呂興萍， 胡容峰， 葉 蕾， 丁領振

（1.安徽中醫(yī)學院， 安徽合肥 230038； 2.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術學院，江蘇 鎮(zhèn)江 212400）

高效液相色譜法測定六味地黃丸的溶出度

呂興萍1，2， 胡容峰1*， 葉 蕾1， 丁領振1

（1.安徽中醫(yī)學院， 安徽合肥 230038； 2.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術學院，江蘇 鎮(zhèn)江 212400）

目的 建立以丹皮酚、 馬錢苷為指標成分， 測定六味地黃丸溶出度的方法。 方法 照 《中國藥典》 2010 年版二部溶出度測定法中的小杯法， 以 200 mL脫氣人工胃液 （ 無酶） 為溶出介質(zhì)， 轉(zhuǎn) 速 100 r/min， 溫度 （37.0 ± 0.5） ℃。 采用高效液相色譜法外標法定量， Hypersil C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） ； 流動相 A為 0.05%磷酸溶液， B為乙腈梯度洗脫； 體積流量 1.0 mL/min； 檢測波長為 234 nm （馬錢苷）、 274 nm （丹皮酚）。 結(jié)果 丹皮酚、馬錢苷分別在 4.03 ～36.27 μg/mL（r=0.999 4）、 3.02 ～27.18 μg/m L（r=0.999 5） 范圍內(nèi)呈良好線性關系， 平均回收率分別為 99.60%、 98.47%， RSD分別為 1.51%、 1.82%。 結(jié)論 本方法簡便可靠， 精密度高， 重復性好， 可用于六味地黃丸溶出度的測定。

六味地黃濃縮丸；高效液相色譜；溶出度

六味地黃丸是被譽為 “補陰方藥之祖” 六味地黃方的一種制劑，由熟地黃、山藥、山茱萸、牡丹皮、澤瀉、茯苓六味中藥組成，千百年來受到廣大醫(yī)家和患者的推崇［1］。 溶出度是模擬口服固體制劑在胃腸道崩解和溶出的體外試驗方法，不僅能反應丸劑的質(zhì)量情況還能反應體內(nèi)的吸收和藥效情況，因此建立溶出度的測定方法具有一定意義?，F(xiàn)行版藥典中尚未收載對六味地黃丸的溶出考察［2］， 另外到目前為止只有極少數(shù)關于六味地黃丸溶出度研究的報道， 且都是針對單一成分的考察［3-6］。 本實驗是在參考文獻［7-11］基礎上采用高效液相色譜法以代表性水溶性成分馬錢苷［12-14］和代表性難溶性成分丹皮酚［15-16］為指標測定了六味地黃丸的體外溶出度，為評價和控制六味地黃丸的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

六味地黃丸 （1071071， 北京同仁堂）， 丹皮酚對照品（paeonol， 中國藥品生物制品檢定所提供， 批號為 110708-200506） ； 馬錢苷對照品 （ loganin， 中國藥品生物制品檢定所提供， 批號 111640-201005）； 乙腈為色譜純； 島津 LC-10ATvp 高效液 相 色 譜 儀， Agilent 1100 高 效 液 相 色 譜 儀 及其工作站， 浙 江 智 達 N2000 工 作 站； Hypersil C18（ 5μm，250mm×4.6mm） 色譜柱， ZRS-8G智能溶出試驗儀 （ 天津大學無線電廠） ； 十萬分之一電子天平 （ 德國 Sartorius公司）； TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計 （北京普析通過儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 流動相 A為 0.05%磷酸溶液， B為乙腈，梯度洗脫 0 ～15 min， 86%A； 15 ～40 min， 50%A。 柱溫25 ℃， 體積流量 1.0 mL/min， DAD檢測器， 馬錢苷檢測波長為 234 nm， 丹皮酚為 274 nm。 在上述色譜條件下， 取對照品和樣品溶出液進樣，結(jié)果表明兩個成分能與其他成分達到較好的分離， 且理論塔板數(shù)均大于3 000， 結(jié)果見圖1、 圖2。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取丹皮酚對照品 4mg、 馬錢苷對照品3mg， 分別置于 100mL量瓶中， 加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液 參照 《中國藥典》 2010 年版二部溶出度測定法 （附錄 XC第三法）， 以 200 mL 0.1 mol/L HCl為釋放介質(zhì)， 轉(zhuǎn)速 100 r/m in， 溫度 （37.0 ±0.5）℃。 分別于一定時間點取樣5 mL（每次取樣結(jié)束補充同溫同體積的釋放介質(zhì)）， 用 0.45 μm微孔濾膜過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液。

