張慧敏 高習華 劉清池

由于環(huán)境污染、電離輻射及食品農(nóng)藥殘留等因素，血液腫瘤發(fā)病率逐年上升。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)如分子生物學、免疫學等基礎(chǔ)學科的發(fā)展以及人們對血液腫瘤發(fā)病機制認識的不斷深入，生物治療孕育而生，并有望成為繼化療、造血干細胞移植后治療血液腫瘤的又一有力武器。其中以DC-CIK為基礎(chǔ)的細胞免疫治療，成為國內(nèi)外研究的熱點，已廣泛用于多系統(tǒng)腫瘤的治療，本文就DC-CIK治療血液腫瘤的研究現(xiàn)狀做一綜述。

1 細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine induced killer cells，CIK)

CIK細胞最早是Schmidt-wolf等［1］于1991年發(fā)現(xiàn)在外周血淋巴細胞中加入 IFN-γ、IL-2、CD3McAb，可培養(yǎng)出大量CD3和CD56雙陽性的細胞毒T淋巴細胞。CIK細胞具有增殖能力強、殺瘤活性高、殺瘤譜廣及非主要組織相容性復合體(MHC)限制性殺瘤等特點，能廣泛殺傷自體、異體以及耐藥腫瘤細胞的作用［2，3］。其效應(yīng)細胞CD3+CD56+細胞在正常人外周血中僅占1%～5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)后可迅速增至1 000倍以上。

2 樹突狀細胞(dendritic cells，DC)

DC細胞是體內(nèi)最重要的、功能最強的抗原提呈細胞，腫瘤患者因免疫功能缺陷不能有效提呈腫瘤抗原，DC可以有效的誘導靜止T細胞的增殖和應(yīng)答，促進細胞毒性T淋巴細胞和輔助性T淋巴細胞的生成，是機體免疫應(yīng)答的啟動者和參與者［4］。成熟的DC可通過MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子及表面標志白細胞分化抗原CD1分子途徑提呈腫瘤抗原，有效抵制腫瘤細胞的免疫逃逸機制［5］。

3 DC-CIK細胞的協(xié)同抗腫瘤作用

實驗表明，DC-CIK共培養(yǎng)的抗腫瘤效應(yīng)明顯高于單純CIK細胞或DC細胞［6］。DC-CIK細胞的抗腫瘤機制:(1)CIK細胞在體內(nèi)受某些淋巴因子作用后，可以釋放大量具有細胞毒性的胞質(zhì)顆粒，直接破壞腫瘤細胞。(2)DC-CIK細胞可以分泌多種細胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-2等)，不僅對腫瘤細胞有直接抑制作用，還可以通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細胞。(3)CIK細胞有抗凋亡基因表達的作用，CIK細胞表達FasL，通過與腫瘤細胞膜表達的Fas結(jié)合，誘導腫瘤細胞凋亡［7］，并且能對腫瘤細胞持久地發(fā)揮作用。

4 DC-CIK治療血液腫瘤的基礎(chǔ)和臨床研究

DC-CIK作為一種新的過繼免疫細胞療法可以修復宿主受損的免疫系統(tǒng)、提高患者自身抗腫瘤細胞能力，從而有效地清除微小殘留病(MRD)［8］，預防血液腫瘤復發(fā)。

