李觀林

(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司, 江蘇 南京 210038)

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山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類的研究進(jìn)展

李觀林

(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司, 江蘇 南京 210038)

綜述山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類的相關(guān)研究進(jìn)展，分別闡述環(huán)烯醚萜苷類的化學(xué)成分、環(huán)烯醚萜苷的提取分離和含量測定及其藥理作用，為今后開展相關(guān)研究提供參考。

山茱萸；環(huán)烯醚萜苷類；化學(xué)成分；提取分離；含量測定；藥理作用

山茱萸(CornusofficinalisSieb. et Zucc.)，別稱山萸肉、山芋肉，具補(bǔ)益肝腎、收斂固澀、固精縮尿止帶止崩、生津止渴之功效，用于腰膝酸痛、頭暈耳鳴、內(nèi)熱消渴、遺精滑精、崩漏帶下等證。環(huán)烯醚萜苷類成分是山茱萸中的主要成分之一，近年來有關(guān)山茱萸中的環(huán)烯醚萜苷類的總結(jié)并不多見，本文就環(huán)烯醚萜苷類的化學(xué)成分、環(huán)烯醚萜苷的提取分離和含量測定及其藥理作用進(jìn)行綜述。

1 山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)成分

山茱萸中的環(huán)烯醚萜苷類化合物主要有：莫諾苷(morroniside)、7-O-甲基莫諾苷(7-O-methylmorroniside)、馬錢苷(loganin)、7-脫氫馬錢素(7-dehydrologanin)、馬鞭草苷(verbenalin)、獐牙菜苷(sweroside)及山茱萸新苷 (cornuside)。

2 環(huán)烯醚萜苷的提取分離和含量測定

2.1 提取分離方法

環(huán)烯醚萜類成分極性較大，其水提物中雜質(zhì)較多。為了提高總苷中有效成分的含量，皮文霞等[1]以莫諾苷和馬錢素及總固形物為評價指標(biāo)，考察比較傳統(tǒng)分離苷類的吸附劑活性炭與現(xiàn)在常用的大孔樹脂富集山茱萸總苷中有效成分的工藝條件及參數(shù)，兩者相比，大孔樹脂富集山茱萸總苷優(yōu)于活性炭，前者對莫諾苷和馬錢素的洗脫率約為96%，后者約為85%。并且，大孔樹脂以30%乙醇洗脫液中兩苷含量最高。李小娜等[2]制備出馬錢苷和莫諾苷對照品。結(jié)合大孔樹脂富集、硅膠柱色譜分離、制備，HPLC法對山茱萸水提醇沉提取物進(jìn)行分離純化，通過波譜學(xué)方法鑒定出馬錢苷和莫諾苷，用歸一化法定量，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%，所得馬錢苷和莫諾苷可作為中藥定性、定量分析使用的對照品。

2.2 含量測定方法

山茱萸總苷的含量測定方法主要有高效液相色譜法和紫外分光光度法。劉成紅等[3]建立了山茱萸有效成分馬錢苷的高效液相色譜分析方法。色譜柱為分析柱Shim-pack VP-ODS (250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水(15∶85)為流動相。該方法準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，適用于山茱萸的質(zhì)量控制。杜小偉等[4]報道了高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地制山茱萸中馬錢苷的含量。色譜柱為SUPELCO C18柱(5μm，4.6mm×250mm)，流動相為乙腈-水(15∶85)。測定結(jié)果可以看出各地制山茱萸的馬錢苷含量比較穩(wěn)定，在0.506% ～0.917%，可以作為評價制山茱萸質(zhì)量及含制山茱萸中成藥質(zhì)量的參考。皮文霞等[5]采用HPLC法及UV法共同監(jiān)控山茱萸制劑提取純化工藝。HPLC法采用Lichrospher C18柱4.6mm×250mm，甲醇-水(30∶70)為流動相，檢測波長240 nm。UV法中掃描波長為240nm。兩法對照品均為莫諾苷和馬錢苷,結(jié)果為山茱萸藥材的乙醇提取物、醇提水沉物以及過大孔樹脂的洗脫物中兩苷含量分別為2.8%、15.6%及46.9%。UV掃描圖可看出，經(jīng)乙醇提取及水沉以后的樣品內(nèi)含雜質(zhì)較多，而經(jīng)大孔樹脂洗脫后，總苷的掃描圖形狀已與莫諾苷及馬錢子苷接近。將UV與HPLC相結(jié)合可更直觀地監(jiān)控山茱萸總苷提取純化的每一步驟。

