林奇泗，楊冬芝，牟杰

（徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇徐州221004）

GC-MS法研究深裂竹根七揮發(fā)性成分

林奇泗，楊冬芝，牟杰

（徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇徐州221004）

分析深裂竹根七的揮發(fā)性成分。分別用索氏提取器和水蒸氣蒸餾裝置提取深裂竹根七，并對提取物用GCMS聯(lián)用儀進(jìn)行測定，峰面積歸一化法測定各成分的相對含量。從深裂竹根七水蒸氣蒸餾提取物中鑒定了11種組分，占總峰面積的78.6%；從深裂竹根七索氏提取物提取物中鑒定了10種組分，占總峰面積的69.0%。兩種提取方法得到的揮發(fā)性成分主成分有一定不同，本研究為深裂竹根七的綜合開發(fā)提供了參考依據(jù)。

深裂竹根七；氣質(zhì)聯(lián)用；揮發(fā)性組分

深裂竹根七（Disporopsis perryi（Hua）Diels），又名黃腳雞、十樣錯(cuò)等，為百合科（Liliaceae）竹根七屬（Disporopsis）植物[1]，是一種民間常用的中藥，其根具有養(yǎng)陰潤肺、生津止渴等功效。多用于虛汗多咳、產(chǎn)后虛弱、月經(jīng)不調(diào)等癥，有的還用于感冒扁桃體炎、眼結(jié)膜炎等癥[2]。

目前對深裂竹根七的化學(xué)成分研究僅限于初步的探討，如《現(xiàn)代本草綱目》只記載深裂竹根七包含甘露糖、果糖等單糖及多糖成分[3]。Yang QX等闡述了深裂竹根七中所含有的幾種主要以甾體皂苷為主的化合物[4]。張素英對深裂竹根七根的化學(xué)成分進(jìn)行了研究[5]，從中確定了3種成分，分別是β-胡蘿卜苷，△2-（25R）-螺甾-3β-醇，（25R）-5β-螺甾-3β-醇。但對于深裂竹根七揮發(fā)性組分的研究較為滯后。

本研究分別用索氏提取器和揮發(fā)油提取器對深裂竹根七揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算各組分峰保留指數(shù)[6-7]，為深裂竹根七成分研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

QP5050A氣質(zhì)聯(lián)用儀：日本SHIMADZU公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋：浙江省嘉興市俊思儀器設(shè)備廠；HH-3數(shù)顯恒溫油浴鍋：江蘇金壇市江南儀器廠；SC-97自動(dòng)三重純水蒸餾器：上海亞榮生化儀器廠；BS110電子天平：德國Sartorius公司；PE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵：河南省太康縣科教儀器廠。

鄰苯二甲基-2甲基丙基酯、棕櫚酸、棕櫚酸甲酯、亞油酸乙酯、9，12-十八碳二烯酸、硬脂酸、棕櫚酸乙酯、C16-C30正構(gòu)烷烴對照品（純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98.0%，購自上海阿拉丁試劑公司），無水硫酸鈉（分析純，天津大茂化學(xué)試劑廠），實(shí)驗(yàn)用水為實(shí)驗(yàn)室自制三重蒸餾水，正己酸、正己烷均為分析純，購自山東禹王實(shí)業(yè)有限公司。

深裂竹根七（Disporopsis pernyi（Hua）Diels）藥材于2011年8月采自貴州省松桃縣，經(jīng)沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院賈景明教授鑒定，用水洗去浮土，再用去離子水沖洗2、3次，于40℃條件下烘干，粉碎過二號(hào)篩，密閉存放。

2 方法

2.1 提取與分析方法的考察

2.1.1 提取溶劑的考察

稱取深裂竹根七粗粉約5 g，精密稱定，共5份，分別加入20倍溶劑，溶劑依次為石油醚、乙醚、丙酮、正己烷和乙酸乙酯，采用索氏提取法在80℃的水浴鍋中提取8 h，計(jì)算得率，結(jié)果見圖1。

圖1 溶劑考察Fig.1 The investigation of the solvents

由圖1可知，石油醚提取所得的浸膏量比其他溶劑提取得到的浸膏量大，故采用石油醚作為提取溶劑較好。

2.1.2 色譜柱的選擇

氣相色譜分析過程中，毛細(xì)管柱固定相的種類對成分的分離有較大的影響。實(shí)驗(yàn)中比較了PEG-20M、OV-1701和HP-5三種色譜柱。結(jié)果表明，采用HP-5非極性毛細(xì)管色譜柱，能夠?qū)崿F(xiàn)對深裂竹根七中的脂肪酸和揮發(fā)油等低極性成分較好地分離，色譜峰數(shù)目較多，出峰時(shí)間合適，能夠滿足實(shí)驗(yàn)需要。

2.2 提取方法

2.2.1 索氏提取器法

取20 g深裂竹根七粗粉，加入石油醚200mL，用索氏提取器提取8 h。將所得提取液分別旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，再加入石油醚定容至1.0mL，用無水硫酸鈉干燥后密封保存，即得供試品溶液1。