4.1 DC-CIK在急性白血病(AL)中的研究 白血病干細胞(LSC)對傳統(tǒng)的放、化療均不敏感且存在多藥耐藥，成為白血病復發(fā)的主要根源。張陽等［9］實驗研究表明:DC-CIK可誘導急性髓細胞白血病細胞株KG-1a細胞凋亡，并對其中LSC(CD34+CD38－CD123+)有殺傷作用，與CIK組、DC-CIK組比較，尤以抗原負載的DC-CIK組(Ag-DC-CIK)LSC比例降低顯著。在國外一個Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗中，5例化療后獲得完全緩解(CR)的急性髓系白血病(AML)患者接受抗原負載DC細胞輸注治療后4例觀察到明顯的抗白血病T細胞反應(yīng)。2例患者已維持CR超過12個月［10］。國內(nèi)學者觀察中藥配合DC-CIK治療20例CR期急性白血病患者，標志基因轉(zhuǎn)陰、達分子生物學緩解4例，微小殘留白血病轉(zhuǎn)陰性者3例;治療后3年持續(xù)CR率為75%，中位CR期25個月［11］。輸注后除5例出現(xiàn)一過性發(fā)熱外無其他嚴重不良反應(yīng)。鄧琦等［12］臨床觀察34例CR的AL患者接受DC、CIK治療，治療結(jié)束后均處于血液學和遺傳學緩解狀態(tài)，T細胞亞群、IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ 等細胞因子水平、微小殘留病灶檢測取得滿意結(jié)果，且DC、CIK治療同時可促進化療后骨髓造血功能的恢復。周東風等［13］觀察了47例CR的AL患兒接受DC-CIK治療61例次，44例患兒持續(xù)完全緩解(CCR)，CCR率達93.62%，治療前MRD陽性的9例，8例治療后轉(zhuǎn)陰。23例次出現(xiàn)發(fā)熱，10例次出現(xiàn)皮疹，無其他不良反應(yīng)。劉清池等［14］將48例形態(tài)學達完全緩解、未達分子生物學完全緩解的AL患者分成單獨化療組及化療聯(lián)合DC-CIK組，研究結(jié)果顯示:聯(lián)合組微小殘留白血病清除率及3年以上CCR率明顯提高，CD4+/CD8+比值顯著上升，未見嚴重不良反應(yīng)。

4.2 DC-CIK在慢性粒細胞白血病(CML)中的研究王鴻鵠等［15］將CML患者外周血單個核細胞來源的DC在體外用CML細胞凍融抗原(CLA)致敏，再與CML患者的 CIK細胞共同培養(yǎng)，應(yīng)用乳酸脫氫酶(LDH)釋放法觀察其對自身CML細胞、K562細胞和人淋巴瘤Raji細胞的殺傷活性(CIK+CLA-DC組)，與未致敏的DC+CIK(CIK+DC組)，CIK組及CIK+CLA組進行比較。結(jié)果表明:CIK+CLA-DC組殺傷活性最強。CIK+CLA-DC組對自身CML細胞的殺傷活性明顯高于對K562細胞和Raji細胞的殺傷活性。CLA抗原致敏DC介導的細胞毒作用具有較強的特異性。

4.3 DC-CIK在造血干細胞移植(HSCT)后的研究Introna等［16］對接受異基因 HSCT后的患者(4例AML、3例霍奇金淋巴瘤、2 例 MDS、1 例 CML、1例ALL)輸注不同量的供者來源的CIK細胞，6例疾病進展，3例完全緩解，1例部分緩解，1例病情穩(wěn)定，可見，異體CIK細胞應(yīng)用于臨床具有可行性。蘇毅等［17］觀察初治AML CR1期、接受自體HSCT聯(lián)合負載自體白血病抗原的DC-CIK細胞治療的患者32名，對照組:同期未采用DC-CIK細胞治療的AML CR1期移植患者21例，實驗組患者CD3+CD8+和CD3+CD56+細胞比例較對照組均有所上調(diào)，分泌IFN-γ的水平較對照組明顯升高，除一過性發(fā)熱、寒顫外，無其他不良反應(yīng)。自體HSCT后經(jīng)DC-CIK細胞輸注，3年的總生存率為75.0%(24/32)，較同期未使用負載白血病抗原DCCIK細胞的自體HSCT患者的生存率47.6%明顯提高。龔奕等［18］采用自體外周血移植聯(lián)合自身白血病細胞凍融抗原負載的DC-CIK輸注治療50例AML，與既往只接受自體外周血移植但未輸注DC-CIK的52例患者進行比較分析，除4例在輸注過程中出現(xiàn)一過性畏寒發(fā)熱反應(yīng)外其余均未出現(xiàn)不適反應(yīng)。隨訪6～24個月，輸注DC-CIK組患者總體生存率、無病生存率均高于同期未輸注DC-CIK組。薛重重等［19］應(yīng)用DCCIK細胞免疫治療自體HSCT后完全緩解血液腫瘤患者12例，7例仍完全緩解(CR)，中位CR期18(5～32)個月，2例為非常好的部分緩解(VGPR)或疾病穩(wěn)定(SD)，3例復發(fā)或疾病進展，其中1例復發(fā)死亡。證明DC-CIK細胞治療有助于清除移植后微小殘留病和提高患者生存率。

