喜賀熱 崔永強

151株血培養(yǎng)分離菌的分布及耐藥性分析

喜賀熱 崔永強

目的 了解我院血培養(yǎng)分離病原菌的分布及耐藥情況。方法收集2012年6月-2013年12月我院門診及住院患者的1178份血液標(biāo)本，采用Bact／Alert-3D全自動血培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)，陽性標(biāo)本采用VITEK-COMPACT2全自動細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行菌種鑒定，采用K-B法及VITEK-COMPACT2定量MIC藥敏分析系統(tǒng)進(jìn)行藥敏試驗，并采用WHONET 5.4軟件對菌種檢出情況及耐藥情況進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果1178份血液標(biāo)本中共分離出病原菌151株，分離率為12.8%。151株病原菌中，革蘭陰性菌97株（64.2%），革蘭陽性菌49株（32.5%），真菌5株（3.3%）。97株革蘭陰性菌中，分離率在前三位的為大腸埃希菌（39株，25.8%）、肺炎克雷伯菌（25株，16.6%）和馬耳他布魯菌（15株，9.9%）；49株革蘭陽性菌中以金黃色葡萄球菌（24株，15.9%）和表皮葡萄球菌（8株，5.3%）為主，真菌多為白色念珠菌（4株，2.6%）。39株大腸埃希菌和25株肺炎克雷伯菌中，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extended spectrum betalactamases，ESBLs）的菌株分別為18株（46.2%，18／39）和8株（32.0%，8／25）；24株金黃色葡萄球菌中，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢出率為50.0%（12／24）。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對慶大霉素、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率在40.0%以上，金黃色葡萄球菌對慶大霉素、哌拉西林／他唑巴坦、頭孢西丁和紅霉素的耐藥率在41.7%以上。結(jié)論我院血培養(yǎng)分離菌以革蘭陰性桿菌居多，其中馬耳他布魯菌偏多是因為本地區(qū)牧民較多所致，分離病原菌的耐藥情況嚴(yán)重，臨床醫(yī)師應(yīng)根據(jù)細(xì)菌鑒定及藥敏試驗選擇敏感藥物治療。

血培養(yǎng)；分離菌；抗生素；耐藥性

當(dāng)病原微生物通過各種途徑進(jìn)入血液，并通過血液播散至全身時，可引起各種臨床癥狀如菌血癥，若不及時救治，可能危及患者生命。因此，及時檢出血液中的病原微生物，對血液感染的診斷、治療及預(yù)后有重要的臨床意義。血培養(yǎng)分離菌的分布及耐藥性分析可以更好地幫助指導(dǎo)臨床科學(xué)合理用藥，及時治愈患者。本文對我院近年來收集的血液標(biāo)本進(jìn)行回顧性分析，為院內(nèi)感染控制及本地區(qū)菌種分布情況提供實驗室依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集我院2012年6月-2013年12月門診及住院患者的血液標(biāo)本1178份，剔除同一患者相同部位的重復(fù)菌株，采用全自動血培養(yǎng)儀進(jìn)行分離培養(yǎng)，共分離出151株病原菌。

1.2 儀器與試劑采用Bact／Alert-3D全自動血培養(yǎng)儀及其配套專用培養(yǎng)瓶（法國生物-梅里埃公司生產(chǎn)）和VITEK-COMPACT2全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)（法國生物-梅里埃公司生產(chǎn)）進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)及鑒定。血平板、麥康凱平板、巧克力平板、M-H平板、念珠菌顯色平板均購自法國生物梅里埃公司。藥敏紙片阿莫西林／棒酸、復(fù)方新諾明、頭孢曲松、頭孢西丁、氨芐西林／舒巴坦、頭孢吡肟、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、慶大霉素、亞胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、左氧氟沙星、阿米卡星、紅霉素、氯霉素、苯唑西林、萬古霉素、頭孢他啶及克林霉素均購自英國Oxoid公司和美國BD公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集當(dāng)患者發(fā)熱（≥38℃）或低體溫（≤36℃），或外周血白細(xì)胞計數(shù)超過10×109／L（特別是存在核左移時），或絕對粒細(xì)胞值降低（成熟中性粒細(xì)胞計數(shù)少于1×109／L），或合并有明顯感染癥狀體征、伴有感染病灶存在時，即進(jìn)行無菌采集血液，成人采血量為10～15ml、兒童采血量為1～5ml，注入血培養(yǎng)專用瓶內(nèi)，混勻后立即送檢。

