潘紅英，時(shí) 樂，徐 立，尹 蓮，曾宛平，張光際，楊 凡

（南京中醫(yī)藥大學(xué)1．藥物安全性評(píng)價(jià)中心，2．藥學(xué)院臨床藥學(xué)系，江蘇南京 210023）

加味四妙丸有效部位群抗高尿酸血癥作用及其機(jī)制

潘紅英1，2，時(shí) 樂2，徐 立1，尹 蓮2，曾宛平1，2，張光際2，楊 凡2

（南京中醫(yī)藥大學(xué)1．藥物安全性評(píng)價(jià)中心，2．藥學(xué)院臨床藥學(xué)系，江蘇南京 210023）

目的探討加味四妙丸（MSW）有效部位群（EFC）對(duì)高尿酸血癥大鼠血清尿酸水平的影響及其作用機(jī)制。方法采用由次黃嘌呤和尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀制備持續(xù)性大鼠高尿酸血癥模型，記錄每日攝食量，收集末次造模后12 h尿液，ig給予模型大鼠MSW 50 g·kg－1以及EFC 12．5，25和50 g·kg－1，連續(xù)5 d；采用尿酸排泄抑制劑煙酸制備高尿酸血癥模型，ig給予模型大鼠MSW 50 g·kg－1以及EFC 50 g·kg－1，連續(xù)3 d。末次給藥后，取血和肝組織。全自動(dòng)生化儀檢測(cè)大鼠血清和尿液中尿酸水平，酶比色法測(cè)定血清、肝組織中黃嘌呤氧化酶（XOD）、分光光度法檢測(cè)紅細(xì)胞、肝組織中嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）和尿酸酶等活性。結(jié)果與正常對(duì)照組相比，2種高尿酸血癥模型大鼠血清尿酸水平均明顯升高（P＜0．01），MSW和EFC 50 g·kg－1均可顯著降低2種模型大鼠血尿酸水平（P＜0．01）。EFC 12．5和25 g·kg－1可降低由氧嗪酸鉀制備的持續(xù)性高尿酸血癥大鼠血尿酸水平（P＜0．05），MSW和EFC各劑量組均可明顯升高模型動(dòng)物紅細(xì)胞PNP活性（P＜0．01），EFC 25和50 g·kg－1還可顯著降低血清XOD活性（P＜0．05，P＜0．01）。對(duì)由煙酸復(fù)制的大鼠高尿酸血癥模型，MSW 50 g·kg－1和EFC 50 g·kg－1均能升高肝組織尿酸酶活性（P＜0．05），EFC 50 g·kg－1能顯著降低模型大鼠血清中XOD活性（P＜0．01）。結(jié)論EFC能降低高尿酸血癥模型大鼠的尿酸水平，其機(jī)制可能與其抑制血清XOD活性使尿酸合成減少以及激活尿酸酶活性促進(jìn)尿酸分解有關(guān)。

加味四妙方；中草藥提取物；高尿酸血癥；黃嘌呤氧化酶；嘌呤核苷磷酸化酶；尿酸酶

DO l：10．3867／j．issn．1000-3002．2014．03．012

目前，國內(nèi)外高尿酸血癥動(dòng)物模型的建立主要采用給予尿酸前體、尿酸酶抑制劑或抑制尿酸排泄的藥物，也可2種藥物聯(lián)合應(yīng)用［1］的方法進(jìn)行復(fù)制高尿酸血癥動(dòng)物模型。其中，尿酸酶抑制劑法對(duì)尿酸的合成和排泄沒有直接影響，有助于發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)尿酸形成的相關(guān)酶活性的影響，同時(shí)還可研究藥物對(duì)腎排泄尿酸的作用機(jī)制。抑制尿酸排泄法，不涉及尿酸的合成及代謝過程，適合用來觀察藥物對(duì)尿酸合成及分解過程中相關(guān)酶活性的影響。因此，實(shí)驗(yàn)中將兩種模型結(jié)合應(yīng)用，以此綜合考察藥物對(duì)尿酸合成、代謝及排泄的影響，從而更準(zhǔn)確、全面地評(píng)價(jià)藥物的作用，探討其作用機(jī)制。

