逄世峰， 許世泉， 崔麗麗， 孫成賀， 張 浩， 王英平（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所， 吉林 長春 130112）

加糖紅參對生脈飲質(zhì)量的影響

逄世峰， 許世泉， 崔麗麗， 孫成賀， 張 浩， 王英平*（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所， 吉林 長春 130112）

目的 研究加糖紅參對生脈飲中有效成分的影響。方法 采用高效液相色譜法，比較不同加糖量紅參制得生脈飲制劑中人參皂苷 Rg1、 Re、 Rb1、 五味子醇甲、 五味子醇乙、 五味子甲素、 五味子乙素的量。 結(jié)果 加糖紅參生脈飲中人參皂苷和五味子木脂素類成分含有量均低于正常紅參生脈飲，并隨加糖量增加相應(yīng)減少。結(jié)論 當(dāng)紅參加糖量超過 10%時(shí)， 即對生脈飲質(zhì)量造成顯著影響。

生脈飲；加糖紅參；人參皂苷；木脂素；高效液相色譜

生脈飲為 《中國藥典》 2010 年版一部 “成方制劑和單味制劑”項(xiàng)下收載品種［1］， 由紅參、 麥冬、五味子組成，具有益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津之功效，是治療氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗等疾病常用中成藥之一。

為改善參口味，延長保質(zhì)期，增加參質(zhì)量，市場上紅參普遍加糖，有說法 “中藥紅參被曝約兩成加糖，加糖紅參增重兩成”。然而，加糖后無法判斷紅參是水煮還是水蒸，而水煮會使參的功效降低［2］。

紅參為生脈飲方中君藥［3］， 加糖紅參勢必對生脈飲質(zhì)量造成一定影響，本實(shí)驗(yàn)研究不同加糖量對生脈飲質(zhì)量的影響，探討加糖紅參危害程度，為中藥制劑生脈飲提供可靠質(zhì)量評價(jià)依據(jù)。

1 儀器、 試劑和材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀 ( 島津 LC-10A)，SPD-M10A二極管陣列檢測器；DHG-9145A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海一恒科技有限公司)； 電子天平 (上海梅特勒 -托利多儀器有限公司)； HH-6 型數(shù)顯恒溫水浴鍋 (常州澳華儀器有限公司)；SK8200H超聲波清洗器 (上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 乙腈為色譜純， 水為超純水， 其他試劑均為分析純。五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、 五味子乙素、 人參皂苷 Rg1、 Re、Rb1均購自中國藥品生物制品檢定所。

1.3 材料 人參購自吉林省撫松縣； 麥冬購自康美藥業(yè)股份有限公司；五味子購自吉林省通化縣。以上藥材經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所藥用植物研究室許世泉副研究員鑒定， 分別為人參 Panax ginseng C.A.Mey的干燥根、 麥冬 Ophiopogon japonicus(thunb.)ker-Gawl. 的 干 燥 塊 根、 五 味 子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill的干燥果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 紅參制備

2.1.1 正常紅參［4-5］取大小相近鮮人參若干， 去須， 洗凈后， 蒸制 4 h， 70 ℃下烘 8 h，隨后在50℃下徹底烘干， 即得。

2.1.2 加糖紅參［6］取紅參 90 支， 隨機(jī)分 成 3組， 每組 30 支， 分別稱重； 取各組質(zhì)量 10%、20%、40%蔗糖分別溶解于 2 000 mL水中， 制成糖水； 取各組紅參于相應(yīng)糖水中浸泡 48 h， 50 ℃下徹底烘干，即得。

2.2 生脈飲制備［7-8］取紅參 100 g， 麥冬 200 g，五味子 100 g，分別粉碎成粗粉， 用 65%乙醇作溶劑， 浸漬 24 h 后進(jìn)行滲漉， 收集滲漉液約 4 500 m L， 減壓濃縮至 250 mL， 放冷， 加水 400 mL稀釋， 濾過， 另加60%糖漿300 m L及1 g苯甲酸鈉，并調(diào)節(jié) pH值至8，加水至1 000 mL， 攪勻， 靜置，濾過，灌封，滅菌，即得。

2.3 不同生脈飲制品中人參皂苷測定

2.3.1 色譜條件［9］Agilent SB-C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm， 5 μm)，流動(dòng)相為 0.1%甲酸乙腈溶液 (A)-0.1% 甲 酸 水 溶 液 (B) 梯 度 洗 脫(0 ～20 min， 19% ～23%A； 20 ～30 min， 23% ～25%A； 30 ～35 min， 25% ～26%A； 35 ～40 min，26% ～36%A；40 ～45 min， 36% ～42%A； 45 ～50 min， 42% ～19%A)， 體積流量 1mL/min， 檢測波長為203 nm， 柱溫30 ℃， 進(jìn)樣量 10 μL。 見圖 1。

