吳宏赟王希友王福文侯書偉

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腦病科，山東濟南250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟南250014；3.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，山東濟南250062；4.山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，山東濟南250355

針刺風(fēng)府穴對緊張型頭痛大鼠張頜反射的影響

吳宏赟1王希友2王福文3侯書偉4

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腦病科，山東濟南250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟南250014；3.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，山東濟南250062；4.山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，山東濟南250355

目的探索針刺風(fēng)府穴對緊張型頭痛大鼠張頜反射波幅和潛伏期的影響。方法采用大鼠雙側(cè)半棘肌注射三磷酸腺苷二鈉注射液（ATP）的方法制備緊張型頭痛大鼠模型。體重220～260 g的SPF級Wistar大鼠40只，雌雄各半，分為空白組、模型組、風(fēng)府穴組和假穴組四組，通過定量分析緊張型頭痛模型大鼠張頜反射波幅及潛伏期，反映頭頸部皮膚肌肉筋膜痛閾及敏感性變化。結(jié)果空白組半棘肌注射生理鹽水不引起張頜反射波幅及潛伏期變化（P＞0.05）；模型組半棘肌注射ATP導(dǎo)致張頜反射波幅下降（P＜0.05），潛伏期見縮短趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；針刺風(fēng)府穴可見風(fēng)府穴組JOR波幅升高（P＜0.05），潛伏期延長（P＜0.05）；針刺假穴見張頜反射波幅升高（P＜0.05），潛伏期延長，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，風(fēng)府穴組波幅明顯升高（P＜0.01），假穴組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；風(fēng)府穴組波幅較假穴組升高明顯（P＜0.01）。與模型組相比，風(fēng)府穴組潛伏期明顯延長（P＜0.01），假穴組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；風(fēng)府穴組潛伏期與假穴組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論針刺風(fēng)府穴可提高張頜反射波幅，延長潛伏期，即提高痛閾，降低頭頸部肌筋膜敏感性。

風(fēng)府穴；緊張型頭痛；張頜反射；針刺

緊張型頭痛（tension-type headache，TTH）是原發(fā)性頭痛中最常見的一種。2010年數(shù)據(jù)顯示，我國18～65歲人口中，TTH發(fā)病率為10.77%，約占原發(fā)性頭痛的45.00%。其發(fā)病機制未完全明了，影響患者工作生活學(xué)習(xí)能力，缺乏針對性治療方法，醫(yī)療花費高。有研究表明，顱周肌筋膜組織持續(xù)的傷害性痛覺傳入在脊髓及三叉神經(jīng)核水平產(chǎn)生中樞敏化，這在慢性TTH的產(chǎn)生中起重要作用[1]。根據(jù)這一機制，采用頸部雙側(cè)半棘肌注射三磷酸腺苷二鈉注射液（ATP）模擬TTH頸部肌筋膜傷害性傳入增強建立TTH大鼠模型[2]，前期研究結(jié)果表明此模型科學(xué)可靠，簡單易于復(fù)制[3]，可用于評價中藥干預(yù)TTH療效[4]。風(fēng)府穴是臨床治療TTH常用腧穴。但既往研究多采用定性或視覺模擬評分法粗略定量評價臨床療效，精確度不佳。本研究通過記錄張頜反射（jaw-opening reflex，JOR）波幅及潛伏期，定量分析針刺風(fēng)府穴對TTH模型大鼠鎮(zhèn)痛療效，探索臨床針刺風(fēng)府穴治療TTH提供實驗學(xué)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重220～260 g，購于山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實驗動物中心[許可證號SCXK（魯）20130001]，實驗動物質(zhì)量合格證號：No.0014890。動物分籠飼養(yǎng)，自由飲水。SPF大鼠生長繁殖飼料，批號13040123，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2009-0012，北京市實驗動物飼料質(zhì)量合格證號No.11002900000991。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑

電子天平，大鼠固定器，大鼠手術(shù)臺，秒表，WZ-50C66T單通道微量注射泵（浙江史密斯醫(yī)學(xué)儀器有限公司），BioPAC多導(dǎo)生理信號采集分析系統(tǒng)，ATP（廣東天豐藥業(yè)有限公司，批號：120501，規(guī)格2mL∶20mg）臨用前用生理鹽水配制成1μmol/L溶液；10%水合氯醛（購于山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院）。

1.2.2 分組方法

分為4個組，分別是空白組（半棘肌注射生理鹽水）10只，模型組（半棘肌注射ATP）10只，風(fēng)府穴組（半棘肌注射ATP后針刺風(fēng)府穴）10只，假穴組（半棘肌注射ATP后針刺假穴）10只。

1.2.3 實驗步驟

1.2.3.1 造模方法采用大鼠頸部雙側(cè)半棘肌注射ATP造模法[3]。①腹腔注射10%水合氯醛3.5 mL/1000 g，麻醉程度以后爪疼痛刺激不引起躲避為準。②大鼠俯臥位，頸部備皮，消毒，從大鼠枕骨頂嵴后枕寰關(guān)節(jié)背凹陷處下0.5 cm開始，沿頸部正中縱向切開1.5～2.0 cm，分離出雙側(cè)半棘肌。再將大鼠仰臥位，沿頸部正中切口1.0～1.5 cm，分離出二腹肌前腹。③大鼠右側(cè)臥位，將兩根直徑150μm不銹鋼針刺激電極縱向插入舌右側(cè)，將兩根記錄電極插入右側(cè)二腹肌前腹肌肉內(nèi)，兩電極間距3～5 mm，以記錄舌刺激誘發(fā)的JOR；同時將兩臺單通道微量注射泵頭皮針插入雙側(cè)半棘肌。④模型組大鼠雙側(cè)半棘肌同時以20μL/min的速度泵入ATP，空白組大鼠同樣速度泵入生理鹽水，持續(xù)1min。

1.2.3.2 針刺方法風(fēng)府穴按照《實驗動物學(xué)》于大鼠枕骨頂嵴后枕寰關(guān)節(jié)背凹陷處取穴，向后下方斜刺2 mm持續(xù)捻轉(zhuǎn)行針，留針10min。假穴按照《實驗動物學(xué)》于大鼠枕外嵴外緣上方取穴，向前平刺2 mm，持續(xù)捻轉(zhuǎn)行針，留針10min。

1.2.3.3 JOR信號記錄待生理信號采集分析系統(tǒng)的波形基線穩(wěn)定后，給予舌電極電刺激。刺激參數(shù)：方波刺激，頻率為1 Hz，波寬200μs，強度0～10mA。記錄并測定JOR出現(xiàn)的波幅、潛伏期，連續(xù)測定3次，間隔2min，取其平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組內(nèi)比較采用配對t檢驗，組間比較采用協(xié)方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別刺激誘發(fā)大鼠JOR波幅的比較

實驗前后JOR波幅組內(nèi)比較，空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；模型組、風(fēng)府穴組和假穴組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。實驗后JOR波幅組間比較，風(fēng)府穴組較模型組增加，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），假穴組與模型組變化相似，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；風(fēng)府穴組較假穴組增加，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 不同組別刺激誘發(fā)大鼠JOR波幅比較（mA，s）

表1 不同組別刺激誘發(fā)大鼠JOR波幅比較（mA，s）

?