加味四妙丸（m odified Sim iao Wan，MSW）由四妙丸加清熱藥土茯苓等組成，經(jīng)藥效研究和臨床驗(yàn)證，對(duì)急性痛風(fēng)療效突出，且毒性作用?。?］，并已篩選出由揮發(fā)油、生物堿類、皂苷類、有機(jī)酸類、黃酮類等成分組成的有效部位群（e ffective fractions，EFC）［3］。前期研究表明，EFC與MSW在降尿酸、抗炎及鎮(zhèn)痛方面的藥效一致，有量效關(guān)系，且在劑量均為50 g·kg－1時(shí)，EFC降尿酸作用表現(xiàn)出優(yōu)于MSW的趨勢(shì)［4－6］。本研究基于前期工作，分別采用尿酸酶抑制劑和尿酸排泄抑制劑制備2種高尿酸血癥動(dòng)物模型，觀察EFC和MSW對(duì)尿酸形成及分解兩條途經(jīng)中關(guān)鍵酶指標(biāo)的影響，探討其降尿酸的作用機(jī)制，為研發(fā)降尿酸高效藥物奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物、藥物、試劑和主要儀器

清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體質(zhì)量250～300 g，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（蘇）2008-0010。黃柏（Phellodendron chinense Schneid．）、蒼術(shù)（Atractylodes chinensisKoidz．）、薏苡仁（Coirx lacryma-jobi L．var．m ayuen．）、牛膝（Achyranthes bidintata Bl．）、土茯苓（Rhizom a Sm ilacis G labrae）等均購自于南京百信藥房，由南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室吳德康教授鑒定。氧嗪酸鉀（oxonic acid potassium salt，OAPS）、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）和肌苷標(biāo)準(zhǔn)品均購自美國Sigma公司，OAPS用羊毛脂與石蠟按質(zhì)量比為3∶2在70℃下混合而成的溶劑配制；次黃嘌呤（hypoxanthine，HX）購自南京鼎潤生物科技有限公司；煙酸購自中國惠興生化試劑有限公司；尿酸測(cè)定試劑盒，尿酸酶標(biāo)準(zhǔn)液購自上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司；XOD測(cè)定試劑盒購自南京建成生物工程研究所；液體石蠟購自上海凌鋒化學(xué)試劑有限公司；羊毛脂購自江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司。7020全自動(dòng)生化分析（日本日立公司）；光譜752紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；UV-2401紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；LDZ5-2型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1．2 MSW及EFC的制備

MSW及EFC由南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室制備提供。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)為每克生藥含量不得少于鹽酸小檗堿2．20 m g，落新婦苷0．25 m g。組方藥材用10倍體積95%乙醇回流提取2次，再用8倍體積70%乙醇回流提取2次，提取液減壓濃縮為生藥2．5 kg·L－1，得MSW樣品。EFC各類成分分別按文獻(xiàn)［3，7］制備純化，其中揮發(fā)油提取物按《藥典》方法由蒼術(shù)用水蒸氣蒸餾法提??；生物堿由黃柏用大孔樹脂法富集純化制備，純度為64．2%；黃酮、皂苷、有機(jī)酸和糖類部位為組方藥材去黃柏后合提，采用陰離子交換樹脂法、堿溶醇沉等方法純化制備，純度分別為56．2%，52．3%，89．1%和58．93%。按各類成分在組方藥中的分布合并得EFC樣品，臨用前蒸餾水稀釋至所需濃度。

1．3 尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀致大鼠持續(xù)性高尿酸血癥大鼠模型的制備和給藥

SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型組、MSW 50 g·kg－1組、EFC 12．5，25和50 g·kg－1（其中12．5 g·kg－1為MSW臨床等效量）組。禁食12 h后，正常對(duì)照組喂飼普通飼料，其余各組均喂飼含次黃嘌呤50 g·kg－1飼料，每日上午記錄大鼠攝食量。次日，除正常對(duì)照組外，各組sc給予OAPS 200 mg·kg－1，體積為1 m L·kg－1，每隔48 h注射1次，連續(xù)3次。首次sc給予OAPS后，MSW和EFC各劑量組分別ig給予MSW和EFC，對(duì)照組和模型組ig生理鹽水，體積均為10 m L·kg－1，每天2次（間隔12 h），連續(xù)5 d，于最后1次給藥后2 h，各組大鼠頸總動(dòng)脈取血，其中2～3 m L肝素1∶9抗凝，24 h內(nèi)測(cè)定紅細(xì)胞嘌呤核苷磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase，PNP）活性。剩余血液離心取血清，4℃保存?zhèn)溆?。各組大鼠于代謝籠中收集末次造模后12 h內(nèi)尿液。大鼠頸椎脫臼處死后，立即于冰臺(tái)快速分取肝組織，液氮冷凍后置于－70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．4 尿酸排泄抑制劑煙酸致高尿酸血癥大鼠模型的制備和給藥

