王銘棟 孟繁明 李紅姬 楊 麗

（吉林省吉林市中心醫(yī)院腫瘤科，132000）

自體DC CIK NK αβT γδT細胞治療乳腺組織細胞肉瘤的臨床研究

王銘棟 孟繁明 李紅姬 楊 麗

（吉林省吉林市中心醫(yī)院腫瘤科，132000）

目的 觀察細胞因子誘導的自體DC、CIK、NK、αβT、γδT細胞治療組織細胞肉瘤療效。方法 抽取患者自體外周血60～100 mL，采用血細胞分離機收集其單核細胞，經(jīng)細胞因子誘導并擴增CIK、NK、αβT、γδT細胞及DC細胞；用流式細胞儀檢測其表型后，靜脈回輸CIK、NK、αβT、γδT細胞，皮下注射DC細胞，觀察組織細胞肉瘤變化。結果 患者左乳腫塊縮?。?0%，生活質量明顯改善。結論 細胞免疫治療是一種化療后組織細胞肉瘤有效的治療手段，具有廣闊的臨床應用前景。

DC細胞；CIK細胞；NK細胞；T細胞；組織細胞肉瘤

組織細胞肉瘤是一類罕見的、造血系統(tǒng)起源的，形態(tài)學和免疫表型顯示為組織細胞分化的惡性腫瘤。乳腺組織細胞肉瘤更是十分罕見，目前無確切的治療方法。隨著免疫細胞生物學及免疫分子生物學的高速發(fā)展，細胞介導的過繼性免疫治療已成為腫瘤患者放化療后的輔助治療手段之一。其對于促進患者免疫系統(tǒng)重建、消除殘留病灶及骨髓凈化具有良好的應用效果。為了尋求一種安全、有效的治療方法，觀察自體免疫細胞治療乳腺組織細胞肉瘤1例?，F(xiàn)報告如下。

1 病例資料

患者女，51歲。因右乳腺癌保乳切除術后4年，并雙乳組織細胞肉瘤化療后8個月入院。患者于2009年診斷為右乳癌，在我院胸外科行右乳癌保乳切除術。術后病理示：右乳腺浸潤性導管癌，無淋巴結轉移。術后行TA方案化療4周期。2011年6月，患者復查發(fā)現(xiàn)雙乳腫物；左乳腺結節(jié)伴皮疹，皮疹顏色鮮紅，無明顯瘙癢；腰背部、右上肢散在黃豆大小腫塊。之后于2011年7月就診于當?shù)啬翅t(yī)院，行左乳腺外上象限切除術及右乳腺腫物及皮膚切除術。術后病理示：組織細胞肉瘤。行CHOP方案化療4周期。2011年12月，患者因腰背部、右上肢出現(xiàn)散在的皮膚腫物，腫物增大伴瘙癢及疼痛而來診。查體：體溫36.3℃，心率82次/min，呼吸20次/min，血壓140/90 mm Hg。腰背部及右上肢散在的皮膚腫物，顏色潮紅，質硬；腰背部最大腫塊約5 cm ×5 cm。雙鎖骨上淋巴結、頸部淋巴結、腋窩淋巴結未觸及腫大。雙乳腺見長20 cm切口瘢痕，愈合良好，左乳腺外側3點位置觸及3 cm×3 cm腫物，質硬，無觸痛。雙肺呼吸音清；心律齊；肝脾未觸及；雙下肢無水腫。入院后血常規(guī)、肝功、腎功化驗正常。頸部淋巴結彩超未見異常；上腹彩超示脂肪肝；泌尿系彩超未見異常；婦科彩超未見異常。乳腺鉬靶片示：左中乳見類圓形模糊淡片狀影，邊緣不清，雙乳皮膚及乳頭未見異常改變。胸部CT示：左乳下方見類圓形腫塊。考慮患者病情進展，給予3個療程細胞免疫治療。

2 免疫治療方法

2.1 治療過程 用血細胞分離機提取患者外周血60～100 mL，分離其中單個核細胞。在生物實驗室中，將體外單個核細胞用多種細胞因子共同培養(yǎng)一段時間后（一般需要1～2周），獲得一群具有擴增能力、腫瘤殺傷作用顯著、分泌細胞因子能力強的殺傷細胞（DC、CIK、NK、αβT、γδT細胞），再定期回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，以發(fā)揮抗腫瘤作用。培養(yǎng)擴增后的第7天，給患者皮下注射DC細胞，靜脈滴注αβT細胞；第14～19天分別回輸NK、CIK細胞，CIK、αβT細胞，NK、γδT細胞，NK、CIK細胞，CIK、αβT細胞，NK、αβT細胞。患者共接受3個療程的治療。

2.2 CIK細胞和DC細胞的培養(yǎng)及檢測 CIK細胞：采用FCS1640培養(yǎng)基，調(diào)整細胞濃度為5×105/ mL，第1天加入rh-干擾素-γ 1 000 U/mL；第2天加入抗CD3單抗50 μg/mL、IL-1-α 100 U/mL、IL-2 1 000 U/mL，培養(yǎng)2 d。更換培養(yǎng)液，培養(yǎng)7 d。流式細胞儀檢測細胞數(shù)。DC細胞：進行外周單個核細胞培養(yǎng)后，獲得貼壁單核細胞，加入完全培養(yǎng)基、GM-CFS 100 ng/mL、IL-4 500 U/mL。培養(yǎng)5 d后加入HSP復合物1 ng/mL，再培養(yǎng)6 d后收集懸浮的DC細胞[1]。