1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)及分離全自動血培養(yǎng)儀培養(yǎng)5 d未報警且轉(zhuǎn)種培養(yǎng)皿觀察無細(xì)菌生長者視為陰性；血培養(yǎng)儀顯示陽性標(biāo)本則轉(zhuǎn)種血平板和麥康凱平板，必要時轉(zhuǎn)種巧克力平板或念珠菌顯色平板，置于35℃，5%～10%的CO2培養(yǎng)箱孵育24-48 h后觀察菌落形態(tài)，并同時涂片行革蘭染色鏡檢，將鏡檢結(jié)果報告臨床醫(yī)生（初報）。

1.3.3 菌株鑒定與藥敏試驗采用VITEK-COMPACT2系統(tǒng)和API鑒定細(xì)菌，藥敏分析采用K-B紙片擴(kuò)散法和VITEK-COMPACT2定量MIC藥敏分析系統(tǒng)。K-B法用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)直徑，參照CLSI2011版標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果。

1.3.4 質(zhì)量控制質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸埃希菌ATCC 25922和銅綠假單胞菌ATCC 27853，均購自衛(wèi)生部臨檢中心。每次藥敏試驗應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)菌株和待測菌株在同一條件下進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈應(yīng)在CLSI2011版允許的預(yù)期范圍內(nèi)。

1.3.5 產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extended spectrum beta-lactamases，ESBLs）確證試驗及結(jié)果判讀雙紙片協(xié)同擴(kuò)散法，用頭孢他啶＋阿莫西林／棒酸＋頭孢噻肟，其中一側(cè)發(fā)生協(xié)同擴(kuò)散則為ESBLs陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用WHONET 5.4軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計，計算各菌種的株數(shù)、分離率和耐藥率。

2 結(jié)果

2.1 血培養(yǎng)陽性分離菌的菌種分布1178份血液標(biāo)本中，經(jīng)血培養(yǎng)分離出病原菌151株，分離率為12.8%，其中革蘭陰性菌97株（64.2%），革蘭陽性菌49株（32.5%），真菌5株（3.3%）。革蘭陰性菌中，分離率最高的為大腸埃希菌（39株，25.8%），其次為肺炎克雷伯菌（25株，16.6%）和馬耳他布魯菌（15株，9.9%）。革蘭陽性菌中，分離率最高的為金黃色葡萄球菌（24株，15.9%）和表皮葡萄球菌（8株，5.3%），見表1。

表1 151株病原菌的菌種分布情況（%）

2.2 血培養(yǎng)常見革蘭陰性菌的藥敏試驗結(jié)果39株大腸埃希菌耐藥率最高的是慶大霉素和環(huán)丙沙星，均為64.1%；耐藥率最低的為亞胺培南（2.6%）。25株肺炎克雷伯菌耐藥率最高的為慶大霉素和左氧氟沙星，均為48.0%；耐藥率最低的為氯霉素和亞胺培南，均為4.0%，見表2。

表2 血培養(yǎng)常見革蘭陰性菌對抗生素的耐藥率［n（%）］

2.3 血培養(yǎng)常見革蘭陽性菌的藥敏試驗結(jié)果24株金黃色葡萄球菌耐藥率最高的為哌拉西林／他唑巴坦（58.3%），而對氯霉素未出現(xiàn)耐藥情況，即敏感率為100.0%，見表3。

