李彧敏，張曉霞

（靈臺縣人民醫(yī)院，甘肅 靈臺 744400）

免疫比濁法測定尿微量白蛋白（UmALB）是近年來檢測腎臟病變的早期指標，并能在某種程度上反映病變的嚴重程度，因此越來越受到臨床的重視。筆者對免疫比濁法測定尿微量白蛋白進行了探索，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本 2013年5月10日在我院門診進行健康體檢的小學(xué)六年級一班學(xué)生和我院兒科住院患兒的新鮮隨機尿液。

1.1.2 儀器 CS800全自動生化分析儀。

1.1.3 試劑 采用寧波瑞源生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑。

1.2 方法

1.2.1 標本處理 新鮮隨機尿液標本離心取上清液測定：穩(wěn)定性試驗取新鮮尿液離心后上清液分裝于4℃和-20℃保存，測定時取出平衡至室溫后，離心取上清液測定。

1.2.2 測定條件設(shè)置 采用免疫比濁法，用試劑盒提供的標準品及試劑，按照試劑盒的要求設(shè)置參數(shù)：雙波長，兩點終點法，定標方式為logit log 5p，定標液濃度分別為0.0，12.0，22.2，49.5，103.5，205.5mg/L，批號1335F。

1.3 統(tǒng)計方法

線性試驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS1.0統(tǒng)計軟件拋物線擬合處理。

2 結(jié)果

2.1 線性試驗

定標后以標準物濃度為自變量X，吸光度為因變量Y（吸光度值×104），通過拋物線擬合尿微量白蛋白標準曲線，并與實際標準曲線比較。曲線方程為Y=1 052.10+124.639X-0.114 3X2，確定系數(shù)R2=1.000，P=0.000。因此可認為擬合曲線與實際曲線符合性很好，檢出限為0～200mg/L。

2.2 重復(fù)性試驗

2.2.1 批內(nèi)重復(fù)試驗 取一新鮮尿液標本連續(xù)測定尿微量白蛋白20次，計算變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

2.2.2 批間重復(fù)試驗 取一新鮮尿液標本分裝成10份，同日分3批次測定（第一批3份，第二批3份，第三批4份），每份標本均測定尿微量白蛋白兩次，取平均值計算變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

表1 尿微量白蛋白重復(fù)性試驗結(jié)果（mg/L）

2.3 回收試驗

取一新鮮尿液標本連續(xù)測定3次尿微量白蛋白，計算平均值作為基礎(chǔ)濃度，分別加入3份不同濃度微量白蛋白標準物（49.5，103.9，205.5 mg/L）混勻后，測定混合物尿微量白蛋白濃度，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 尿微量白蛋白回收試驗結(jié)果（mg/L）

2.4 干擾試驗

2.4.1 血紅蛋白干擾試驗 取一肝素抗凝全血標本，3 000 r/min離心3分鐘棄去血漿，剩余的紅細胞以生理鹽水洗滌4次，通過機械攪拌和加入蒸餾水使其溶血，制成血紅蛋白液，測定其血紅蛋白濃度。將已知尿微量白蛋白量的尿液與血紅蛋白液以不同比例混勻，測定混合物尿微量白蛋白含量，計算干擾率，結(jié)果見表3。

表3 尿微量白蛋白血紅蛋白干擾試驗結(jié)果

2.4.2 膽紅素干擾試驗 取一膽紅素定位陽性，尿蛋白定性為陰性的新鮮尿液標本，以此標本作為膽紅素干擾液。另取一膽紅素定性為陰性的新鮮尿液標本，測定其尿微量白蛋白含量，以此標本作為基礎(chǔ)液。將基礎(chǔ)液與膽紅素干擾液以不同比例混勻，測定混合物尿微量白蛋白含量，計算干擾率，結(jié)果見表4。

表4 尿微量白蛋白膽紅素干擾試驗結(jié)果

3 討論

正常人的腎小球濾液中存在小分子的蛋白質(zhì)，在通過近曲小管時絕大部分被重吸收，因此終尿中總蛋白含量很少，僅為30～130mg/24 h。當(dāng)尿中白蛋白排出量在3.2～22.6mg/mmol·Cr（30～200 mg/Cr）或排除率在20～200μg/min這一范圍內(nèi)即為微量白蛋白尿[1]。尿微量白蛋白不僅對糖尿病、腎病的早期診斷、治療和預(yù)后具有重要意義，而且在高血壓、心血管疾病、腎小球疾病等所致的腎損傷中具有舉足輕重的作用[1]。

尿微量白蛋白用磺基水楊酸法、加熱乙酸法及試帶法基本不能查出[2]。故國內(nèi)外多采用免疫化學(xué)技術(shù)進行測定。本試驗采用免疫比濁法測定尿微量白蛋白，檢出限為0～200mg/L，批內(nèi)CV為0.55%，平均CV為1.18%，平均回收率為101.9%，與文獻[3]報道的檢出限10～160mg/L，批內(nèi)CV6.3%，批間CV 6.47%，平均回收率96.2%比較，結(jié)果較為理想，該試驗方法有良好的精密度和準確性。

干擾試驗結(jié)果表明，血紅蛋白和膽紅素均會對尿微量白蛋白的測定產(chǎn)生負干擾，并且干擾物濃度越高，負干擾率也越大。從血紅蛋白干擾試驗結(jié)果分析，當(dāng)血紅蛋白濃度在0.61 g/L以下時，對尿微量白蛋白的測定影響可以忽略（干擾率<-2.60%）；當(dāng)血紅蛋白濃度超過2.59 g/L時，干擾率高達-15.61%，這時測定的尿微量白蛋白結(jié)果是不可以接受的，臨床上測定無意義。膽紅素干擾試驗表明，膽紅素濃度<1.03μmol/L時，對尿微量白蛋白的測定影響較?。ǜ蓴_率<-1.99%），可以忽略；膽紅素濃度上升到5.18μmol/L時，干擾率為-7.19%，對尿微量白蛋白的測定影響較大；膽紅素濃度達12.97μmol/L時，干擾率高達-14.44%，這時測定的尿微量白蛋白結(jié)果不可以接受，臨床上測定無意義。

由于本試驗檢出限制為0～200mg/L，測定前可先將標本離心，取上清液做蛋白定性試驗，若陰性或弱陽性可直接測定尿微量白蛋白，若陽性以上需以生理鹽水適當(dāng)稀釋后測定，以免造成尿微量白蛋白試劑不必要的浪費。

關(guān)于尿微量白蛋白測定結(jié)果的表示現(xiàn)在尚無統(tǒng)一單位。目前文獻所采用的表示方法有兩種：一是對定時尿樣品的測定結(jié)果根據(jù)分泌的蛋白以μg/min表示；二是對不定時尿樣品常用尿微量白蛋白/尿肌酐表示。

總之，應(yīng)用免疫比濁法測定尿微量白蛋白準確性高、精密度好，適于常規(guī)實驗室采用。

[1]齊志宏，劉振元.尿微量白蛋白測定的臨床意義[J].現(xiàn)代診斷與治療，1999,10（6）：351-352.

[2]寇麗筠.臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.

[3]馮葛苓，王兆成，劉晨梅.免疫濁度終點法檢測尿微量白蛋白[J].河北醫(yī)藥，1999（4）：295-297.■