將大鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、模型組、MSW 50 g·kg－1組、EFC 50 g·kg－1組，每組8只，分別ig給藥，10 m L·kg－1，正常對(duì)照組和模型組給予等體積生理鹽水，每天2次，共給藥3 d。末次給藥3 h后，模型組、MSW組和EFC組均ig給予煙酸100 mg·kg－1造模，5 m L·kg－1。連續(xù)3 d。末次ig給予煙酸同時(shí)，ip給予次黃嘌呤（生理鹽水配制，300 m g·kg－1），5 m L·kg－1。1 h后眼眶靜脈叢取血，離心取血清。各組大鼠頸椎脫臼處死后，立即于冰臺(tái)快速分取肝組織，液氮冷凍后置于－70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．5 尿酸水平和黃嘌呤氧化酶測(cè)定

按試劑盒說明書，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清和尿液尿酸濃度。肝組織稱重后按體積比加9倍生理鹽水制成10%勻漿，用蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，按照XOD測(cè)定試劑盒方法測(cè)定血清和肝組織XOD活性。

1．6 紅細(xì)胞和肝組織PNP活性測(cè)定［8］

將巰基乙醇50μL加入1 m L EDTA（0．27 mol·L－1）溶液中混勻，制備成穩(wěn)定液。紅細(xì)胞樣品制備：取1．3部分制備的抗凝血過層析柱，取洗脫液離心，將紅細(xì)胞沉淀用穩(wěn)定液溶解，配制成1∶20和1∶200的溶血液，取1∶20溶血液50μL，加入2000μL氰化血紅蛋白（hemoglobin，Hb）試劑，空白對(duì)照管加入2050μL氰化Hb試劑，測(cè)定A540nm。肝組織樣品制備：取 1 g肝組織加入0．01 mol·L－1冰磷酸鹽緩沖液100 m L，勻漿，蛋白定量試劑盒測(cè)定肝組織勻漿蛋白濃度，用穩(wěn)定液配制1∶200肝組織樣品溶液。PNP酶活性測(cè)定：取比色杯，均加入1∶200樣品溶液100μL，XOD標(biāo)準(zhǔn)液5μL，測(cè)試杯加磷酸鹽緩沖液2795μL，肌苷100μL，對(duì)照杯加磷酸鹽緩沖液2895μL。1 m in后于293 nm波長測(cè)定吸光度為A0，10 m in后再次測(cè)定吸光度為A。紅細(xì)胞PNP活性單位以U·g－1Hb表示，每克Hb在37℃1 m in生成1μmo l黃嘌呤所需酶量為一個(gè)酶活性單位（μm o l·m in－1·g－1Hb）。肝PNP活性單位以U·g－1蛋白表示，以每克肝組織蛋白1 m in生成1μmol黃嘌呤所需酶量為一個(gè)酶活性單位（μm o l·m in－1·g－1蛋白）。按以下公式計(jì)算PNP活性。紅細(xì)胞PNP活性（U·g－1Hb）＝（A－A0）／A540nm×15．406。肝組織PNP活性（U·g－1蛋白）＝〔（A－A0）／1．2×10－4（摩爾消光系數(shù)）×反應(yīng)液總體積（μL）／取樣量（μL）／反應(yīng)時(shí)間（10 m in）／蛋白質(zhì)濃度（g·L－1）。