圖1 混合對照品 （A） 及生脈飲樣品 （B） HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances and ShengmaiOral Liquid sample

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1對照品適量，置于 10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3.3 供試品溶液制備［10］精密量取生脈飲溶液10mL，加20mL水稀釋，混勻， 轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加乙醚萃取3次，棄去乙醚層，正丁醇萃取4次，每次 50 mL， 合并正丁醇層， 用 0.1 mol/L NaOH洗滌正丁醇層 2 次， 每次30 m L， 蒸干正丁醇， 甲醇定容至 10 mL。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取對照品溶液 20、50、 100、 200、 400 μL， 分別置于 10 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度稀釋成一系列質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，在上述色譜條件下，注入超高效液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線， 得 Rg1、 Re、 Rb1回 歸 方 程 分 別 為: Y=4.3104 ×10-6X-0.029 7(r2=0.999 3)、 Y= 2.427 2 ×10-6X+0.018 9(r2=0.999 5)、 Y= 4.687 7 ×10-6X-0.009 6(r2=0.999 6)。 結(jié)果表明: 人參皂苷 Rg1在 0.338 ～6.76 μg， 人參皂苷Re在 0.182 ～3.64 μg， 人參皂苷 Rb1在 0.246 ～4.92 μg范圍內(nèi)均呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1的 RSD 分 別 為 0.85、 0.76%、0.58%。 結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于 0、4、 8、 12 h 按上述色譜條件進(jìn)樣測定， 以峰面積計(jì) 算 人 參 皂 苷 Rg1、 Re、 Rb1的 RSD 分 別 為1.81%、 1.92%、1.71%， 結(jié)果表明樣品在 12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按 “2.3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下分別進(jìn)行 HPLC分析， 計(jì)算人參皂苷 Rg1、Re、 Rb1峰面積的 RSD分別為 3.38%、 2.76%、1.65%， 結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1對照品適量， 加甲醇稀釋制得每 1 mL含 人 參 皂 苷 Rg1、 Re、Rb1分 別 為 179.36、85.78、 416.31μg的混合對照品溶液。 精密移取已知含量的正常紅參生脈飲樣品溶液 2 mL， 分別加入上述的混合對照品溶液 2 mL， 定容至 5 mL量瓶，平行制備6份供試溶液。在上述色譜條件下注入液相色譜儀，測得3種人參單體皂苷的量，計(jì)算平均回收率在 97.08% ～100.04%之間， RSD均小于 3%， 結(jié)果見表 1。

表 1 人參皂苷回收率 （n=6）Tab.1 Results of recovery test for ginsenosides（ n=6）

2.3.9 試驗(yàn)結(jié)果 取各生脈飲制品 10mL(規(guī)格:每支裝 10mL)， 按 “2.3.3” 項(xiàng)制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定人參皂苷 Rg1、 Re、 Rb1，結(jié)果見表2。

由表2可知，加糖紅參生脈飲中人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1的量均低于正常紅參生脈飲， 并隨加糖量增加， 其含有量相應(yīng)減少， 其中 40%加糖紅參組人參皂苷 Rg1、 Rb1的量與其他 3 組相比較，具有顯著性差異。

表2 加糖紅參生脈飲制品中人參單體皂苷 （n=3）Tab.2 Content of ginsenoside in Shengmai O ral Liquid of sweetened red ginseng （n=3）

2.4 不同生脈飲制品中五味子木脂素測定

2.4.1 色譜 條 件［11］Agilent SB-C18色 譜 柱 (4.6 mm×250 mm， 5 μm)， 流動(dòng)相為乙腈-水， 梯度洗脫 (0 ～30min， 45% ～75% 乙 腈； 30 ～45min，75% ～100%乙腈)，體積流量 1 mL/min， 檢測波長為254 nm，柱溫30 ℃， 進(jìn)樣量 10 μL， 見圖 2。

圖2 混合對照品 （A） 及生脈飲樣品 （B） HPLC色譜圖Fig.2 HPLC ch romatogram s of reference substances and Shengmai Oral Liquid sample

2.4.2 對照品溶液的制備 精密稱量五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素對照品適量， 置10 mL量瓶中， 用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 供試品溶液制備［12］精密量取生脈飲溶液10mL，加20mL水稀釋，混勻， 轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取 5 次，每次 50 mL，合并乙酸乙酯層， 蒸干乙酸乙酯， 甲醇定容至10 m L， 即得。