4.4 DC-CIK在多發(fā)性骨髓瘤(MM)中的研究 Mar-ten等［20］觀察負載了腫瘤特異性抗原的DC-CIK細胞對多發(fā)性骨髓瘤細胞的殺傷能力大大增強。羅云等［21］用LDH釋放法檢測:異基因CIK細胞及骨髓瘤細胞裂解物致敏的健康供者DC-CIK細胞均對骨髓瘤U266細胞有殺傷活性，且在相同效靶比時后者比前者殺傷活性更強。Lin等［22］給予1例71歲伴有肺癌的MM患者CIK過繼治療，治療后患者免疫功能改善，生命質(zhì)量提高，MM和肺癌病灶長期穩(wěn)定，體現(xiàn)了良好的療效。

4.5 DC-CIK在淋巴瘤中的研究 艾麗梅等［23］在DC-CIK抗淋巴瘤細胞免疫效應(yīng)研究中，分為DC、DCT、CIK和DC-CIK四組，DC-CIK組細胞因子IL-12、IL-17 和 IFN-γ 分泌量、CD8+、CD3+/CD56+細胞及對人淋巴瘤細胞株Raji殺傷活性均較其他三組強，得出結(jié)論:DC-CIK細胞抗淋巴瘤免疫效應(yīng)與分泌大量的細胞因子和產(chǎn)生細胞毒性細胞有關(guān)。在臨床應(yīng)用中，Leemhuis等［24］對9例接受自體HSCT后復發(fā)的非霍奇金淋巴瘤及霍奇金淋巴瘤患者進行自體CIK細胞治療，結(jié)果顯示，2例病情穩(wěn)定，2例獲得部分緩解，也進一步證實CIK細胞體外擴增的可行性及輸注安全性。孫薏等［25］用負載自身腫瘤裂解物的DC-CIK治療9例復發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤患者，5例影像學復查顯示腫瘤較治療前明顯縮小，除一過性發(fā)熱、畏寒外未見其他不良反應(yīng)。9例患者隨訪時間6～18個月，中位隨訪時間11個月。

DC與CIK共培養(yǎng)后，提高了細胞的增殖速度、殺傷活性及特異性，DC-CIK在惡性血液病治療中具有廣泛的應(yīng)用前景，除發(fā)熱外無其它明顯毒副作用，但作為一種新的免疫治療手段，仍存在很多問題需要更加深入的研究，如DC-CIK的最佳培養(yǎng)技術(shù)、應(yīng)用劑量、回輸途徑、免疫監(jiān)測指標、臨床療效評價指標及聯(lián)合應(yīng)用最佳組合等尚待進一步探討、規(guī)范和統(tǒng)一。

1 Schmidt-wolf IG，Negrin RS，Kiem HP，et al.Use of a SCI-D mouse/human lymphoma model to evaluate cytokine-induced killer cells with potent antitumor activity.J EXP MED，1991，174:139-149.

2 Yamaguchi Y，Ohshita A，Kawabuchi Y，et al.Adoptive im-munotherapy of cancer using activated autologous lymphocytes current status and new strategies.Hum Cell，2003，16:183-189.

3 Marin V，Pizzitola I，Agostoni V，et al.Cytokine-induced killer cells for cell therapy of acute myeloid leukemia:Improvement of their immune activity by expression of CD33-specific chimeric receptors.Haematologica，2010，95:2144-2152.

4 Tuyaerts S，Van Meirvenne，Bonehill A，et al.Expression of human GITRL on myeloid dendritic cells enhances their immunosti-mulatory function but does not abrogate the suppressive effect of CD4+CD25+regulatory T cells.Journal of Leukocyte Biology，2007，82:93-105.

5 Scott M，Seissler J.Dendritic cell vaccination:new hope for the Treatment of metastasized endocrine malignancies.Trends Endocrinol Metab，2003，14:156-162.