1．7 尿酸酶活性測(cè)定

依據(jù)尿酸被尿酸酶氧化成尿囊素后，293 nm處吸光度的下降的原理測(cè)定。肝組織同上勻漿，離心取上清液。用4 m L比色杯，①空白管加入0．1 mol·L－1硼酸緩沖液2．5 m L，加入標(biāo)準(zhǔn)酶溶液0．5 m L作為標(biāo)準(zhǔn)管的空白調(diào)零管，或加入待測(cè)勻漿液0．5 m L作為測(cè)試管的空白調(diào)零管；②標(biāo)準(zhǔn)管加入溶于0．1 m o l·L－1硼酸緩沖液的0．00025%尿酸溶液2．5 m L，再加入0．0025 U的標(biāo)準(zhǔn)酶溶液0．5 m L；③測(cè)試管與標(biāo)準(zhǔn)管相同，用0．5 m L待測(cè)勻漿液代替標(biāo)準(zhǔn)酶溶液；記錄293 nm處1 m in和5 m in的吸光度（A293nm）。酶活性（U·g－1）＝單位時(shí)間內(nèi)測(cè)試管 A293nm變化量／單位時(shí)間內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)管A293nm變化量×標(biāo)準(zhǔn)管酶活性（U·g－1蛋白）× 200。

1．8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2．1 MSW和EFC對(duì)氧嗪酸鉀所致持續(xù)性高尿酸血癥模型大鼠的影響

2．1．1 對(duì)血清和尿液尿酸水平的影響

表1結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠攝食量顯著降低，血清和尿液尿酸水平顯著升高，尿酸排泄量增加（P＜0．01）；與模型組比較，EFC 50 g·kg－1攝食量明顯增多，MSW和EFC各劑量大鼠血、尿液尿酸水平均降低（P＜0．05，P＜0．01），MSW和EFC 50 g·kg－112 h尿酸排泄量顯著降低（P＜0．01）。

2．1．2 對(duì)血清XOD和紅細(xì)胞PNP活性的影響

表2結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組血清XOD活性提高（P＜0．05），紅細(xì)胞PNP活性無明顯變化。與模型組比較，MSW和EFC各劑量組均可明顯升高模型組紅細(xì)胞PNP活性（P＜0．01），但MSW對(duì)血清XOD無明顯影響。EFC 25和50 g·kg－1可顯著抑制模型大鼠血清XOD活性（P＜0．05，P＜0．01）。

2．1．3 對(duì)肝XOD和PNP活性的影響

表3結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比模型組肝組織XOD活性無明顯變化。MSW和EFC 50 g·kg－1肝組織XOD均顯著高于模型組（P＜0．01）。各組肝組織中PNP活性無明顯變化（表3）。

Tab．1 Effec t o fmod ified Sim iao Wan（MSW）and effective fractions（EFC）on uric acid in oxon ic acid po tassium-induced hyperuricem ia rats

Tab．2 Effec t o f MSW and EFC on ac tivities o f xanthine oxidase（XOD）in serum and pu rine nuc leos ide phospho ry lase（PNP）in red b lood cells o f oxonic acid po tassium-induced hyperu ricem ia rats

Tab．3 Effec t o f MSW and EFC on liver XOD and PNP activities in oxonic acid potassium-induced hyperuricem ia rats

2．2 MSW和EFC對(duì)煙酸所致高尿酸血癥模型大鼠的影響

2．2．1 對(duì)血清尿酸和XOD的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的血清尿酸水平明顯升高（P＜0．01）。與模型組比較，MSW和EFC能明顯降低大鼠的高尿酸水平（P＜0．01），EFC還能顯著降低大鼠血清XOD活性（P＜0．01），MSW對(duì)血清中XOD活性無明顯影響（表4）。

2．2．2 對(duì)肝XOD和尿酸酶的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肝中XOD和尿酸酶活性明顯升高（P＜0．01）。與模型組比較，MSW和EFC均能升高肝組織尿酸酶活性（P＜0．05），EFC組肝組織XOD活性無明顯變化（表5）。

Tab．4 Effec t o f MSW and EFC on se rum u ric acid and XOD ac tivities in n ico tinic acid-induced hyperu ricem ia rats

Tab．5 Effect o f MSW and EFC on liver XOD and uricase activities in nicotinic acid-induced hyperu ricem ia rats