圖1 對照品的色譜圖

圖2 六味地黃丸溶出液的色譜圖

2.3 線性關系的考察 精密吸取丹皮酚對照品貯備液 1、3、 5、 7、 9mL和馬錢苷對照品貯備液 1、 3、 5、 7、 9 mL分別置于 10 mL量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度， 進樣 20 μL， 測定峰面積， 以峰面積 A為縱坐標， 質(zhì)量濃度 C為橫坐標進行線性回歸，得兩成分的的回歸方程及相關系數(shù)，見表1。

表1 各組分線性關系測定結(jié)果

2.4 精密度試驗 取丹皮酚和馬錢苷混合標準溶液連續(xù)進樣 6 次， 每次 20 μL。 結(jié)果： 丹皮酚的 RSD為 0.67%， 馬錢苷的 RSD為 1.11%。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取溶出時間為 4 h 的六味地黃丸的溶出液于0、 1、 2、 4、 8、 12 h 進樣測定。 結(jié)果： 丹皮酚的 RSD為 0.96%， 馬錢苷的 RSD為 1.99%。

2.6 加樣回收率試驗 精密稱定已知含有量的六味地黃丸粉6份 ，分別精密稱定加入丹皮酚、馬錢苷對照品，分別置于50mL量瓶中， 加甲醇充分溶解并稀釋至刻度， 過濾，取續(xù)濾液1mL加甲醇稀釋至10mL， 混勻， 取20 μL進樣，測定峰面積，根據(jù)回歸方程計算馬錢苷和丹皮酚的量及回收率。 結(jié)果見表2、 表3。

表 2 丹皮酚加樣回收試驗結(jié)果 （n=6）

表 3 馬錢苷加樣回收試驗結(jié)果 （n=6）

2.7 溶出度的測定 取已知樣品含量 （按 《中國藥典》丹皮酚和馬錢苷項下含量測定方法測定） 的樣品8丸6份，進行實驗。 按 “2.2.2” 項下操作， 分別于 2、 4、 6、 12、24 h 取 樣 5 mL， 用 0.45 μm微孔濾 膜過濾， 隨 即補 充 等 量的溶出介質(zhì)， 取續(xù)濾液 20 μL進樣， 測定峰面積， 求算藥物質(zhì)量濃度并換算成不同時間的累積溶出百分率，取平均值。 各時間點均獲得滿意結(jié)果， 結(jié)果見表4。

表4 樣品測定結(jié)果 （n=6）

3 結(jié)論與討論

六味地黃丸為一中藥復方制劑，是通過中藥中多種成分的共同或協(xié)調(diào)作用起效的，且各成分間理化性質(zhì)差異大，釋放情況各不相同，所以在本實驗中分別以丹皮中難溶性成分丹皮酚、山茱萸中水溶性成分馬錢苷為指標成分，建立了六味地黃丸的溶出度測定方法。從實驗結(jié)果可以看出，各成分分離效果好，方法簡單、準確，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性強，可以作為六味地黃丸的溶出度測定方法。

在本實驗中檢測波長的選擇是分別取丹皮酚和馬錢苷對照品貯備液于200 ～400 nm之間掃描， 結(jié)果丹皮酚在274 nm波長處有最大吸收， 馬錢苷在 234 nm波長處有最大吸收， 故選擇274 nm為丹皮酚的測定波長， 234 nm為馬錢苷的測定波長。

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R927

： B

： 1001-1528（2014）03-0652-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.050

2013-02-12

國家自然科學基金資助項目 （81173556）

呂興萍 （1981—） ， 女， 講師， 碩士生， 研究方向： 中藥新劑型。 Tel：（0511）87290303， E-mail： xingping8702007@sohu.com

*通信作者： 胡容峰， 女， 教授， 碩士生導師， 研究方向： 中藥新劑型與新制劑。 Tel：（0551）5169225， E-mail： hurongfeng@163.com