2.3 NK細胞培養(yǎng)及檢測 用淋巴細胞分離液分離出單個核細胞[2]。將無菌塑料平皿用羊抗鼠IgG 1 mL（0.1 mg/mL）包被10 h。用含5% NCS2的生理鹽水洗3次。2×107個單核細胞中加入CD3單抗及CD8單抗200 μL，4℃孵育30 min。用含5% NCS2的生理鹽水洗3次，并重懸細胞，調(diào)整濃度為5×106/mL；加入包被的平皿中，4℃孵育40 min。收集非黏附的細胞，計數(shù)后用流式細胞儀檢測NK細胞表面標記的CD56及CD16分子。

2.4 γδT細胞和αβT細胞的培養(yǎng)及檢測 選用固相抗體包被培養(yǎng)板，將分離的單個核細胞懸浮于FCS1640液體中，調(diào)整細胞濃度為5×105/mL，分別加入抗TCRγδ和抗CD3包被的培養(yǎng)板中，再加如IL-2 15 μL（1×105U/mL），于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，更換液體1次/2 d。采用TCRγδ-FITC和抗TCRγδ-PE熒光標記抗體，進行免疫熒光雙染色，利用流式細胞儀分析所獲細胞群的純度[3]。

3 結果

患者第1個療程結束后，腰背部、右上肢散在的皮膚腫塊略縮小，縮小＜50%，瘙癢及疼痛癥狀消失，患者的生活質量有所改善。第2個療程結束后，右上肢散在的皮膚腫塊消失，腰背部腫塊縮小＞50%，生活質量明顯改善。第3個療程結束，后患者左乳腫塊縮?。?0%，腰背部腫塊消失。胸部CT復查結果見圖1～2。

圖1 治療前胸部CT

圖2 治療后胸部CT

4 討論

組織細胞肉瘤屬于侵襲性腫瘤，目前尚無統(tǒng)一的、療效確切的治療方案。組織細胞肉瘤發(fā)病過程雖然具有侵襲性特征，但部分患者發(fā)病時仍屬局限性疾病，因此腫瘤大小可能是一個關系到預后的因素[4]。目前，惡性腫瘤治療手段很多，包括手術、放療、化療、內(nèi)分泌治療、中醫(yī)藥治療、熱療和射頻消融治療等，但都缺乏特異性和靶向性。

近年來，細胞介導的過繼免疫治療已成為腫瘤患者放化療后重要的輔助治療手段之一。在抗腫瘤的免疫效應中，主要應答為T淋巴細胞介導的特異性細胞免疫，T淋巴細胞包括αβT細胞和γδT細胞兩種亞型。αβT細胞主要參與機體的細胞免疫，需要DC細胞提呈抗原。由于腫瘤具有免疫逃逸機制，αβT細胞不能發(fā)揮有效的免疫應答。γδT細胞主要存在于腸道、皮膚、舌、食管、氣管、肺和生殖系統(tǒng)的上皮細胞內(nèi)，占外周血淋巴細胞總數(shù)的2%～5%，在腫瘤的先天性免疫監(jiān)視和后天性免疫治療中發(fā)揮著重要的作用[5]。DC細胞是抗原提呈細胞，可誘發(fā)抗原特異性免疫應答，抗原提呈細胞功能降低使腫瘤產(chǎn)生免疫逃逸。NK細胞不僅參與機體的非特異性免疫應答，而且還通過釋放細胞因子來調(diào)節(jié)機體的特異性免疫反應[6]。CIK細胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣等特點，對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感，能抵抗腫瘤細胞引起的效應細胞Fas-FaxL凋亡。5種細胞協(xié)同應用，能起到最大的效果。

本研究中，該患者化療效果有限，耐受性差，我們選擇細胞免疫治療方案。通過3個療程的治療，患者腫塊縮?。?0%，生活質量明顯改善。而且免疫治療過程中，患者耐受性良好，未見不良反應。

綜上所述，細胞免疫治療是一種化療后組織細胞肉瘤有效的治療手段，具有廣闊的臨床應用前景。

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Clinical Research in the Treatment of Breast Tissue Cell Sarcoma with Autologous DC CIK NK αβT γδT Cells

WANG Mingdong MENG Fanming LI Hongji YANG Li
(The Department of Tumour, Jilin Central Hospital, Jilin 132000, China)

ObjectiveTo observe the clinical curative effect of cytokine induced autologous DC, CIK, NK, αβT and γδT cells to breast tissue cell sarcoma.MethodsThe mononuclear cells were separated from autologous peripheral blood in 60～100 mL by blood cell separator. The killer cells of CIK, NK, αβT, γδT and DC were induced and multiplied by cytokine in vitro. Flow cytometry was used to test their phenotype. CIK, NK, αβT, γδT cells were used by intravenous injection, and DC cells was used by subcutaneous injection.ResultsThe tumor of the patient reduced above 50%, and his life quality was improved signifi cantly.ConclusionCellular immunotherapy provides an effective approach for the treatment of tissue cell sarcoma after chemotherapy, which could provide new prospects in the clinical application.

DC cell; CIK cell; NK cell; T cell; tissue cell sarcoma.

1672-7185（2014）24-0060-03 doi∶10.3969/j.issn.1672-7185.2014.24.030

2014-09-09）

R737

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