3 討論

高尿酸血癥是尿酸合成增加和（或）尿酸排泄減少引起的一種代謝性疾病。本實(shí)驗(yàn)復(fù)制的由尿酸酶抑制劑所致的大鼠高尿酸血癥模型，類似于人類高蛋白飲食導(dǎo)致的嘌呤代謝紊亂誘發(fā)的高尿酸血癥，在一定程度上接近臨床常見的高尿酸血癥患者的發(fā)病機(jī)制［1，9］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予MSW和EFC可顯著逆轉(zhuǎn)高尿酸大鼠血清尿酸水平的升高，MSW由于制劑流動(dòng)性差、黏稠度高等性狀，導(dǎo)致動(dòng)物灌胃后不易消化，攝食量降低，與MSW比，EFC明顯增加模型動(dòng)物攝食量，即尿酸來源增加，而血尿酸水平無差異，說明EFC未影響MSW降尿酸作用，且具有一定的優(yōu)勢(shì)。隨血清尿酸水平的降低，尿尿酸水平和排泄量亦降低。提示MSW和EFC可能不是通過促進(jìn)尿酸排泄而發(fā)揮降尿酸作用。

尿酸是由次黃嘌呤和黃嘌呤經(jīng)由XOD連續(xù)的氧化過程而形成的，因此，XOD直接調(diào)控著體內(nèi)尿酸水平的高低［10］。肝富含XOD，是體內(nèi)尿酸合成的主要部位，血清中的XOD主要來自于肝細(xì)胞［11－12］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，尿酸酶抑制劑和尿酸排泄抑制劑復(fù)制的大鼠高尿酸血癥模型血清XOD活性均顯著升高，這可能是由于隨著次黃嘌呤的攝入，肝代謝活動(dòng)增強(qiáng)，導(dǎo)致肝細(xì)胞膜通透性增加，細(xì)胞中XOD釋放入血增多引起的［13］。給予MSW和EFC后，兩者肝XOD活性均升高，血清XOD活性降低。我們分析認(rèn)為，MSW和EFC可能對(duì)增強(qiáng)肝細(xì)胞膜的穩(wěn)定性有一定作用，從而使肝細(xì)胞胞漿內(nèi)XOD釋放入血減少，血清XOD活性降低，血尿酸水平降低，具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探索。此外，在藥材劑量相同條件下，EFC降尿酸及對(duì)血清XOD活性的抑制作用強(qiáng)于MSW，提示EFC提取物在精制過程中可能去除了對(duì)抑制XOD活性拮抗的成分，使作用靶點(diǎn)更明確，這為進(jìn)一步從中篩選降血尿酸有效組分或有效成分、研制降尿酸創(chuàng)新中藥新藥提供依據(jù)。

除XOD外，PNP也是尿酸嘌呤代謝過程中的關(guān)鍵酶之一，PNP可催化次黃苷和鳥苷磷酸解成次黃嘌呤和鳥嘌呤，而次黃嘌呤和鳥嘌呤也可在該酶的作用下向核苷方向轉(zhuǎn)化，為一個(gè)可逆的反應(yīng)［14］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，MSW和EFC均可明顯升高尿酸酶抑制劑復(fù)制的持續(xù)性高尿酸血癥模型大鼠紅細(xì)胞PNP活性。MSW和EFC對(duì)XOD活性的抑制作用，阻斷了尿酸的生成途徑，造成黃嘌呤和次黃嘌呤在體內(nèi)堆積，而模型動(dòng)物每日直接攝入次黃嘌呤飼料，進(jìn)一步導(dǎo)致次黃嘌呤、黃嘌呤在體內(nèi)的蓄積，MSW和EFC增強(qiáng)PNP活性可促使尿酸合成的前體次黃嘌呤向次黃苷轉(zhuǎn)化，從而減少體內(nèi)黃嘌呤和次黃嘌呤的含量。綜上所述，MSW及EFC可通過抑制XOD和增強(qiáng)PNP協(xié)同作用減少次黃嘌呤向尿酸的轉(zhuǎn)化，這對(duì)于機(jī)體保持穩(wěn)定是一種積極的調(diào)節(jié)現(xiàn)象，顯示了MSW及EFC在治療高尿酸血癥上的潛在前景。