表3 血培養(yǎng)常見革蘭陽性菌對抗生素的耐藥率（%）

2.4 產(chǎn)ESBLs菌株的檢出率在39株大腸埃希菌中，檢出產(chǎn)ESBLs菌株為18株，檢出率為46.2%；在25株肺炎克雷伯菌中檢出產(chǎn)ESBLs菌株8株，檢出率為32.0%。

2.5 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcusaureus，MRSA）的檢出率在24株金黃色葡萄球菌中，檢出MRSA為12株，檢出率為50.0%。

3 討論

我院2012年6月-2013年12月送檢的1178株血培養(yǎng)標(biāo)本中，分離出病原菌151株，分離率為12.8%，與國內(nèi)多家醫(yī)院報道［1-3］相似。151株血培養(yǎng)分離菌中，分離率排名前五位的分別為大腸埃希菌（25.8%）、肺炎克雷伯菌（16.6%）、金黃色葡萄球菌（15.9%）、馬耳他布魯菌（9.9%）和表皮葡萄球菌（5.3%），與文獻(xiàn)［4，5］報道的排名前5位的病原菌有差異，本文研究中馬耳他布魯菌的檢出率較高，而其他地區(qū)該菌的檢出率很低，這與內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的報道［6］相近。產(chǎn)生這種差異的主要原因是內(nèi)蒙古地區(qū)發(fā)展畜牧業(yè)的人群較多，而布魯菌的傳播途徑有兩種，一是通過血液，二是通過呼吸道，如果皮膚有傷口且沒有完全愈合時接觸了患病牲畜的血液，就會感染；另外，患病牲畜的皮屑和毛發(fā)被人類吸入呼吸道，也會引起感染，所以本地區(qū)人群感染布魯菌的概率較大。

大腸埃希菌是臨床感染中最常見的革蘭陰性桿菌，也是醫(yī)院常見的病原菌，可引起人體各部位的感染，其中以尿路感染為主，還可引起菌血癥、肺炎、新生兒腦膜炎、膽道感染、手術(shù)后腹腔感染及灼傷創(chuàng)面感染等。肺炎克雷伯菌也是醫(yī)院感染條件致病菌之一，由該菌引起的感染日益增多，其為革蘭陰性桿菌，可引起典型的原發(fā)性肺炎，也可引起各種肺外感染，包括嬰兒腸炎和腦膜炎、成人醫(yī)源性泌尿道感染、外傷感染和菌血癥。金黃色葡萄球菌為醫(yī)院感染中常見的革蘭陽性球菌，其毒力最強，能產(chǎn)生各種侵襲性酶及毒素，培養(yǎng)菌落中有明顯的溶血環(huán)，可引起全身各部位的感染，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染和菌血癥等，也是醫(yī)院交叉感染的重要來源。

大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對慶大霉素、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率在40.0%以上，對氯霉素、亞胺培南和頭孢吡肟均較為敏感（敏感率大于90%）。在革蘭陰性桿菌中，隨著三代頭孢菌素的臨床應(yīng)用，大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的廣譜酶TEM-1和SHV-1很快發(fā)生改變，形成ESBLs，從而使細(xì)菌的耐藥譜從青霉素、窄譜頭孢菌素擴(kuò)大到青霉素、窄譜和廣譜頭孢菌素以及單環(huán)類藥物，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌不論其體外藥物敏感試驗結(jié)果如何，臨床治療中對青霉素、頭孢菌素和氨曲南治療均無效，因此檢測產(chǎn)ESBLs菌株的檢出率非常重要。本文研究中，大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs菌株的檢出率分別為46.2%和32.0%，與文獻(xiàn)［7］報道差異不大。

分離出的布魯菌一般不做藥敏試驗，臨床治療需要長時間的抗生素治療，一般首選利福平和多西環(huán)素聯(lián)合使用，或四環(huán)素與利福平聯(lián)用。

