劉春富 ，李 衛(wèi) ，許 軍 ，宮金偉

（1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院普外科，黑龍江 哈爾濱 150001；2.哈爾濱市第一人民醫(yī)院骨科，黑龍江 哈爾濱 150001）

血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟［1］，目前所知血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是腫瘤血管生成過程中作用最強(qiáng)、特異性最高的促血管生長(zhǎng)因子。在大多數(shù)實(shí)體瘤組織中VEGF呈高水平表達(dá)，并與腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［2－3］。筆者以人類乳腺癌為觀察材料，應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)法，分析VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，以探討VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)與腫瘤臨床和病理的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2004年6月至2008年8月我院臨床醫(yī)院手術(shù)切除乳腺癌蠟塊標(biāo)本65例?；颊呔鶠榕?；年齡25～77歲，平均53歲；術(shù)前均未經(jīng)任何抗癌治療；乳腺癌按世界衛(wèi)生組織（WHO）1998年分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理分型，導(dǎo)管內(nèi)癌23例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌20例，髓樣癌10例，腺癌8例，濕疹樣癌2例，鱗狀細(xì)胞癌2例；組織學(xué)分級(jí)，Ⅰ級(jí)18例，Ⅱ級(jí)22例，Ⅲ級(jí)25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；腫瘤大小不超過3 cm 47例，大于3 cm 18例。每例標(biāo)本均收集其相應(yīng)的癌旁組織作對(duì)照組織。

1.2 材料與方法

應(yīng)用鏈霉素抗生素蛋白－過氧化酶（S－P）免疫組化技術(shù)檢測(cè)VEGF，每例標(biāo)本做4μm厚的切片，腫瘤切片進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，DAB顯色，并以PBS緩沖液代替第一抗體做陰性對(duì)照，以血管內(nèi)皮細(xì)胞著色為陽性對(duì)照。VEGF單克隆抗體購自上海長(zhǎng)嘉生物技術(shù)有限公司，S－P免疫組化試劑盒和DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 陰陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)［4］

以癌細(xì)胞胞漿或細(xì)胞核呈黃色或棕黃色為陽性，每張切片由2名病理醫(yī)師雙盲觀測(cè)5個(gè)具有代表性的高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，依據(jù)鏡下陽性染色細(xì)胞占癌細(xì)胞總數(shù)的百分率綜合判定。陰性（－）：無棕黃色染色或陽性細(xì)胞數(shù)平均少于10%；陽性（＋）：陽性細(xì)胞數(shù)平均大于10%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用 χ2檢驗(yàn)和相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

65例乳腺癌組織中VEGF陽性表達(dá)率為78.46%（51／65），VEGF陽性染色部位主要為細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，腫瘤周邊以陽性為主，侵襲緣尤為明顯（圖1）。詳見表1。

圖1 VEGF蛋白位于乳腺癌細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒陽性（×400）

表1 VEGF表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程，其中血管生成是癌腫物生長(zhǎng)中的一個(gè)重要事件，腫瘤在表現(xiàn)其生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為時(shí)與其中的微血管增生有密切關(guān)系，無論原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤，其持續(xù)生長(zhǎng)都必須依賴于新生血管的形成［5］。目前發(fā)現(xiàn)，VEGF是可以特異地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的一種多功能的細(xì)胞因子，可表達(dá)人體的多個(gè)正常組織及絕大多數(shù)的腫瘤組織［6］。VEGF作為腫瘤組織中最主要的促血管生成因子，不僅與乳腺癌血管發(fā)生和增殖有關(guān)，并直接與其浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)［7］。黃選東等［8］用免疫組化RT－PCR法和S－P法檢測(cè)42例乳腺癌和相應(yīng)正常乳腺組織中VEGF的表達(dá)，結(jié)果顯示，42例乳腺癌組織中VEGF陽性表達(dá)明顯高于正常乳腺組織。劉蘭芳等［9］認(rèn)為，VEGF的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)，隨著組織學(xué)分級(jí)的增高，VEGF陽性率也升高；李日樂等［10］采用免疫組化檢測(cè)VEGF在101例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示，乳腺癌組織中的VEGF表達(dá)與組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及早期死亡密切相關(guān)。劉鵬等［11］采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)109例乳腺癌組織中VEGF的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，VEGF強(qiáng)表達(dá)組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高及病理分級(jí)也高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，乳腺癌組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于其癌旁正常組織；Ⅲ級(jí)乳腺癌組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)乳腺癌組織，說明VEGF的表達(dá)與乳腺癌的分級(jí)密切相關(guān)。研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)VEGF表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中VEGF陽性表達(dá)率高，其原因可能是VEGF通過一系列復(fù)雜的機(jī)制誘導(dǎo)血管的形成，為腫瘤的生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)，從而促進(jìn)腫瘤體積增大。Ohta等［12］認(rèn)為，VEGF除了促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖外，對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞同樣具有促分裂和增殖作用，誘導(dǎo)“淋巴管生成”，有利于腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)淋巴管，促進(jìn)腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本試驗(yàn)結(jié)果表明，乳腺癌組織中的VEGF表達(dá)與腫瘤生長(zhǎng)和浸潤(rùn)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

綜上所述，VEGF可促進(jìn)乳腺癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，在乳腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移中起重要作用，檢測(cè)VEGF的表達(dá)可作為乳腺癌惡性程度、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的參考指標(biāo)。

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