6 De Maria A，Bozzano F，Cantoni C，et al.Revisiting hu-man natural killer cell subset function revealed cytolytic CD56(dim)CD16+NK cells as rapid producers of abundant IFN-gamma on activation.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108:728-732.

7 Kim HM，Kang JS，Lim J，et al.Antitum or activity of cytokine-induced killer cells in nude mouse xeno graft model.Arch Pharm Res，2009，32:781-787.

8 Wang QJ，Wang H，Pan K，et al.Comparative study on anti-tumor immune response of autologous cytokine-induced killer(CIK)cells，dendritic cells-CIK(DC-CIK)，and semi-allogeneic DC-CIK.Chin J Cancer，2010，29:641-648.

9 張陽，張連生，曾鵬云.DC-CIK對急性髓細胞白血病干細胞的殺傷作用.中國腫瘤生物治療雜志，2011，18:404-408.

10 Roddie H，Klammer M，Thomas C，et al.PhaseⅠ/Ⅱ study of vaccination with dendritic-like leukaemia cells for the immunotherapy of acute myeloid leukaemia.Br J Haematol，2006，133:152-157.

11 劉清池，吳維海，李剛榮，等.凌丹康復方配合DC-CIK治療白血病臨床觀察.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，29:347-350.

12 鄧琦，白雪，李玉明.樹突狀細胞、細胞因子誘導的殺傷細胞用于急性白血病治療的研究.天津醫(yī)藥，2010，38:967-970.

13 周東風，翟麗娜，潘峰，等.樹突狀細胞與細胞因子誘導的殺傷細胞共培養(yǎng)細胞過繼免疫治療兒童急性白血病.實用兒科臨床雜志，2012，27:166-169.

14 劉清池，張慧敏，張玉娜，等.DC-CIK細胞清除微小殘留白血病的臨床研究.中國腫瘤生物治療雜志，2013，20:398-403.

15 王鴻鵠，徐開林，潘秀英，等.抗原沖擊致敏的樹突狀細胞介導的特異性體外抗慢性粒細胞白血病細胞作用.中國實驗血液學雜志，2003，11:278-281.

16 Introna M，Borleri G，Conti E et al.Repeated infusions of donor-derived cytokine-induced killer cells in patients relapsing after allogeneic stem cell transplantation:a phase I study.Haematologica，2007，92:952-959.

17 蘇毅，易海，范方教，等.荷載自體白血病抗原的DC-CIK細胞預防急性髓細胞性白血病自體造血干細胞移植后復發(fā)的臨床研究.中國輸血雜志，2010，23:1024-1028.

18 龔奕，陳幸華，張曦，等.DC-CIK細胞輸注治療急性髓細胞白血病50 例分析.重慶醫(yī)學，2011，40:3039-3041.

19 薛重重，楊麗萍，徐新，等.血液腫瘤患者自體HSCT后DC/CIK免疫治療的療效觀察.中華全科醫(yī)學，2012，10:341-342.

20 Marten A，Renoth S，von Lilienfeld Toal M，et al.Enhanced lytic activity of cytokine-induced killer cells against multiple myeloma cells after coculture with idiotype-pulsed dendritic cells.Haematologica，2001，86:1029-1037.

21 羅云，白鳳霞，張萍，等.骨髓瘤細胞裂解物致敏的DC-CIK細胞抗骨髓瘤細胞作用.腫瘤免疫學，2012，28:986-988，991.

22 Lin J，Zhu HL，Lu XC，et al.Autologous cytokine-induced killer cells in the treatment of multiple myeloma concomitant with lung cancer and paraneoplaste dermatoses.Intern Med，2010，49:2341.

23 艾麗梅，毛淑丹，宋盈盈，等.DC-CIK細胞體外抗淋巴瘤細胞的免疫效應(yīng)研究.中國免疫學雜志，2010，26:898-900.

24 Leemhuis T，Wells S，Scheffold C，et al.A phase I trial of autologous cytokine-induced killer cells for the treatment of relapsed Hodgkin disease and non-Hodgk in lympoma.Blood Marrow Transplant，2005，11:181-187.

25 孫薏，陳健，蔡鵬，等.用抗原特異性樹突狀細胞激活的淋巴細胞治療復發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤.中國實驗血液學雜志，2010，18:219-223.