陳 威，趙東鳳，史紅娟，劉喜綱，常金花，劉翠哲

(河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000)

HPLC法測定梔子金花分散片中鹽酸小檗堿的含量*

陳 威，趙東鳳，史紅娟，劉喜綱，常金花，劉翠哲△

(河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000)

目的:建立梔子金花分散片中鹽酸小檗堿的含量測定方法。方法:采用HPLC法測定，色譜條件:Diamonsil-C18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.6%磷酸二氫鈉溶液(30:70)，流速為1.0ml/min，檢測波長為350nm。結(jié)果:鹽酸小檗堿在2.5-50μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9995;鹽酸小檗堿加樣回收率(n=6)為100.85%，RSD為3.7%;梔子金花分散片中鹽酸小檗堿平均含量為0.633%。結(jié)論:本研究建立的HPLC測定梔子金花分散片中鹽酸小檗堿含量的方法簡便、重復(fù)性好，可用于梔子金花分散片中鹽酸小檗堿的含量測定。

HPLC;鹽酸小檗堿;梔子金花分散片

梔子金花丸由梔子、黃連、黃芩、黃柏、大黃、金銀花、知母、天花粉等8味中藥組成，收載于《中國藥典》2010年版一部[1]。梔子金花丸的功能是清熱瀉火、涼血解毒，用于肺胃熱盛、口舌生瘡、牙齦腫痛、目赤眩暈、咽喉腫痛、吐血衄血、大便秘結(jié)。梔子金花丸的傳統(tǒng)劑型是水丸或蜜丸，存在服用量大、溶出慢等缺點(diǎn)，為此，將藥材提取后加輔料制成了梔子金花分散片[2]。黃連和黃柏是梔子金花分散片的有效成分，二者均具有清熱燥濕、瀉火解毒等作用， 且主要成分均為鹽酸小檗堿，控制鹽酸小檗堿的含量即可同時(shí)控制梔子金花分散片中兩味藥的含量。為了更好的控制梔子金花分散片的質(zhì)量，本研究參照文獻(xiàn)[3-5]，建立了HPLC測定梔子金花分散片中鹽酸小檗堿含量的方法，該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

1 儀器與試劑

JASCO高效液相色譜儀(UV-l5紫外可見檢測器，RU-1580泵，CKChom色譜工作站,日本分光);JA2003電子天平(北京精科天平);AG-245電子分析天平(瑞士METTLER公司);北利離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心有限公司);KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);鹽酸小檗堿對照品(批號(hào):110713-201212，中國藥品生物制品檢定所);梔子金花分散片(自制);乙腈(色譜純，天津協(xié)和昊鵬色譜科技有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Dimonsil-C18柱(4.6mm×150mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈-0.6%磷酸二氫鈉(30:70);檢測波長:350nm;流速:1.0ml/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取60℃減壓干燥4h的鹽酸小檗堿對照品5.0mg置于100ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解，放冷后加甲醇定容至刻度，得對照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液的制備:精密稱取研細(xì)的梔子金花分散片粉末135mg于50ml容量瓶中，加入適量70%甲醇，超聲40min，放冷，加70%甲醇定容，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液的制備:按處方制備缺少黃柏和黃連的空白樣品，精密稱取135mg，按照2.2.2供試品溶液的制備方法制備。

2.3 專屬性考察 精密吸取2.2項(xiàng)下的三種溶液各20μl，注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明鹽酸小檗堿與其它雜質(zhì)峰分離良好，鹽酸小檗堿保留時(shí)間為10.1min，且陰性溶液無干擾，結(jié)果見附圖。

