周桂騫黃述斌

◇醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與藥學(xué)研究◇

甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)記物選擇

周桂騫1黃述斌2

目的：尋找更好的標(biāo)記物，用于甲狀腺乳頭狀癌的診斷與鑒別。方法：選取PTC 78例，NGWPH 32例，蠟塊均帶有周圍正常甲狀腺組織作對(duì)照，采用CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56對(duì)樣本進(jìn)行免疫組化染色。結(jié)果：CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56在PTC中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100.0%、93.6%、92.3%、98.7%和1.3%。而在NGWPH中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.5%、3.1%、37.5%、12.5%和96.9%。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：5種抗體各有優(yōu)缺點(diǎn)，CK19、34βE12、CD56的應(yīng)用價(jià)值較高，若能再聯(lián)合使用MC和Galectin-3以及仔細(xì)的圖像觀察，可以增加PTC診斷及與NGWPH鑒別診斷的準(zhǔn)確性。

甲狀腺腫瘤 乳頭狀癌 病理診斷

甲狀腺乳頭狀癌（PTC）是甲狀腺最常見(jiàn)的惡性腫瘤，WHO將其定義為顯示濾泡細(xì)胞分化證據(jù)并具有獨(dú)特細(xì)胞核特征的惡性上皮性腫瘤。有些PTC單憑HE染色鏡下難以與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴乳頭狀增生（NGWPH）區(qū)別。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56在PTC與NGWPH中的表達(dá)情況，探討其在兩者鑒別診斷中的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2009年5月~2013年9月我院及池州市人民醫(yī)院存檔的110例經(jīng)10%中性甲醛固定、石蠟包埋的甲狀腺標(biāo)本，其中男34例，女76例，年齡17~79歲。包括PTC 78例，NGWPH 32例，選取蠟塊均帶有周圍正常甲狀腺組織以作對(duì)照。診斷標(biāo)準(zhǔn)為2004版甲狀腺腫瘤WHO組織學(xué)分類。切片經(jīng)HE染色后觀察病理組織學(xué)形態(tài)。

1.2 免疫組化染色 應(yīng)用Envision二步法采用CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56對(duì)樣本進(jìn)行免疫組化染色，具體步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB顯色。用已知的陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。所用 CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56鼠抗人單克隆抗體與檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 結(jié)果判定 CK19、34βE12和Galectin-3定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，Galectin-3偶可定位于細(xì)胞核，MC定位于細(xì)胞膜，CD56定位于細(xì)胞膜伴/不伴細(xì)胞質(zhì)。參照Beesley[1]分級(jí)方法按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比并參考著色強(qiáng)度確定分級(jí)。陽(yáng)性表達(dá)包括（+）~（+++）。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。率的比較行x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。真實(shí)性指標(biāo)計(jì)算方法：靈敏度Se=a/(a+c)×100%；特異度Sp=d/(b+d)×100%；準(zhǔn)確度=(a+d)/(a+b+c+d)× 100%。其中a為真陽(yáng)性例數(shù)，b為假陽(yáng)性例數(shù)，c為假陰性例數(shù)，d為真陰性例數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 臨床與病理資料 78例PTC，腫瘤最大徑為0.8cm~6.5cm，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者58例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例，有8例未行淋巴結(jié)清掃。所有PTC病例鏡下均具有Juan Rosai[2]所描述的全部或部分細(xì)胞核特征。32例NGWPH的病例中，各例均有囊性變，囊內(nèi)可見(jiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu)。其中10例細(xì)胞核染色淡，似毛玻璃樣。

2.2 免疫組化結(jié)果 PTC組與NGWPH組之間比較：CK19，x2=91.55，P＜0.01；34βE12，x2=84.35，P＜0.01；MC，x2=37.76，P＜0.01；Galectin-3，x2=86.89，P＜0.01；CD56，x2=100.5，P＜0.01。PTC組與NGWPH組之間Pearson Chi-Square:Value=3.36E2，P＜0.01，兩組之間差異極顯著。見(jiàn)表1。

表1 甲狀腺組織中CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56的免疫組化陽(yáng)性表達(dá)

2.3 5種抗體的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度比較 根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理中的公式計(jì)算CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 5種指標(biāo)的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度比較 （%）

3 討論

PTC是甲狀腺惡性腫瘤中最常見(jiàn)的一種，而甲狀腺良性病變中也常?？梢?jiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu)。故有時(shí)僅憑HE染色難以區(qū)分良惡性，這時(shí)就需要一些可靠的標(biāo)記物來(lái)協(xié)助PTC的診斷與鑒別診斷。

滕曉東等[3]認(rèn)為CK19陽(yáng)性表達(dá)是濾泡細(xì)胞增生惡變的主要標(biāo)志。但Michel R Nasr等[4]研究發(fā)現(xiàn)，雖然CK19在乳頭狀癌中100%表達(dá)，其在正常甲狀腺、乳頭狀增生、濾泡性腺瘤等一些良性病變中也有較高的表達(dá)率（68%），提示CK19標(biāo)記雖然對(duì)PTC有很高的敏感性，但是特異性不高。本組研究結(jié)果與文獻(xiàn)相似，顯示除實(shí)體亞型PTC表達(dá)較弱外，其余PTC病例均有CK19的強(qiáng)表達(dá)，但有34.5%的癌周濾泡及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的濾泡弱表達(dá)CK19。本組實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)34βE12在PTC的表達(dá)率為93.6%，而NGWPH僅1例灶性表達(dá)，其特異度為96.9%，顯示這種抗體在PTC的診斷與鑒別診斷中可以發(fā)揮很好的作用。

