周獻(xiàn)詞

(鎮(zhèn)江市句容黃梅社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 江蘇 鎮(zhèn)江 212426)

?

不同產(chǎn)地敗醬草中齊墩果酸、熊果酸含量測定

周獻(xiàn)詞

(鎮(zhèn)江市句容黃梅社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 江蘇 鎮(zhèn)江 212426)

目的：建立采用反相高效液相色譜法(HPLC)測定不同產(chǎn)地敗醬草中齊墩果酸、熊果酸含量，為控制敗醬草的質(zhì)量提供一定參考。方法：采用Hypersil ODS2 C18色譜柱，以乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)為流動相，檢測波長為215nm，流速為1mL/min，柱溫為室溫。結(jié)果：敗醬草中齊墩果酸在0.052～10.4μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r=0.9992)，平均回收率為99.4%，RSD為2.41%；熊果酸在0.048～9.6μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r=0.9994)，平均回收率為99.2%，RSD為2.16%。結(jié)論：使用反相高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地敗醬草中齊墩果酸、熊果酸的含量，具有簡便、快捷、重復(fù)性好等優(yōu)點，可用于不同產(chǎn)地敗醬草藥材中齊墩果酸、熊果酸的含量測定。

敗醬草；齊墩果酸；熊果酸；高效液相色譜法

敗醬草是多年生的草本植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味辛、苦，具有清熱解毒、祛瘀排膿等功效，在臨床應(yīng)用較為廣泛，質(zhì)量差異較大[1-2]。為控制藥材質(zhì)量，提高臨床療效，本文采用反相高效液相色譜(HPLC)法對不同產(chǎn)地敗醬草中齊墩果酸、熊果酸的含量進(jìn)行測定，為評價藥材質(zhì)量、合理選用藥材提供參考。

1 材料與儀器

1.1 材料

齊墩果酸對照品(中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110709-201206)；熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110742-201220)；乙腈(山東禹王試液有限公司禹成化工廠，色譜純，批號：201209060)；甲醇(上海振興化工一廠，色譜純，批號：201213104)；敗醬草藥材自購，其余試劑均為分析純。

1.2 儀器

超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)；Agilent 1200高效液相色譜儀(Agilent 1200色譜泵，Agilent 1200自動進(jìn)樣器紫外檢測器，Agilent 1200色譜工作站)；AL104/01電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；TG16-WS臺式高速離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Hypersil ODS2 C18色譜柱；齊墩果酸、熊果酸的色譜條件為：以乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)為流動相，檢測波長為215nm，流速為1mL/min，柱溫為室溫。

2.2 對照品溶液制備

精密稱定齊墩果酸、熊果酸對照品適量，均置于10mL量瓶中，加流動相溶解并定容，即得混合對照品，其中齊墩果酸的濃度為10.6μg/L，熊果酸的濃度為10.2μg/L，備用。

2.3 供試品溶液制備

取敗醬草原藥材，烘干，打成細(xì)粉(過20目篩)，取粉末1.0g，精密稱定，置于100mL具塞的錐形瓶中，加入甲醇30mL超聲(500W,40Hz)提取45min，放冷，補足減失的重量，靜置10min后濾過。精密量取續(xù)濾液1mL，置于10mL量瓶中，用甲醇適量定容，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液0.05、0.5、1、2、5mL置于10mL量瓶中，定容，吸取對照品溶液20μL，測定，以濃度(X)與峰面積(Y)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸得齊墩果酸曲線：Y1=1.8684X+6.3298，r=0.9993；熊果酸曲線：Y2=1.9231X+7.6523，r=0.9996。結(jié)果表明，齊墩果酸在0.053～10.6μg/L、熊果酸在0.051～10.2μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度實驗 取供試品溶液，在色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μL，測定齊墩果酸、熊果酸的峰面積。結(jié)果顯示，齊墩果酸的RSD值為1.98%，熊果酸的RSD值為2.16%，表明該方法的精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性實驗 取供試品溶液，在色譜條件下，每隔2h精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣7次，測定峰面積。結(jié)果顯示：齊墩果酸的RSD值為1.14%，熊果酸的RSD值為1.52%，表明供試品溶液中齊墩果酸、熊果酸在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性實驗 取同一批樣品，按照“2.3”項下方法平行制備5份供試品溶液，精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測定齊墩果酸、熊果酸的峰面積，計算含量。結(jié)果顯示，齊墩果酸的RSD值為1.42%，熊果酸的RSD值為1.19%，表明采用該方法測定敗醬草中齊墩果酸、熊果酸的含量，重現(xiàn)性良好。