2.2 不同組別刺激誘發(fā)大鼠JOR潛伏期的比較

實驗前后JOR潛伏期組內(nèi)比較，空白組、模型組、假穴組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；風(fēng)府穴組實驗后JOR潛伏期延長差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。實驗后JOR潛伏期組間比較，風(fēng)府穴組較模型組延長差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），假穴組與模型組變化相似，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；風(fēng)府穴組與假穴組變化相似，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同組別刺激誘發(fā)大鼠JOR的潛伏期的變化（ms，±s）

表2 不同組別刺激誘發(fā)大鼠JOR的潛伏期的變化（ms，±s）

注：與模型組比較，*P＜0.01；與本組實驗前比較，#P＜0.05

組別只數(shù)實驗前實驗后空白組模型組風(fēng)府穴組假穴組10 10 10 10 8.370±1.350 7.517±0.573 7.627±0.635 8.980±1.642 8.277±1.300 7.420±0.610 8.233±0.710*#9.163±1.660

3 討論

頭頸部肌肉外周致敏是TTH患者最顯著的異常[5]，TTH患者較健康志愿者顱周肌筋膜敏感度增加，敏感度與TTH強度和頻率正相關(guān)[6-8]。JOR是一種在傷害和抗傷害研究中比較實用的模型，JOR的抑制作為鎮(zhèn)痛指標是可行的[9]。Rydenhag等[10]就通過電刺激牙髓引起JOR，并記錄到了二腹肌肌電和腦干誘發(fā)電位。因此，采用頸部半棘肌注射ATP增加頸部肌肉傷害性傳入，并通過神經(jīng)電生理記錄JOR的潛伏期及波幅的變化來反映肌筋膜痛敏感程度也是可行的。JOR波幅代表痛閾，潛伏期代表肌筋膜敏感性[9]，痛閾的提高說明動物對傷害性電刺激不敏感，起到鎮(zhèn)痛作用。為避免ATP溶液注入肌肉后局部壓迫導(dǎo)致頸部刺激引起疼痛，本研究設(shè)立半棘肌注射生理鹽水的空白組。

實驗結(jié)果顯示，空白組半棘肌注射生理鹽水不引起JOR波幅及潛伏期變化（P＞0.05）；模型組半棘肌注射ATP導(dǎo)致JOR波幅下降（P＜0.05），潛伏期見縮短趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；針刺風(fēng)府穴可見風(fēng)府穴組JOR波幅升高（P＜0.05），潛伏期延長（P＜0.05）；針刺假穴見JOR波幅升高（P＜0.05），潛伏期延長，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。由于大鼠不同個體間痛覺敏感性存在差異，導(dǎo)致基線水平不齊，本研究采用協(xié)方差分析進行組間兩兩比較。與模型組相比，風(fēng)府穴組波幅明顯升高（P＜0.01），假穴組未見顯著性差異（P＞0.05）；風(fēng)府穴組波幅較假穴組升高明顯（P＜0.01）。與模型組相比，風(fēng)府穴組潛伏期明顯延長（P＜0.01），假穴組未見顯著性差異（P＞0.05）；風(fēng)府穴組潛伏期與假穴組相比無顯著性差異（P＞0.05）。JOR波幅代表痛閾[9]，因此，針刺風(fēng)府穴可以提高痛閾，延長潛伏期，緩解TTH；而針刺假穴同樣可以提高痛閾，但較針刺風(fēng)府穴療效差，且不能明顯延長潛伏期。

目前中醫(yī)藥治療TTH以中藥、中成藥為主，有確切療效和相對優(yōu)勢。而針刺作為非藥物療法越來越受到重視。針刺治療TTH的臨床報道[11-12]，顯示出較好的療效。其中，針刺風(fēng)府穴對TTH有良好的緩解肌肉緊張、止痛的效果[13]。風(fēng)府穴屬督脈，為督脈、陽維脈交會穴。項后入發(fā)際一寸，大筋內(nèi)宛宛中。《傷寒論》，“尺寸俱浮者，太陽受病也。當(dāng)一二日發(fā)，以其脈上連風(fēng)府，故頭項痛而腰脊強”，肯定了頭項強痛與風(fēng)府有關(guān)?！端貑枴す强照摗吩?，“大風(fēng)頸項痛，刺風(fēng)府”，直接明確頸項強痛的病癥可以針刺風(fēng)府穴?！镀諠健め樉摹诽岢鲲L(fēng)府穴：“治頭痛，頸急不得回顧目眩……又云，主頭項急不可傾側(cè)?！薄夺樉拇蟪伞芬嘤蓄愃普撌觯爸鳌^痛，項急不得回顧，……頭中百病”。