MC和Galectin-3抗體在PTC的診斷中研究較多，文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)差異較大[4~5]。我們的數(shù)據(jù)顯示MC在PTC的表達(dá)率為92.3%，在NGWPH也有37.5%的表達(dá)率，特異度為五種抗體中最低，與文獻(xiàn)報(bào)道符合。不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)論顯示Galectin-3在PTC中的表達(dá)率為82%~100%。本組實(shí)驗(yàn)顯示在PTC中表達(dá)率為98.7%，但在NGWPH和正常甲狀腺中也有一定的表達(dá)，靈敏度為98.7%，特異度為87.5%，準(zhǔn)確度為95.5%，提示其應(yīng)該在診斷中有一定的價(jià)值。

我們的研究發(fā)現(xiàn)除1例濾泡亞型PTC有CD56的弱表達(dá)外，其余77例PTC均不表達(dá)CD56，32例NGWPH病例的乳頭狀增生區(qū)除未見(jiàn)表達(dá)外，其余均為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)CD56，所有標(biāo)本周圍正常甲狀腺組織均有CD56的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。其靈敏度為98.7%，特異度為96.9%，準(zhǔn)確度為98.2%，說(shuō)明在PTC的診斷中CD56是一個(gè)非常有意義的抗體。

綜上所述，在部分PTC的診斷中需要借助于免疫組化技術(shù)，但是沒(méi)有抗體能在靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度上達(dá)到100%，這時(shí)就需要使用一組抗體來(lái)鑒別，以期獲得滿意的效果。綜合各項(xiàng)數(shù)據(jù)顯示，CK19、34βE12、CD56的應(yīng)用價(jià)值較高，若能再聯(lián)合使用MC和Galectin-3以及仔細(xì)的圖像觀察，可以增加PTC診斷及與NGWPH鑒別診斷的準(zhǔn)確性。

1 BeesleyMF，MclrenKM．Cytokeratin19 and galectin-3immunohistochemistry in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules[J]．Histopathology，2002，41(3)：236～243．

2 Juan Rosai．Papillary Thyroid Carcinoma:A Rootand-Branch Rethink[J]．Am J Clin Pathol，2008，130（5）：683～686．

3 滕曉東，王麗君，姚洪田，等．細(xì)胞角蛋白19、galectin-3、HBME-l在甲狀腺病變上的表達(dá)及鑒別診斷意義[J].中華病理學(xué)雜志，2004，33(3)：212～216.

4 MichelRNasr，SanjayMukhopadhyay，ShengleZhang，etal．Immunohistochemicalmarkersin diagnosis ofpapillarythyroidcarcinoma：utilityofHBME1combinedwith CK19 immunostaining [J]．Modern Pathology,2006,19: 1631～1637.

5 JE Barroeta，MD，ZW Baloch,MD,PHD，et al．Diagnostic Value of Differential Expression of CK19, Galectin-3,HBME-1,ERK,RET,and p16 in Benign and Malignant Follicular-Derived Lesions of the Thyroid:An Immunohistochemical Tissue Microarray Analysis[J]．Endocrine Pathology,2006,17(3):225～234.

Selection of markers in papillary thyroid carcinoma

1.Chizhou Second People's Hospital，Chizhou 247100，Anhui
2.Chizhou People's Hospital，Chizhou 247100，Anhui
ZHOU Gui-qian1,HUANG Shu-bin2

Objective:To search for a better marker for papillary thyroid cancer diagnosis and identification.．Methods:Select PTC 78 example and NGWPH 32 cases,the wax block with the surrounding normal thyroid tissue were used as control,the use of CK19,34βE12,MC,Galectin-3 and CD56 on the samples immunohistochemical staining.Results:CK19,34βE12,MC,Galectin-3 and CD56 positive expression in PTC rates were 100.0%,93.6%, 92.3%,98.7%and 1.3%.In NGWPH the positive expression rate was 12.5%,3.1%,37.5%,12.5%and 96.9%. Difference between the two groups was statistically significant(P＜0.05).Conclusions:Five kinds of antibodies have their advantages and disadvantages,CK19,34βE12,CD56 high application value,if then combined with MC and Galectin-3 as well as careful observation of the image,you can increase the PTC diagnosis and differential diagnosis accuracy with NGWPH.

Thyroid neoplasms；Papillary carcinoma；Pathological diagnosis /(編審：牛俊楊 施仲賦)

R736.1

A

1671－8054(2014)01-0088-02

1.池州市第二人民醫(yī)院病理科 安徽 247100

2.池州市人民醫(yī)院病理科 安徽 247100

2013-12-05收稿，2014-01-04修回