尿酸排泄抑制劑復(fù)制的大鼠高尿酸模型結(jié)果顯示，MSW和EFC均具有激活尿酸酶活性的作用。尿酸酶能催化尿酸轉(zhuǎn)化為溶解度顯著高于尿酸的尿囊素，但人體內(nèi)卻缺乏有生物活性的尿酸酶［15］，通過補(bǔ)充尿酸酶是治療高尿酸血癥的又一策略，它能迅速有效地降低患者體內(nèi)的尿酸水平［16］，但作為一種外源性的蛋白質(zhì)，存在著易被體內(nèi)酶水解，穩(wěn)定性低、血漿半衰期短等蛋白質(zhì)藥物的共同缺點(diǎn)，而大大限制了其臨床使用［17］。據(jù)報(bào)道，人體僅有較少的尿酸（約2%）可以被分解為尿囊素等［18］，如果是因?yàn)槿梭w尿酸酶活性過低，不足以使其發(fā)揮降尿酸作用，那么使用藥物激活體內(nèi)尿酸酶活性，或許可以發(fā)揮其降尿酸作用。EFC和MSW升高尿酸酶活性的作用在臨床上是否有實(shí)際意義，有待進(jìn)一步研究。

［1］ Chen GL，Xu SY．Research progress for animal hype ruricem ia model［J］．Chin Pharmacol Bull（中國藥理學(xué)通報(bào)），2004，20（4）：369-373．

［2］ Shi L，Xu L，Yin L．Comparison among four different kinds of modified sim iao powder in their Antigou t effect［J］．J Nanjing TCM Univ（南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)），2005，21（2）：106-107．

［3］ Yin L，Shi XD，Xu L，Pharmaceutical com position for treating acute gout and its extraction method：China，CN200510039040．8［P］．2005-11-23．

［4］ Shi L，Xu L，Yin L．Research of effective fractions for gout in modified Sim iao powde r［J］．J Nanjing TCM Univ（南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)），2008，24（6）：386-387．

［5］ Shi L，Xu L，Yin L．E ffect of modified Sim iao pow der and its effective fractions on hyperuricem ia［J］．Anhui Med Pharm J（安徽醫(yī)藥），2010，14（8）：883-885．

［6］ Yin L，Si XD，Q ian ZX．Ideas and methods o f screening Jiaweisim iaowan for treatment of acute gou ty arthritis and princip les of diagnosis［J］．W orld Sci Technol-Mod Tradit Chin Med Mate r Med（世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2006，8（6）：27-30．

［7］ Yin L，Xu L，Shi L，Wu H．Study of screening effective com ponents of Jiaw eisim iaowan［J］．W orld Sci Technol-Mod Tradit Chin Med Mate r Med（世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2005，7（4）：28-33，48，85

［8］ Du CS．Determ ination of e rythrocyte nucleoside phosphorylase［J］．Chin J Lab Med（中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志），1991，14（1）：52-53．

［9］ Xu L，Shi L．Establishment of hyperuricem ia ra t modelw ith different doses of hypoxanthine and oxonic acid potassium salt［J］．Chin J Pharmacol Toxico l（中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志），2008，22（4）：306-310．

［10］ Ernst ME，F(xiàn)ravel MA．Febuxostat：a selective xanthine-oxidase／xanthine-dehydrogenase inhibitor for the management of hyperuricem ia in adults with gout［J］．Clin Ther，2009，31（11）：2503-2518．

［11］ W ang K，Shi Q．Practical Diagnosis Enzymology（實(shí)用診斷酶學(xué)）［M］．Shanghai：Shanghai Medical University Press，2000，245．

［12］ Zhang Y，Liu CH，Liu SZ，W ang SJ．Three kinds of liver disease in patien ts w ith changes in serum xanthine oxidase［J］．J Henan Med Univ（河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)），1998，33（1）：81-82．

［13］ Kong Y，Zhang B，Liu XQ，Zhang HJ，Sa Y，Ye GH．Changes in the activity of xanthine oxidase in the quail m odel of hyperuricem ia［J］．J Beijing Univ Tradit Chin Med（北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)），2004，27（6）：38-40．

［14］ Renouf JA，Thong YH，Chalmers AH．A rapid，sim p le me thod for the m icro-estimation of purine nucleoside phosphorylase activity in pe ripheral blood lym phocytes［J］．Clin Chim Acta，1985，151（3）：311-316．

［15］ Bosly A，Sonet A，Pinkerton CR，McCowage G，Bron D，Sanz MA，et al．Rasburicase（recombinanturate oxidase）for the management of hyperuricem ia in patients w ith cancer：report of an international com passionate use study［J］．Cancer， 2003，98（5）：1048-1054．

［16］ Bomalaski JS，Holtsberg FW，Ensor CM，Clark MA．U ricase formulated w ith polyethylene glycol（uricase-PEG 20）：biochem ical rationale and preclinical studies［J］．J Rheumatol，2002，29（9）：1942-1949．