3 藥理作用

3.1 降血糖及治療糖尿病并發(fā)癥

山茱萸環(huán)烯醚萜總苷有明顯的降血糖作用，對糖尿病腎病及糖尿病血管并發(fā)癥均有良好保護(hù)作用[6]。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷具有較好的抗非酶糖化作用， 能抑制糖化終產(chǎn)物(AGEs)的沉積，延緩糖尿病腎病的發(fā)生。AGEs在糖尿病并發(fā)癥的形成中往往起重要作用。AGEs具有不可逆性，在體內(nèi)蓄積將引起廣泛的蛋白質(zhì)交聯(lián)，誘發(fā)各種病變,如膠原蛋白的異常交聯(lián)使膠原纖維剛性增加、彈性降低、細(xì)胞外基質(zhì)增生等。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷能抑制糖尿病大鼠腎皮質(zhì)AGEs的形成，使其受體mRNA表達(dá)水平下降，具有減輕糖尿病腎病的作用[7]。此外還有研究顯示，環(huán)烯醚萜總苷能抑制高糖或AGEs對腎小球系膜細(xì)胞(GMC)的過度增殖及細(xì)胞周期變化，修復(fù)高糖或AGEs致GMC的Na+-K+-ATP酶活性降低[8]，提高SOD和GSH-Px活力，降低ROS及MDA水平，增強(qiáng)抗氧化能力。說明其能通過抑制氧化應(yīng)激來對抗AGEs致GMC的損傷作用，從而達(dá)到防治糖尿病腎病的目的。此外，山茱萸中的環(huán)烯醚萜總苷對Ⅱ型糖尿病的視網(wǎng)膜毛細(xì)血管病變具有一定的改善作用，能顯著升高糖尿病大鼠載脂蛋白A(Apo-A)水平 ，降低糖尿病大鼠血清總膽固醇 (CHOL)、甘油三脂 (TG)、低密度脂蛋白 (LDL-C)、載脂蛋白B(Apo-B)水平。對糖尿病引起的視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(EC)數(shù)目明顯增加 ，周細(xì)胞(PC)數(shù)目明顯減少，從而導(dǎo)致的E/P值上升，環(huán)烯醚萜總苷能顯著降低糖尿病大鼠視網(wǎng)膜毛細(xì)血管的E/P值[9]。

3.2 免疫抑制作用

山茱萸總苷抑制免疫主要作用于TL-2/TL-2受體系統(tǒng)，此與環(huán)孢霉素A的作用機(jī)理相似，有研究發(fā)現(xiàn)，二者在淋巴細(xì)胞增殖等方面有協(xié)同抑制作用[10]。山茱萸總苷可抑制T、B淋巴細(xì)胞增殖，抑制T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-2、T淋巴細(xì)胞表面CD3、CD4、CD8的表達(dá)及提高CD4/CD8的比值[11]。此外，山茱萸總苷對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎也有明顯的防治作用，其機(jī)理為抑制CⅡ特異性體液免疫和Th1型細(xì)胞免疫[12]。

3.3 抗炎作用

付桂香等[13]采用弗氏完全佐劑形成大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)模型，考察山茱萸環(huán)烯醚萜苷對T淋巴細(xì)胞增殖、炎性細(xì)胞因子IL-1、TNF-α、IL-6及遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)、前列腺素E2(PGE2)的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)山茱萸環(huán)烯醚萜苷具有較好的免疫抑制抗炎作用，其機(jī)理可能是抑制了炎性介質(zhì)IL-1、IL-6、TNF-α和PGE2的產(chǎn)生。李建昌等[14]也發(fā)現(xiàn)，山茱萸總苷的抗炎作用與其抗氧化作用相關(guān)。

