件：菲羅門C18柱(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，柱溫為30 ℃，流動(dòng)相為甲醇-水(78∶22)，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為294nm。結(jié)果：厚樸酚、和厚樸酚的回歸方程為:厚樸酚Y=1.5264X-1.8032，r2=1.0000，線性范圍：4.168～1250.4μg;和厚樸酚Y=1.2620X+0.2406，r2=1.0000，線性范圍：2.43～729μg。平均回收率厚樸酚為100.12%，RSD=2.96%(n=6)，和厚樸酚為99.01%，RSD=1.85%(n=6)。結(jié)論：本法具有樣品處理簡(jiǎn)單、陰性樣品無(wú)干擾、重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性高等特點(diǎn)，能很好地提高保濟(jì)口服液浸膏二的質(zhì)量可控性。

HPLC；保濟(jì)口服液浸膏二；厚樸酚；和厚樸酚

厚樸是保濟(jì)口服液中的君藥，味苦性辛溫，具有燥濕清痰，下氣除滿的作用，厚樸酚、和厚樸酚是厚樸的有效成分[1]。保濟(jì)口服液浸膏二中含厚樸、鉤藤、蒺藜、菊花、廣東神曲四味藥材，提取浸膏后才與其它浸膏混合再制成口服液，現(xiàn)保濟(jì)口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于2010版《中國(guó)藥典》第二增補(bǔ)本，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有厚樸的薄層鑒別[2]，保濟(jì)口服液浸膏二作為保濟(jì)口服液的中間產(chǎn)品，內(nèi)控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也無(wú)含量測(cè)定方法。為更好地控制其質(zhì)量，我們建立了高效液相法測(cè)定保濟(jì)口服液浸膏二中厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定方法，實(shí)驗(yàn)表明，該方法操作簡(jiǎn)便快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，能很好地提高保濟(jì)口服液浸膏二的質(zhì)量可控性。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑和試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，Agilent色譜工作站。

1.2 試劑及試藥

甲醇(色譜純)，水(高純水)，厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品(中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院提供，供含量測(cè)定用)。

2 方法與結(jié)果

參照《中國(guó)藥典》一部厚樸藥材含量測(cè)定項(xiàng)下，經(jīng)DAD紫外光譜掃描，厚樸酚、和厚樸酚在294nm處有紫外吸收峰，選擇此為檢測(cè)波長(zhǎng)[3]。

2.1 色譜條件

色譜柱：菲羅門C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-水(78∶22)，流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：294nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：4μL，理論塔板數(shù)按厚樸酚計(jì)算應(yīng)不低于2 500。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1mL含厚樸酚40μg、和厚樸酚24μg的溶液，即得(見(jiàn)圖1)。

圖1 對(duì)照品溶液HPLC

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱定本品1g置10mL的容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻后，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得(見(jiàn)圖2)。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 去除保濟(jì)口服液浸膏二中的厚樸，按照保濟(jì)口服液浸膏二生產(chǎn)工藝制成陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制成厚樸陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法專屬性考察

在上述的色譜條件下，將供試品溶液(保濟(jì)口服液浸膏二)、厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品溶液、厚樸陰性對(duì)照溶液，注入液相色譜儀中，結(jié)果顯示陰性對(duì)照無(wú)干擾。

圖2 供試品HPLC

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取厚樸酚對(duì)照品0.010 42g、和厚樸酚對(duì)照品0.012 15g，制成含厚樸酚、和厚樸酚41.68mg/mL、24.30mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液0.1、1、4、10、20、30μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，求標(biāo)準(zhǔn)曲線、回歸方程及相關(guān)系數(shù)。以對(duì)照品量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖得回歸方程：厚樸酚Y=1.5264X-1.08032，r2=1.0000，線性范圍：4.168～1250.4μg；和厚樸酚Y=1.2620X+0.2406，r2=1.0000，線性范圍：2.43～729μg。

表1 厚樸酚、和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

2.5 精密度試驗(yàn)

取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品溶液4μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算得和厚樸酚峰面積平均值為：119.78，RSD%為0.33%，厚樸酚峰面積平均值為：247.74，RSD%為0.33%，結(jié)果顯示精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一樣品，按供試品溶液制備方法制備6份樣品溶液，測(cè)得平均含量為和厚樸酚0.577 7mg/g，RSD=1.69%，厚樸酚0.627 8mg/g，RSD=2.40%，結(jié)果顯示，重現(xiàn)性好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，依法測(cè)定，分別在0、2、5、12、16、21、35h，依法測(cè)定，厚樸酚平均含量為0.604 5mg/g、RSD%為1.11%，和厚樸酚平均含量為0.575 0mg/g、RSD%為0.74%，結(jié)果顯示，在35h內(nèi)，樣品溶液穩(wěn)定。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.8 回收率試驗(yàn)

取已知含量(厚樸酚0.627 8mg/g、和厚樸酚0.577 7mg/g)的保濟(jì)口服液浸膏二樣品0.5g，精密稱定，共6份，分別精密加入厚樸酚對(duì)照品溶液(濃度：0.416 8mg/mL)0.75mL、和厚樸酚對(duì)照品溶液(濃度：0.486 0mg/mL，按98.7%計(jì))0.6mL，按照供試品溶液制備方法制備供試液，分別精密吸取上述溶液各4μL注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表5、表6。

表5 厚樸酚回收率試驗(yàn)

表6 和厚樸酚回收率試驗(yàn)

2.9 樣品測(cè)定

取3批中試的樣品，按上述色譜條件制備供試品溶液，依法測(cè)定，分別計(jì)算供試品中和厚樸酚、厚樸酚含量，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 保濟(jì)口服液浸膏二中和厚樸酚、厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

厚樸用于治療濕滯傷中、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲咳喘等癥[4]，為保濟(jì)口服液的君藥，探討保濟(jì)口服液浸膏二中的主要成分厚樸酚、和厚樸酚，對(duì)保濟(jì)口服液的質(zhì)量控制具有重要意義。中國(guó)藥典(2010版)一部對(duì)厚樸藥材的含量測(cè)定采用浸漬24h[3]，筆者在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，曾用浸漬24h以及直接稀釋搖勻配制進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，證明直接稀釋搖勻配制和厚樸酚、厚樸酚已經(jīng)基本提取完全，確定了以此作為供試品的制備方法。采用HPLC法測(cè)定保濟(jì)口服液浸膏二中厚樸酚、和厚樸酚含量，該方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可作為保濟(jì)口服液浸膏二的質(zhì)量控制的指標(biāo)之一，同時(shí)也為在后續(xù)研究保濟(jì)口服液中厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定方法提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] 曾和平，曾志，楊定喬，等.保濟(jì)丸中厚樸酚濃度的HPLC法測(cè)定[J].華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2004，8(2)：90-91.

[2] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2013：63.

[3] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：235.

[4] 徐鎮(zhèn)軍.厚樸和厚樸習(xí)用品、混淆品及偽品的鑒別[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2008，6(5)：431.

(責(zé)任編輯：姜付平)

2014-02-15

陳妍純(1981-)，女，廣州王老吉藥業(yè)有限公司制藥工程師，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及管理。

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1673-2197(2014)09-0027-02