附圖 鹽酸小檗堿液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取2.2.1中的對照品儲(chǔ)備溶液0.5ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，用甲醇定容至10ml容量瓶中，按2.1的色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，得鹽酸小檗堿回歸方程:Y=71249X+84810，r=0.9995表明鹽酸小檗堿在2.5-50μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取2.2.1中的對照品儲(chǔ)備液4ml置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定鹽酸小檗堿的峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿RSD值為0.67%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.2.2中的供試品溶液1份，分別放置0、2、3、4、5、6、8、24h后進(jìn)樣，測定峰面積，鹽酸小檗堿峰面積的RSD為1.10%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密稱取梔子金花分散片粉末6份，按照2.2.2項(xiàng)供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，并隨行對照品溶液，用外標(biāo)一點(diǎn)法測得鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見表1。鹽酸小檗堿平均含量為0.63%，RSD為2.6%(n=6)，表明重復(fù)性良好。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的梔子金花分散片粉末6份置于25ml容量瓶中，分別精密加入44.8μg的鹽酸小檗堿對照品，按供試品溶液制備方法制備后，按照2.1的色譜條件進(jìn)樣，測得鹽酸小檗堿的平均加樣回收率(n=6)為100.85%，RSD=3.7%，見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定 取自制梔子金花分散片粉末3份，按2.2.2供試品溶液的方法制備，按2.1的色譜條件進(jìn)樣，外標(biāo)一點(diǎn)法測定3次，鹽酸小檗堿的含量分別為:0.63%、0.64%和0.64%。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道鹽酸小檗堿的色譜峰有拖尾現(xiàn)象[6]。本研究在實(shí)驗(yàn)中亦發(fā)現(xiàn)，鹽酸小檗堿的色譜峰拖尾比較嚴(yán)重。本研究比較了不同比例組成的流動(dòng)相，如乙腈-0.05%磷酸、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.5%冰乙酸溶液等，發(fā)現(xiàn)峰形不好。加入磷酸二氫鈉作為掃尾劑去除拖尾現(xiàn)象，但效果不佳，并且磷酸二氫鈉加入量過多會(huì)造成峰的分離效果不好，最后確定磷酸二氫鈉的濃度為0.6%，雖然峰行略有拖尾，但分離良好。研究過程中發(fā)現(xiàn)，鹽酸小檗堿在250nm、265nm和350nm處均有吸收，選擇350nm作為檢測波長效果較好。在制備供試品溶液時(shí)，分別采用不同的時(shí)間(20、30、40、50min)超聲提取梔子金花分散片中的鹽酸小檗堿，發(fā)現(xiàn)超聲40min鹽酸小檗堿提取完全。

本研究所建立的含量測定方法色譜峰分離良好無干擾，重復(fù)性良好，加樣回收率合格，且采用超聲方法提取鹽酸小檗堿操作簡單方便，可用于梔子金花分散片中鹽酸小檗堿的含量測定。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:2010年版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.879-880.

[2]趙文普，崔英慧，劉喜綱，等.梔子金花分散片的制備[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32(8):584-587.

[3]郭小龍，蔡敏，陳勇，等.液相色譜法同時(shí)測定梔子金花丸中梔子苷和鹽酸小檗堿的含量[J].湖北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007，29(3):283-285.

[4]李中文，蔡紹松，魏紅，等.桂林西瓜霜噴劑中鹽酸小檗堿快速含量測定方法的研究[J].藥物分析雜志，2009，29(4): 659-662.

[5]王雪芹，黃海偉，俞如英.鹽酸小檗堿及其相關(guān)物質(zhì)分離方法的研究[J].藥物分析雜志，2002，22(1):67-69.

[6]孫行之，楊秀裴，余玉木，等.HPLC同時(shí)測定散瘀消腫膏中3種有效成分的含量[J].海峽藥學(xué)，2010，22(11):79-81.

DETERMINATION OF BERBERINE HYDROCHLORIDE CONTENT IN ZHIZIJINHUA DISPERSIBLE TABLET BY HPLC

CHEN Wei, ZHAO Dong-feng, SHI Hong-juan, et al

(Hebei Key Laboratory of Study and Exploitation of Traditional Chinese Medicine, Institute of Chinese Materia Medica, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To establish a method for determining of berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet.Methods:HPLC was used to determine berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet. The chromatographic column was Diamonsil-C18(4.6×150mm, 5μm), with acetonitrile-0.6% NaH2PO4(30: 70) as mobile phase, fl ow rate: 1.0ml/min, detection wavelength: 350nm.Results:The linear range of berberine hydrochloride was 2.5-50μg (r=0.9995); the average recovery of berberine hydrochloride was 100.85%, RSD was3.7% (n=6). The average content of berberine hydrochloride in ZhiziJinhua Dispersible Tablet was 0.633%.Conclusions:Determination of berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet by HPLC in this study is simple and reproducible, and can be used for determining berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet.

HPLC; Berberine hydrochloride; ZhiziJinhua Dispersible Tablet

R917

A

1004-6879(2014)01-0017-03

2013-06-04)

* 承德市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(201021020)

△ 通訊作者