3.4 其它作用

有文獻(xiàn)報道[15]，山茱萸環(huán)烯醚萜總苷能夠抑制神經(jīng)細(xì)胞tau蛋白過度磷酸化，保護(hù)細(xì)胞微管結(jié)構(gòu)，因此可能具有治療隔海馬穹隆傘切斷擬Alzheimer病(AD)的應(yīng)用前景。還有文獻(xiàn)報道，馬鞭草苷(環(huán)烯醚萜苷成分)具有興奮子宮，并促進(jìn)哺乳動物乳汁分泌的藥理作用。

4 結(jié)語

綜上所述，山茱萸作為我國傳統(tǒng)中藥，有悠久的應(yīng)用歷史，其在醫(yī)藥和保健品等方面應(yīng)用的需求量逐年增加。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷作為山茱萸中的主要有效成分，已越來越受到重視，尤其能顯著改善糖尿病血管并發(fā)癥，若考慮開發(fā)成相應(yīng)的藥物制劑，將具有廣闊的市場前景。

[1] 皮文霞,蔡寶昌,潘揚(yáng),等.大孔樹脂與活性炭富集山茱萸總苷的實驗研究[J].中國中藥雜志,2002,27(8):583-584.

[2] 李小娜,霍長虹,殷瑋,等.山茱萸中馬錢苷和莫諾苷對照品的制備[J].中草藥,2006,37(8):1168-1170.

[3] 劉成紅,魏萍,張淑蘭.高效液相色譜法測定山茱萸中馬錢苷的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報, 2005,21(2):144-146.

[4] 杜小偉,范力力,王京輝,等.不同產(chǎn)地制山茱萸中馬錢苷的含量測定[J].中國中藥雜志,2006,31(17):1466-1467.

[5] 皮文霞,蔡寶昌. HPLC法及UV法共同監(jiān)控山茱萸制劑提取純化工藝[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐,2003,17(4):58-59.

[6] 許惠琴,朱荃.山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對實驗性糖尿病腎病變的保護(hù)作用[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2003,19(6):342-345.

[7] 許惠琴,郝海平,皮文霞,等.山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對糖尿病大鼠腎皮質(zhì)糖化終產(chǎn)物及其受體mRNA表達(dá)的影響[J].中藥藥理與臨床,2003,19(4):9-12.

[8] 許惠琴,劉洪,沈健,等.山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對高糖或AGEs培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞增殖和Na+-K+-ATP酶活性的影響[J].中藥藥理與臨床,2006,22(6):27-29.

[9] 曹亮,金艷,錢莉亞,等.環(huán)烯醚萜總苷對Ⅱ型糖尿病大鼠血脂及視網(wǎng)膜毛細(xì)血管病變的影響[J].中國天然藥物,2005,3(4):252-256.

[10] 李建民,周勇,項靜辰,等.山茱萸總苷對正常小鼠T淋巴細(xì)胞免疫功能影響的實驗研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2000,23(6):30.

[11] 李建民,周勇,張麗,等.山茱萸總苷對TUVEC表達(dá)ICAM-1、CD44的影響[J].中國免疫學(xué)雜志,2000(16):604.

[12] 郭麗麗,周勇,王旭丹,等.山茱萸分離提取物對脾淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2001,24(3):38-40.

[13] 付桂香,李建民,周勇,等.山茱萸總苷抗炎免疫抑制作用及其機(jī)理的大鼠實驗研究[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2007,27(4):316-320.

[14] 李建昌.山茱萸總皂苷提取純化及其體外抗氧化性研究[D]. 西安：陜西師范大學(xué),2006.

[15] 褚燕琦,李瑋,張?zhí)m,等.山茱萸環(huán)烯醚萜苷對蛋白磷酸酶抑制劑岡田酸擬阿爾采末病細(xì)胞模型的作用[J].中國藥理學(xué)通報,2006,22(8):960-963.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2014-05-04

李觀林(1988-)，男，正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司工程師,研究方向為活性藥物篩選。

R285.6

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1673-2197(2014)18-0048-02