《千金方》：“有阿是之法，言人有病痛，即令捏其上，若里當(dāng)其處，不問孔穴，即得便快或痛，即云阿是，灸刺皆驗，故曰阿是穴也?！北狙芯酷槾谭墙?jīng)非穴的假穴，雖然不是壓痛（敏感）點，但是位于疼痛局部，類似于阿是穴。針刺假穴可提高痛閾，緩解TTH，在一定程度上為阿是穴的臨床療效提供了實驗依據(jù)。針刺風(fēng)府穴可明顯提高閾值和延長潛伏期，但針刺假穴僅提高閾值，未明顯延長潛伏期，肯定了準確定位選取風(fēng)府穴在TTH中的特異性療效。

總之，針刺風(fēng)府穴，可以緩解TTH，療效優(yōu)于針刺非經(jīng)非穴的假穴。其療效機制之一是提高痛閾，降低頭頸部肌筋膜敏感性，可作為臨床治療TTH的要穴。但風(fēng)府穴其深層解剖結(jié)構(gòu)鄰近頸髓和延髓下段，針刺過深可能導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血或傷及頸髓和延髓生命中樞而危及生命。故針刺時，要嚴格掌握風(fēng)府穴的安全針刺深度和針刺方法。

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Influence of acupuncturing Feng-fu acupoint on jaw-opening reflex of ratswith tension-type headache

WU Hongyun1WANG Xiyou2WANG Fuwen3HOU Shuwei4
1.Department of Encephalopathy,Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Ji'nan 250014,China;2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Ji'nan 250014,China;3.Medical Research Institute of Shandong Academy of Medical Sciences,Shandong Province,Ji'nan 250062,China;4.Acumox and Tuina College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Ji'nan 250355,China

Ob jective To explore the influence of acupuncturing Feng-fu acupoint on amplitude and latency of jawopening reflex(JOR)of rats with tension-type headache(TTH).M ethods The TTH ratmodelwas prepared by injecting ATP into rats'bilateral semispinalis capitis.40 SPF-Wistar ratsweighting 220-260 g,halfmale and half female,were divided into four groups:blank group,model group,Feng-fu acupoint group and non-acpoint group.Change of pain threshold and sensitivity ofmuscle and fascia in head and neck was observed by making quantitative analysis on JOR amplitude and latency of TTH model rats.Resu lts No change of JOR's amplitude and latency was caused in blank group with NSinjected into semispinalis capitis(P＞0.05),JOR's amplitudewas decreased inmodel group with ATP injected(P＜0.05)and the shortened tendency of its latencywasnotsignificant(P＞0.05),JOR's amplitudewas increased and latency was shortened in Feng-fu acupoint group,JOR's amplitudewas increased in non-acupoint group(P＜0.05) and the extended tendency of its latency was not significant(P＞0.05).Compared withmodel group,JOR's amplitude and latency of Feng-fu acupoint group were increased remarkably(P＜0.01),by contrast,non-acupoint group had no significant difference(P＞0.05).Compared with non-acupoint group,JOR's amplitude of Feng-fu acupoint group was increased observably(P＜0.01),while latency was not(P＞0.05).Conclusion Acupuncturing Feng-fu acupoint could increase JOR's amplitude and extend its latency,in other words,it can increase pain threshold and decrease sensitivity ofmuscle and fascia in head and neck.

Feng-fu acupoint;Tension-type headache; Jaw-opening reflex;Acupuncture

R741.041

A

1673-7210（2014）08（b）-0036-04

2014-04-28本文編輯：張瑜杰）

山東省自然科學(xué)基金項目（編號ZR2011HL011）。

吳宏赟（1982.10-），男，碩士，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療頭痛的研究。

侯書偉（1956.5-），男，教授，主要從事經(jīng)絡(luò)腧穴理論與臨床應(yīng)用研究。