本文研究結(jié)果顯示，分離出的24株金黃色葡萄球菌對慶大霉素、哌拉西林／他唑巴坦、頭孢西丁和紅霉素的耐藥率均在41.7%以上，其中MRSA的檢出率為50.0%，與文獻(xiàn)［8］報道的46.0%基本相符。對于MRSA，不論其體外藥敏試驗結(jié)果如何，所有的β-內(nèi)酰胺類藥物和β-內(nèi)酰胺／β-內(nèi)酰胺酶抑制劑均顯示臨床無效。

綜上所述，我院血培養(yǎng)分離病原菌的菌種分布較廣泛，近年來，由于廣譜抗生素的濫用，血培養(yǎng)分離菌對常用抗菌藥物的耐藥情況仍十分嚴(yán)重，通過對血培養(yǎng)分離菌分布和耐藥情況及時的監(jiān)測，來合理應(yīng)用抗菌藥物，進(jìn)行針對性的治療，以減少耐藥菌的產(chǎn)生，對挽救患者生命和提高診療水平起著重要的作用。

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Distribution and antim icrobial resistanceanalysisof151 strains isolated from blood

XI He-re1，CUI Yong-qiang2.1DepartmentofClinical Laboratory，Bayannaoer Hospital，Bayannaoer015000，China2DepartmentofClinical Laboratory，Bayannaoer Central Blood Stations，Bayannaoer015000，China

ObjectiveTo investigate the distribution and drug resistance of blood culture isolated bacteria in ourhospital.Methods1178 strainsblood samplewere collected in ourhospital from June 2012 to December 2013.Blood sample were cultivated by the Bact／Alert-3D automatic blood culture system.The positive strainswere identified by VITEK-COMPACT2 automatic bacterial identification instrument.The drug sensitivity testwere detected by K-B method and VITEK-COMPACT2 quantification MIC drug sensitivity analysis system.All data were analyzed by WHONET 5.4 software.Results151 strains of bacteria were isolated from 1178 blood samples，and the isolated rate was 12.8%.In 151 strains of bacteria，the gramnegative bacteriawas 97 strains（64.2%），gram-positive bacteriawas 49 strains（32.5%），and fungiwas 5 strains（3.3%）.In 97 strains of gram-negative bacteria，isolated rates of top threewere Escherichia coli（39 strains，25.8%），Klebsiella pneumoniae（25 strains，16.6%）and Brucellamelitensis（15 strains，9.9%）.In 49 strainsofgram-positivebacteria，isolated ratesof top twowere Staphylococcusaureus（24 strains，15.9%）and Staphylococcusepidermidis（8 strains，5.3%）.Themostly of fungiwereCandida albicans（4 strains，2.6%）.In 39 strains of Escherichia coli and 25 strainsKlebsiella pneumoniae，isolated rate of extended spectrum betalactamases were 46.2%（18／39）and 32.0%（8／25），respectively.In 24 strains ofStaphylococcus aureus，isolated rate of methicillin-resistantStaphylococcus aureuswas 50.0%（12／24）.The resistant rates of Escherichia coli andKlebsiella pneumoniaeto gentamicin，levofloxacin and ciprofloxacin were over 40.0%，and resistant rates ofStaphylococcus aureusto gentamicin，piperacillin／tazobactam，cefoxitin and erythromycin were over 41.7%.ConclusionThe gram-negative bacteria aremajority in the blood culture isolated bacteria.The mroe herdsman in our region result in the much moreBrucella melitensis.The drug resistance is serious，clinicians should be based on the identification of bacteria and drug sensitivity test to selectsensitive drugs.

Blood culture；Bacteria；Antibiotics；Drug resistance

10.3969／j.issn.1674－7151.2014.04.010

2014-06-19）

（本文編輯：李霦）

015000 巴彥淖爾市，巴彥淖爾市醫(yī)院檢驗科（喜賀熱）

015000 巴彥淖爾市，巴彥淖爾市中心血站（崔永強）