2.4.5 加樣回收率實驗 精密稱取同一批已知含量的敗醬草藥材粉末(過20目篩)樣品6份，每份為0.2g，按比例加入齊墩果酸、熊果酸對照品，按照“2.3”項下方法制備溶液，溶液制備好之后，分別精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測定齊墩果酸、熊果酸的峰面積，計算回收率。結(jié)果顯示：齊墩果酸的回收率為99.6%，RSD值為2.26%，熊果酸的回收率為99.1%，RSD值為2.11%，表明該方法的回收率符合含量測定基本要求。

2.4.6 含量測定 按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照色譜條件測定6個不同產(chǎn)地敗醬草樣品中齊墩果酸、熊果酸的峰面積，按照回歸方程，計算含量，結(jié)果見表1。

表1 不同產(chǎn)地敗醬草中齊墩果酸、熊果酸的含量 (%)

3 討論

已有文獻(xiàn)報道[3]，敗醬草中含有白花敗醬甙、莫羅忍冬甙、番木鱉甙等化學(xué)成分，具有鎮(zhèn)靜、保肝利膽、抗病原微生物、抗癌等作用，臨床主要與其它中藥材合理配伍，用于治療肺癰、腸癰、產(chǎn)后血、腹中刺痛等疾病。因市場對敗醬草需求的日益增大，原有的資源已不能滿足臨床需求，為解決藥材資源緊缺的狀況，人工種植敗醬草的規(guī)模逐步增大，但因各地的種源、氣候、管理等不同，導(dǎo)致不同產(chǎn)地敗醬草的質(zhì)量差異比較大[4]。

齊墩果酸、熊果酸屬三萜皂苷類化合物，其吸收位于紫外吸收的末端，故吸收波長采用215nm，同時對提取條件及流動相進(jìn)行篩選，最終確定了含量測定條件[5]。通過對6個不同產(chǎn)地敗醬草的含量測定發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸、熊果酸的含量差異比較大，可能與各地的種源、氣候、管理等不同有關(guān)，故臨床應(yīng)選用符合要求的敗醬草，以提高臨床治療效果。

[1] 楊東輝,魏璐雪,蔡少青,等.黃花敗醬根及根莖化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志,2000,25(1):39-41.

[2] 馮京,王麗莉,張鐵軍.HPLC同時測定藏藥花錨中齊墩果酸和熊果酸含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(23):79-81.

[3] 楊柳,姜海,王雪瑩,等.黃花敗醬草化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥信息,2012,29(4):169-172.

[4] 張一芳,周淑琴,杜文煒.敗醬草藥材高效液相色譜指紋圖譜鑒別研究[J].中國藥業(yè),2011,20(12):25-26.

[5] 毛紅梅,平欲暉,宗星星,等.HPLC同時測定敗醬草中常春藤皂苷元、齊墩果酸和熊果酸的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2012,18(15):89-92.

(責(zé)任編輯：余 婷)

2014-03-14

周獻(xiàn)詞(1973-)，男，江蘇省鎮(zhèn)江市句容黃梅社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心主管中藥師，研究方向為中藥學(xué)。

R284.2

A

1673-2197(2014)12-0032-01