2.2.2 水蒸氣蒸餾法

取20 g深裂竹根七粗粉，用水蒸氣蒸餾裝置提取8 h，餾出液經(jīng)石油醚萃取，并定容到1.0mL，用無水硫酸鈉干燥后密封保存，即得供試品溶液2。

2.3 氣相色譜條件

色譜柱為HP-5石英毛細(xì)管柱（0.25μm×0.25mm× 30m）；載氣為99.999%的氦氣；樣口溫度280℃；進(jìn)樣量1.0μL；分流比5∶1；流速1mL/min；升溫程序：在120℃下保持4mins，以10℃/min速度升溫至180℃，保持10mins，以5℃/min速度升溫至270℃并保持35min。

2.4 質(zhì)譜條件

離子源為電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度230℃；電子能量70 eV；氣相色譜質(zhì)譜接口溫度230℃；質(zhì)量掃描范圍m/z33～500。

2.5 色譜峰的鑒定方法

本研究采用GC-MS法對深裂竹根七揮發(fā)性組分進(jìn)行分離、分析和鑒定，通過檢索NIST107譜圖庫，并結(jié)合保留指數(shù)和對照品，對各色譜峰進(jìn)行了鑒別。各色譜峰的保留指數(shù)依據(jù)公式（1）進(jìn)行計(jì)算。

式中：t′R(x)、t′R(z)、t′R(z+n)分別代表待測物質(zhì)x和具有Z及Z+n個(gè)碳原子數(shù)正構(gòu)烷烴的相對保留時(shí)間；n= 1，2，……

3 結(jié)果與討論

供試品溶液1和供試品溶液2的GC-MS總離子流色譜圖分別見圖2，化合物的鑒定見表1。從深裂竹根七水蒸氣蒸餾提取物中鑒定了11種組分，占總峰面積的78.6%；從深裂竹根七索氏提取物提取物中鑒定了10種組分，占總峰面積的69.0%。

圖2 深裂竹根七不同提取物的總離子流圖Fig.2 Total ion chromatogram of different extracts of Disporopsis pernyi（Hua）Diels

表1 深裂竹根七兩種提取物的主要成分Table1 Major components of two extractions of Disporopsis pernyi

從結(jié)果可知，無論是水蒸氣蒸餾法還是索氏提取法所提取得到的組分都并不全面?？赡苡捎诤刻?，在索氏提取法所得提取物中未檢測到甲氧基丁香酚（Methoxyeugenol）和二十二烷（n-Tetracosane）；在水蒸氣蒸餾法所得提取物中未見棕櫚酸乙酯（Hexadecanoic acid，ethyl ester）。故提取方法對深裂竹根七提取物中揮發(fā)性組分的影響非常大。

4 結(jié)論

經(jīng)過NIST107譜庫比對、保留指數(shù)計(jì)算和對照品比對，最終鑒別了深裂竹根七中12種組分。在所鑒別的組分中，以脂肪酸及其酯類為主。經(jīng)過提取溶劑和提取方法的篩選，在氣相測定揮發(fā)性組分時(shí)，僅以譜庫進(jìn)行比對，所得結(jié)果不夠準(zhǔn)確，因?yàn)橄嗨平Y(jié)構(gòu)易產(chǎn)生混淆。相同化合物在相同性質(zhì)的色譜柱上，保留指數(shù)較為穩(wěn)定，具有參考意義。本研究為深裂竹根七的應(yīng)用與產(chǎn)品開發(fā)提供參考。

[1]錢信忠.中國本草彩色圖鑒[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982: 155-157

[2]王冠元,聶鳳禔.深裂竹根七化學(xué)成分研究[J].中成藥,2010,32 (11):1936-1938

[3]黃泰康.現(xiàn)代本草綱目[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2000:2681

[4]Yang Qingxiang,Xu Min,Zhang Yinjun,et al.Steroidal saponins from Disporopsis pernyi[J].Helv Chim Acta,2004,87(5):1248-1253

[5]張素英.深裂竹根七根化學(xué)成分的研究[D].貴州:貴州大學(xué),2006

[6]?KRBIE BD.Unified retention concept-statistical treatment of Kova′ts retention index[J].Journal of Chromatography A,1997(764): 257-264

[7]徐鑄德,趙如松,張曉東.由氣相色譜程序升溫?cái)?shù)據(jù)計(jì)算恒溫保留指數(shù)[J].色譜,1994,12(3):164-165

Analysis of the Volatile Components of Disporopsis perryi by GC-MS

LIN Qi-si，YANG Dong-zhi，MOU jie
（School of Pharmacy，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004，Jiangsu，China）

Analyze the volatile chemical constituents of Disporopsis perryi.The volatile chemical constituents were obtained by Naphtha extraction device and Soxhlet extraction device respectively，which were subjected to GC-MS analysis.Area normalization method was used to determine the relative content of each constituent. 11 components were identified in the steam distillation extract，representing78.6%of the total oil compositions；10 components were identified in the Soxhlet extraction device extract，representing 69.0%of the total oil compositions.There was remarkable difference of volatile components checked in the Disporopsis perryi among two extraction methods．It is helpful to provide reference data for Disporopsis perryi's comprehensive utilization.

Disporopsis perryi；GC-MS；volatile components

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.03.005

2013-07-31

江蘇省教育廳課題（10KJB350005）

林奇泗（1980—），男（漢），講師，博士，研究方向：藥物分析。