2.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取對照品溶液 20、50、 100、 200、 400 μL， 分別置于 10 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度稀釋成一系列的混合對照品溶液，在上述色譜條件下，注入超高效液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素回歸方程分別為:Y=3.510 2 ×10-7X-0.000 2(r2=0.999 8)、 Y=3.942 6 ×10-7X+ 0.005 1(r2=0.999 5)、 Y=3.786 9 ×10-7X+ 0.000 4(r2=0.999 4)、 Y=4.687 2 ×10-7X+ 0.004 5(r2=0.999 5)。 結(jié)果表明五味子醇甲在0.193 ～3.86 μg， 五味子醇乙在 0.168 ～3.36 μg，五味子甲素在 0.064 ～1.28 μg， 五味子 乙素在0.131 ～2.62 μg范圍內(nèi)均呈良好線性關(guān)系。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算五味子醇甲、五味子醇乙、 五味子甲素、 五味子乙素的 RSD分別為 0.46%、 0.55%、 0.67%、 0.51%。 結(jié) 果 表明本實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于 0、4、 8、12 h 按上述色譜條件進(jìn)樣測定， 以峰面積計(jì)算五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素的 RSD分別為 1.69%、1.57%、 2.36%、1.81%。 結(jié)果表明樣品在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按 “2.4.3”項(xiàng)下制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下分別進(jìn)行 HPLC分析， 計(jì)算五味子醇甲、 五味子醇乙、五味子甲素、 五味子乙素峰面積的 RSD分別為1.67%、 3.36%、 3.65%、 2.56%。 結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素對照品適量，加甲醇稀釋制得每1 mL含五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素分別為256.86、63.77、 25.38、58.19 μg的混合對照品溶液。精密移取已知含有量的正常紅參生脈飲樣品溶液 2 mL， 分別加入上述的混合對照品溶液 2 mL，定容至5 m L量瓶，平行制備6份供試溶液。在上述色譜條件下注入液相色譜儀，測得4個(gè)五味子木脂素的量， 結(jié)果見表3。

表 3 五味子木脂素回收率 （n=6）Tab.3 Recoveries of ginsenosides（ n=6）

2.4.9 結(jié)果分析 取各生脈飲制品 10mL(規(guī)格:每支裝 10mL)， 按 “2.4.3” 項(xiàng)下制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定五味子醇甲、五味子醇乙、 五味子甲素、 五味子乙素， 結(jié)果見表4。

表 4 加糖紅參生脈飲制品中木脂素 （n=3）Tab.4 Content of lignans in Shengmai Oral Liquid of sweetened red ginseng （n=3）

由表4可知，加糖紅參生脈飲制劑中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素的量均低于正常紅參生脈飲，除 40%加糖紅參組比 20%加糖紅參組五味子甲素量略高外，隨加糖量增加，五味子木脂素含有量相應(yīng)減少， 其中 10%加糖紅參組木脂素含有量與正常紅參組均沒有顯著性差異， 但與其他兩組有顯著性差異， 并且 20%加糖紅參組五味子醇甲含有量與 40%加糖紅參組相比較，也存在顯著差異。

3 討論

以加糖紅參為原料不但影響生脈飲制劑中人參皂苷類成分含有量，而且對生脈飲中木脂素類成分也有不良影響?？赡苡捎诩犹羌t參增加了藥材粗粉的黏度，影響生脈飲生產(chǎn)過程中滲漉環(huán)節(jié)，使得木脂素類成分不能被完全浸提出來，最終造成生脈飲中五味子木脂素類成分也相應(yīng)減少。同時(shí)，有研究表明市售與自制生脈飲質(zhì)量差異顯著［13］， 與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，我們推測市售生脈飲所用紅參很有可能為加糖紅參。

綜上，加糖紅參不僅對其自身質(zhì)量危害嚴(yán)重，以其為原料的中藥制劑更同受其害，并造成大量資源浪費(fèi)。目前，《中國藥典》 僅規(guī)定薄層色譜檢驗(yàn)法［1］， 以此很難保證生脈飲質(zhì)量。 本研究通過實(shí)測分析，探討加糖紅參對生脈飲質(zhì)量的影響，試圖通過測定有效成分量對紅參加糖量予以間接控制，當(dāng)紅參加糖量超過 10%時(shí)， 即對生脈飲質(zhì)量造成顯著影響，為中藥制劑生脈飲質(zhì)量控制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供依據(jù)。

［ 1 ］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010 年版一部［S］.北京: 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010:653-654.

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Influence of heavy sugar red ginseng on quality of Shengmai Oral Liquid

PANG Shi-feng， XU Shi-quan， CUILi-li， SUN Cheng-he， ZHANG Hao， WANG Ying-ping*
(Institute of SpecialWild Economic Animal and Plant Science， CAAS， Changchun 130112， China)

Shengmai Oral Liquid；heavy sugar red ginseng； ginsenoside； lignans； HPLC

R927.2

:A

:1001-1528(2014)02-0362-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.032

2013-04-15

吉林省科技支撐計(jì)劃 (20100926)

逄世峰 (1983—) ， 男， 研實(shí)員， 研究方向: 藥用植物質(zhì)量評價(jià)。 E-mail:psf5295@sohu.com

*通信作者: 王英平 E-mail:yingpingw@126.com