［17］ Pui CH，Jeha S，Irw in D，Cam itta B．Recombinant u rate oxidase（rasburicase）in the preven tion and treatment of malignancy-associated hyperuricem ia in ped iatric and adult patients：results of a com passionate-use trial［J］．Leukem ia，2001，15（10）：1505-1509．

［18］ Meng ZH．Gout（痛風(fēng)）［M］．Beijing：Beijing Medical University and Peking Union Med ical College United Press，1997：45-50．

Effec t o f ac tive frac tions from m od ified Sim iao Wan on hyperu ricem ia and its m echan ism

PAN Hong-ying1，2，SHILe2，XU Li1，YIN Lian2，ZENG Wan-ping1，2，ZHANG Guang-ji2，YANG Fan2
（1．Center for Drug Safety Eva luation and Research，2．Departm ent o f C linica l Pharm acy，Co llege of Pharm acy，Nanjing University o f Tradiational Chinese Medicine，Nan jing 210023，China）

OBJECTlVETo study the effect o f effective fractions（EFC）from modified Sim iao Wan（MSW）on the level o f uric acid in hyperuricem ic rats and investigate the mechanism．METHODSTwo types o f hyperuricem ic m ode ls were estab lished．A persistant hyperuricem ic mode l was p repared by giving rats oxonic acid 200 mg·kg－1and feeding them w ith hypoxanthine．The m odels were ig given w ith modified Sim iaowan（MSW）50 g·kg－1or EFC 12．5，25 and 50 g·kg－1consecutively for 5 d．The models were treated w ith MSW or EFC 50 g·kg－1for3 d．After the final treatment，the uric acid concentrations in serum and urine were determ ined by an automatic biochem istry analyzer．The activity of xanthine oxidase（XOD）in the serum and liver was determ ined by enzym ic colorimetric method．The activity o f purine nuc leoside phosphorylase（PNP）and uricase was detected by spectrophotom etry．RESULTSCompared w ith norm a l contro l group，the serum level o f uric acid in both m ode l groups was rem arkab ly increased（P＜0．01）．Compared to m ode l contro l group，MSW 50 g·kg－1and EFC 12．5，25 and 50 g·kg－1significantly reduced the serum level o f uric acid（P＜0．05，P＜0．01），but increased the activity of erythrocyte PNP（P＜0．01）in the oxonic acid potassium-induced hyperuricem ia rats．MSW 50 g·kg－1and EFC 50 g·kg－1elevated the activity of liver uricase in the nicotinic acid-induced hyperuricem ia rats（P＜0．05）．EFC 50 g·kg－1also significantly decreased the serum XOD activity of hyperuricem ic rats．CONCLUSlONEFC significantly inhibits the serum level of uric acid in hyperuricem ic rats，which m ight involve down-regulation of protein levels of serum XOD to inhibit the production of uric acid and activation o f uricase to p rom ote the decom position o f uric acid．

m odified Sim iaowan；plant extracts，Chinese；hyperuricem ia；xanthine oxidase；purine nucleoside phosphorylase；uricase

XU Li，E-mail：xuliglp＠126．com，Tel：（025）85811247

R285．5，R963

A

1000-3002（2014）03-0380-06

Foundation item：The project supported by Beureau o f TraditionalChinese Medicine o f Jiangsu Province（LZ11195）；Natu ral Science Foundation of Jiangsu Province（BK2002033）；and Open Project of Key Laboratory of Prescription o f Jiangsu Province（022021014010）

2013-11-22 接受日期：2014-04-11）

（本文編輯：齊春會(huì)）

江蘇省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目（LZ11195）；江蘇省自然科學(xué)基金（BK2002033）；江蘇省方劑研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放項(xiàng)目（022021014010）

潘紅英（1989-），女，碩士研究生，主要從事代謝性疾病、心血管藥理和毒理學(xué)研究；時(shí) 樂（1980－），女，講師，博士，主要從事代謝性疾病、心血管藥理和毒理學(xué)研究；徐 立（1957-），男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事代謝性疾病、心血管藥理和毒理學(xué)研究。

時(shí) 樂，E-mail：shilehappy＠163．com，Tel：（025）85811515；徐 立，E-m ail：xu liglp＠126．com，Tel：（025）85811247